Ezrin蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达及其意义

陈志雄 黄 琼 陈小希

（1武汉大学人民医院老年病科，2眼科，武汉430060；3湖北省地质职工医院，武汉430072）

眼睑基底细胞癌（basal cell carcinoma，BCC），是发生于眼睑的最常见的恶性肿瘤，发生率分别位居第一和第二位。好发于下睑及内、外眦部［1］。基底细胞癌是低度恶性肿瘤，早期诊断和及时治疗，可保存眼睑功能和视力，因此应力求早期诊断、早期治疗。

Ezrin是ERM蛋白家族中研究最多的一个成员，活化的Ezrin蛋白具有连接细胞膜与肌动蛋白丝，参与控制细胞的形态建成、黏附、运动及为细胞的增殖和生存转换生长信号等功能［2］。多项研究表明Ezrin的表达水平与多种肿瘤的侵袭力、转移、临床预后有密切关系［3，4］。

采用免疫组织化学方法研究Ezrin蛋白在眼睑基底细胞癌组织中的表达，探讨Ezrin蛋白在BCC发生、发展机制中的作用，为治疗基底细胞癌提供理论依据。

材料和方法

1．材料

1．1标本来源

收集武汉市中心医院和武汉大学人民医院病理科2002－2009年手术切除及活检的眼睑基底细胞癌（basalcell carcinoma，BCC）标本共20例，另取癌周围正常组织5例作对照。基底细胞癌发病年龄20－68岁。所有标本均经10%甲醛固定，常规HE染色，光镜观察，病理检查确诊。

1．2主要试剂

（1）浓缩型兔抗人Ezrin蛋白多克隆抗体（北京中山生物技术有限公司）；（2）超敏即用型S－P通用型免疫组织化学试剂盒（福州迈新生物有限公司）；（3）显色试盒及多聚赖氨酸（北京中山生物技术有限公司）。

2．方法

2．1常规HE染色

取材、固定、脱水、透明、切片和HE染色。

2．2免疫组织化学S－P法检测Ezrin抗原

主要步骤：组织切片5μm，常规脱蜡至水，蒸馏水洗；3%过氧化氢，37℃孵育10min以抑制内源性过氧化物酶活性，PBS洗4×5min；p53采用微波抗原修复（3档，10min），PBS洗4×5min；正常羊血清37℃孵育10min以减少非特异性反应；一抗37℃孵育1h，PBS洗4×5min；生物素标记的二抗，37℃孵育10min，PBS洗4×5min；链霉菌抗生物素蛋白－过氧化物酶复合物37℃孵育10min，PBS洗4×5min；DAB显色液显色，自来水冲洗终止反应；苏木精复染，脱水，透明，封片。用PBS代替一抗作为阴性对照。

3．免疫组织化学结果判断

3．1Ezrin蛋白以胞膜或胞浆出现棕黄色颗粒为阳性反应。阴性对照除细胞核染成蓝色外，胞核和胞浆内无棕黄色反应物。

3．2采用HPIAS－2000高清晰度彩色病理图文报告管理系统（同济千屏影像公司）对Ezrin蛋白的表达进行定量分析，每张切片随机选取5个完整而不重叠的高倍镜视野（×400），测定每个视野下阳性反应的平均光密度、阳性反应面积和所有细胞总面积，计算阳性面积率。以每例5个视野的平均光密度、阳性面积率的平均值作为该例的测量值。

（阳性面积率＝单位面积中阳性反应的总面积／单位面积中细胞的总面积×100%）

4．统计学处理

对各组免疫组织化学反应阳性颗粒的平均光密度、阳性面积率作单因素方差分析和SNK－q检验，检验水准α为0．05。

结 果

1．Ezrin蛋白的表达

基底细胞癌组织中可见癌细胞膜或胞浆内有密集分布的棕黄色颗粒，Ezrin蛋白表达强（图1）；癌旁组织的细胞胞浆内可见少量的棕黄色颗粒，Ezrin蛋白表达弱（图2）。图像分析结果经q检验，眼睑基底细胞癌与癌旁组织之间，Ezrin蛋白的平均光密度及阳性面积率有显著性差异（P＜0．05）见表1。

2．Ezrin蛋白表达与基底细胞癌临床病理特征的关系

基底细胞癌中Ezrin蛋白表达阳性率与是否复发见表2。

图1 Ezrin蛋白的表达 基底细胞癌组织中可见癌细胞膜或胞浆内有密集分布的棕黄色颗粒，Ezrin蛋白表达强（SP×200）。图2Ezrin蛋白的表达 癌旁组织的细胞膜或胞浆内可见少量的棕黄色颗粒，Ezrin蛋白表达弱（SP×200）。Fig．1The expression of Ezrin protein in eyelid basal cell carcinoma．There were plenty of brown particles in the cytoplasm，which showed Ezrin protein expressed strongly．S－P×200Fig．2The expression of Ezrin protein in cancer side tissue．There were few brown particles in the cytoplasm ，which showed Ezrin protein expressed weakly．S－P×200

表1 基底细胞癌与癌旁组织Ezrin蛋白表达的平均光密度和阳性面积率（¯x±s）Table 1 The average optical density and the rate of positive area of Ezrin蛋白in eyelid basal cell carcinoma and cancer side tissue（¯x±s）

表2 Ezrin蛋白阳性表达与基底细胞癌临床病理特征的关系Table 2 Ezrin protein positive expression with the relationship of basal cell carcinoma the clinical and pathological features

讨 论

眼睑基底细胞癌是眼睑恶性肿瘤中最常见的一种，虽然发病缓慢。但其生物学行为仍有自身特点［5－7］。BCC（basal cell carcinoma）一 般 只 局 部 侵袭，很少转移，但若不及时治疗，肿瘤可侵及眼轮匝肌、睑板和眶骨，并可经眼眶向颅内侵犯。

Ezrin蛋白（又称为cytovillin、p81或villin－2）是在2004年发现的一种膜－细胞骨架连接蛋白，具有维持细胞形态和运动、连接黏附分子及调节信号转导等功能。大量研究表明Ezrin蛋白作为近年在肿瘤转移研究中的相关蛋白，在很多肿瘤组织中都有异常表达，可能与促进肿瘤侵袭转移有关［8－10］。

实验研究表明Ezrin蛋白与肿瘤的发生发展关系密切。研究表明Ezrin蛋白参与肿瘤细胞的迁移、发展，Ezrin蛋白的活化引起肿瘤细胞吞噬能力增强，获得耐药性以及凋亡抵抗［11－13］。

研究发现，多种肿瘤中存在Ezrin蛋白的异常表达，Ezrin蛋白的异常表达往往与肿瘤的转移相关。一些研究发现，Ezrin表达增高可以促进肿瘤转移，与肿瘤预后不良密切相关［14，15］。

实验结果显示：20例眼睑基底细胞癌组织中Ezrin蛋白表达水平明显高于癌旁组织，差异有显著性（P＜0．05），实验结果表明Ezrin蛋白的过度表达可促进肿瘤细胞过度增殖，导致肿瘤的形成，我们推测：Ezrin蛋白可能参与眼睑基底细胞癌的发生，但其确切机制有待进一步探讨。另外我们经过分析发现：在20例眼睑基底细胞癌中，其中8例复发，在复发的8例中就有6例Ezrin蛋白表达阳性，在复发的Bcc组织中，Ezrin蛋白阳性表达率均明显高于无复发者，二者差别有显著性（P＜0．05）。由此可见，Ezrin蛋白的表达与肿瘤的复发有密切关系，进一步提示：Ezrin蛋白表达水平是反映肿瘤进展程度的一个重要因素。

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