脱氧胆酸在结直肠癌演进中作用的研究现状

2012-12-08 09:35罗沈晖曹海龙王邦茂
药品评价 2012年36期
关键词:胆酸胆汁酸细胞系

罗沈晖 曹海龙 王邦茂

天津医科大学总医院消化科

高脂肪饮食是结直肠癌发病的高危因素,它可以增加肠腔内次级胆酸,特别是脱氧胆酸(DCA)的含量。DCA在结直肠癌的演进中扮演着重要的角色。大量研究表明其具有致癌与促癌作用[1],但相关致病机制并不明确,现就DCA在结直肠癌发生中研究进展作一综述。

1 脱氧胆酸简介

DCA为次级胆汁酸之一。肝细胞以胆固醇为原料合成初级胆汁酸,起促进肠道中脂类物质消化吸收的作用。初级胆汁酸在末端回肠及结肠中厌氧菌的作用下转变为次级胆汁酸。其中初级胆汁酸包括胆酸和鹅脱氧胆酸,次级胆汁酸包括DCA及石胆酸。部分次级胆汁酸可通过肠肝循环被肠道有效的重吸收,其余随粪便排出体外。

2 基于人群的流行病学研究

流行病学资料显示,正常人粪便中的DCA含量低于结直肠癌或腺瘤病人,粪便DCA的升高能明显促进结直肠肿瘤增大,左半结肠表现尤为明显[2]。有研究者发现,结直肠腺瘤病人血清中的DCA含量增高,与肠腺窝基底层细胞程序性凋亡相关[3]。一项Meta分析[4]结果显示,胆囊切除后肠道内次级胆汁酸浓度升高,结直肠癌发病风险也会随之增加,亚组分析显示女性和右半结肠的发病风险更显著。因此,有研究者提出胆囊切除术是大肠癌发病的危险因素之一。至于胆囊切除术能否增加结直肠腺瘤的发病率仍存在争议[5,6]。肠道中次级胆酸含量能随着脂肪摄入的增加而升高,研究表明高脂饮食也可促进结直肠癌的发生发展[7]。

3 实验研究

3.1 细胞实验研究

3.1.1 脱氧胆酸与氧族氮族应激 DCA可诱导活性氧簇(ROS)和活性氮簇(RNS)的产生,肠上皮暴露于高浓度DCA可造成DNA的损伤,基因组稳定性受到破坏,修复酶功能受影响,使基因突变率增加,促进了结直肠癌的发生[8,9]。基因组不稳定主要表现为异倍体的出现、染色体内不稳定和基因点突变[10]。有人用DCA处理BCS-TC2细胞系,发现细胞分离、细胞膜失对称、染色质浓缩、DNA降解,2h内即出现细胞凋亡[11]。Kong等[12]发现DCA可造成miRNAs作用失调,发挥促肿瘤形成作用,结直肠肿瘤细胞生长、迁移和侵袭作用受高表达的miR-199a-5p抑制,细胞周期相关的蛋白CAC1受到miR-199a-5p调节。DCA通过抑制miR-199a-5p作用和(或)促进CAC1表达增高,达到促肿瘤形成的作用。

多个学者研究发现,脱氧胆酸通过NAD(P)H氧化酶(使蛋白激酶B、丝裂原活化蛋白激酶和p38及下游的转录因子核内激活蛋白AP活化)和PLA2诱导的氧族氮族应激除了造成基因损伤改变DNA修复相关蛋白结构,还能激活NF-κB,调控抗凋亡基因,造成线粒体损伤影响细胞自噬能力。连续性的作用使得正常结肠细胞基因稳定性发生改变,突变的细胞发生选择性增殖,通过非整倍体化、基因突变与增殖的连锁反应作用使细胞发生癌变[13,14]。Schlottman等学者研究发现DCA以浓度和时间依赖性的方式作用于多种结肠癌细胞系,短时间内作用能诱导细胞凋亡,但长时间引起细胞增殖失控、凋亡抑制,打破了增殖和凋亡的平衡,最终引起稳态破坏进而发生恶变[15]。另外,Rial等[16]通过用DCA处理HCT116、HT29细胞系发现CXCL8 表达增高,CXCL8与AP-1、NF-κB相结合使细胞侵袭性增强。

3.1.2 脱氧胆酸与细胞信号转导通路

(1)脱氧胆酸与法尼酯X受体:法尼酯X受体(FXR)首次于1995年由Forman在大鼠肝cDNA文库中分离 ,FXR信号通路拥有自身调节环,初级及次级胆汁酸能激活不同构象的FXR,且具有不同的作用[17]。作为一种胆汁酸受体,FXR在胆汁酸合成、转运和排泄中发挥了重要作用。Maran[18]对FXR基因敲除小鼠的研究显示,在FXR基因敲除小鼠的结肠中β-catenin、c-Myc和cyclinD1蛋白含量提高,增强了结肠细胞增殖能力。Lax等[19]研究发现结肠癌肠黏膜中FXR受体表达明显低于未发生不典型增生的黏膜,这可能反映了对潜在致癌的胆汁酸的防御机制的缺陷。体外细胞系的研究发现人结肠癌细胞系Caco-2和HT-29均出现FXR表达下调,而且分化程度越低的细胞系,其表达程度也越低,而在未分化细胞系SW480和转移来源的SW620细胞系中未发现FXR表达[20]。FXR基因的缺失和启动子甲基化的静默作用,均能导致FXR mRNA的低表达。另外,Silva等[21]研究得出低浓度的DCA(10 Amol/L)可通过FXR 促进乳腺癌细胞MDA-MB-231 的生长和转移。DCA能否通过影响FXR途径促进结直肠癌演进及其相关机制需大量研究进行证实。

(2)脱氧胆酸与Wnt通路:Wnt/β-Catenin信号转导通路在生物发育、细胞转运及细胞凋亡等生命过程中发挥重要作用,其异常活化在多种人类肿瘤的发生、发展中发挥了重要作用。Wnt为细胞间的一种分泌蛋白,能传递细胞信号至糖原合成酶激酶3(GSK-3β)。GSK-3β是能使β连环蛋白(β-catenin)发生磷酸化的丝氨酸苏氨酸激酶。正常状态下,GSK-3β、β-catenin与APC、轴蛋白形成蛋白复合体。这一多蛋白复合物中任何一个成分的改变,均可导致β-catenin降解障碍,从而激活Wnt途径。未磷酸化β-catenin可调控下游基因的过度表达,如环氧化酶-2(COX-2)、细胞周期蛋白(CyclinD1)等。β-catenin、尿激酶型纤溶酶原激活剂及其受体(uPA/uPAR)和CyclinD1在结肠癌中过度表达,同时β-catenin和E-钙黏附分子(E-cadherin)分离使细胞间黏附性降低,都与肿瘤的生长、侵润及转移密切相关。Pai等[22]发现,低浓度DCA(5 and 50 microM)能显著促进SW480细胞β-catenin相关途径的产生,从而增强细胞增殖与侵袭能力。有学者发现DCA诱导产生的β-catenin还能通过调节孤核受体Nur77,以增强HCT116细胞的增殖和迁移能力[23]。

(3)脱氧胆酸与EGFR通路:经典的EGFR通路主要有两个:丝裂原激活蛋白酶途径(Ras/Raf/MEK/ERK/MAPK通路)与磷脂酰基醇3激酶(PI3K)途径。DCA产生抑制凋亡的效应依赖于EGFR的活化,主要是通过干扰细胞膜的结构而激活受体,产生下级级联反应[24]。研究发现DCA能够诱导酪氨酸磷酸化且以配体依赖的方式激活酪氨酸激酶的EGFR信号通路,激活Ras/Raf/MEK/ERK/MAPK通路,活化AP-1以介导细胞增殖与分化[25];还可以活化PI3K/Akt/I-κB/NF-κB途径,调节下游靶分子如Caspase家族和NF-κB转录因子,进而调控细胞增殖和凋亡[13]。Lee等[14]研究发现,DCA能够通过激活EGFR/PKC/Ras/Raf-1/MEK1/ERK/CREB,PI3/Akt/IkappaB/NF-κB和p38/MSK1/CREB多重通路,上调HM3结肠癌细胞的MUC2黏蛋白的转录,而JNK/c-Jun/AP-1通路抑制这一作用,这些研究结果为胆汁酸调节黏蛋白基因提供了新的分子机制,可能有助于进一步说明DCA的致癌作用。另外,Zhu等[26]发现DCA能通过PKC途径诱导激活COX-2,基质中尤以癌相关成纤维细胞为主的COX-2的激活能明显增加结直肠癌细胞的增殖能力及侵袭性。

3.2 动物实验研究

3.2.1 正常鼠模型 Bernstein等[27]用0.2%的DCA食物喂养诱导野生B6.129PF2/J小鼠发生结肠炎,给药2个月时小鼠开始出现轻度炎症反应,8个月后小鼠生长明显受限,结肠组织中硝基酪氨酸表达显著,诱发小鼠结肠癌。Payne等[1,28]用含0.2%DCA食物喂养野生C57BL/J.129*小鼠历时10个月诱导产生无蒂腺瘤,其中5/6发生近端结肠无蒂腺瘤;而后用相似方法喂养野生B6.129PF2/J小鼠,94%发生肿瘤,其中56%为腺癌。

3.2.2 基因异常小鼠模型 抑癌基因Apc发生突变能导致肠道自发形成肿瘤,Apcmin/+小鼠品系是在小鼠同源APC基因第850位点发生无义突变,造成其肠道多发腺瘤,是一种良好的家族性腺瘤性息肉病小鼠模型。Baltgalvis等[29]对Apcmin/+小鼠模型分别喂养高脂和正常饮食,6周后结果显示高脂饮食组小肠腺瘤数目相对于对照组增加75%,免疫组化β-catenin阳性率增高2倍,炎症反应更加严重,间接证明了次级胆汁酸的致癌作用。另外,Maran等[18]对FXR基因缺失小鼠的研究显示,若将Apcmin/+小鼠的FXR基因敲除,小肠腺癌体积会明显增大;AOM诱导FXR基因敲除的C57BL/6小鼠,结直肠腺癌增多增大。Modica等[30]研究指出FXR基因敲除小鼠的早期死亡率增加和肠道肿瘤进展,虽然FXR缺失致癌的确切机制不完全明确,但资料提示这与TNFα活性增加及活化的中性粒细胞、巨嗜细胞浸润进而激活Wnt信号通路有关,DCA致癌作用是否通过FXR作用,仍需进一步研究。

3.2.3 结肠癌鼠模型 Onose等[31]对F344雄性大鼠先用DMH和DSS处理,0.3%DCA喂养20周发现结肠肿瘤的种类明显增多,体积显著增大。用抗氧化偶氮甲烷(AOM)诱导的大鼠肿瘤模型发现DCA可以增加结肠肿瘤的发生率,并诱发K-ras突变。AKR/J小鼠能抗AOM诱导结直肠肿瘤的形成,肿瘤发生率低,Flynn等[32]用含0.25%DCA的食物喂养AOM-AKR/J小鼠,加重了耐药的AKR/J小鼠结肠上皮发生的高度不典型增生,同时发现β-catenin核易位在这一过程中发挥了重要作用。

4 展望

DCA在结直肠癌演进中发挥着重要作用,相关机制十分复杂。尽管DCA的促结直肠癌作用在流行病学、细胞及动物水平等研究中得以证实,但DCA作为致癌因子的相关机制尚有许多未明之处:DCA与癌基因、抑癌基因有无关联,DCA如何打破细胞凋亡增殖平衡,肿瘤形成中FXR发生何种改变,DCA是如何影响肿瘤的生物学行为?这一系列问题都需进行广泛、深入的研究来解答。

[1]Bernstein C,Holubec H,Bhattacharyya AK,et al.Carcinogenicity of deoxycholate,a secondary bile acid[J].Arch Toxicol,2011,85(5):863-871.

[2]Kawano A,Ishikawa H,Kamano T,et al.Significance of fecal deoxycholic acid concentration for colorectal tumor enlargement[J].Asian Pac J Cancer Prev,2010,11(6):1541-1546.

[3]Fracchia M,Galatola G,Sarotto I,et al.Serum bile acids,programmed cell death and cell proliferation in the mucosa of patients with colorectal adenomas[J].Dig Liver Dis,2005,37(7):509-514.

[4]Xu YK,Zhang FL,Feng T,et al.Meta-analysis on the correlation of cholecystectomy or cholecystolithiasis to risk of colorectal cancer in Chinese population[J].Ai Zheng,2009,28(7):749-755.

[5]Zhao C,Ge Z,Wang Y,et al.Meta-analysis of observational studies on cholecystectomy and the risk of colorectal adenoma[J].Eur J Gastroenterol Hepatol,2012,24(4):375-381.

[6]Siddiqui AA,Kedika R,Mahgoub A,et al.A previous cholecystectomy increases the risk of developing advanced adenomas of the colon[J].South Med J,2009,102(11):1111-1115.

[7]Butler LM,Wang R,Koh WP,et al.Marine n-3 and saturated fatty acids in relation to risk of colorectal cancer in Singapore Chinese:a prospective study[J].Int J Cancer,2009,124(3):678-686.

[8]Payne CM,Crowley-Skillicorn C,Bernstein C,et al.Hydrophobic bile acid-induced micronuclei formation,mitotic perturbations,and decreases in spindle checkpoint proteins:relevance to genomic instability in colon carcinogenesis[J].Nutr Cancer,2010,62(6):825-840.

[9]Longpre JM,Loo G.Protection of human colon epithelial cells against deoxycholate by rottlerin[J].Apoptosis, 2008,13(9):1162-1171.

[10]Payne CM,Bernstein C,Dvorak K,et al.Hydrophobic bile acids,genomic instability,Darwinian selection,and colon carcinogenesis[J].Clin Exp Gastroenterol,2008,1:19-47.

[11]Ignacio Barrasa J,Olmo N,Pérez-Ramos P,et al.Deoxycholic and chenodeoxycholic bile acids induce apoptosis via oxidative stress in human colon adenocarcinoma cells[J].Apoptos is,2011,16(10):1054-1067.

[12]Kong Y,Bai PS,Sun H,et al.The deoxycholic acid targets miRNA-dependent CAC1 gene expression in multidrug resistance of human colorectal cancer[J].Int J Biochem Cell Biol,2012,44(12):2321-2332.

[13]Payne CM,Crowley-Skillicorn C,Bernstein C,et al.Hydrophobic bile acid-induced mitotic perturbations and micronuclei formation:relevance to genomic instability in colon carcinogenesis[J].Nutr Cancer,2010,62(6):825-840.

[14]Lee HY,Crawley S,Hokari R,et al.Bile acid regulates MUC2 transcription in colon cancer cells via positive EGFR/PKC/Ras/ERK/CREB,PI3K/Akt/IkappaB/NF-kappaB and p38/MSK1/CREB pathways and negative JNK/c-Jun/AP-1 pathway[J].Int J Oncol,2010,36(4):941-953.

[15]Schlottman K,Wachs FP,Krieg RC,et al.Characterization of bile salt-induced apoptosis in colon cancer cell lines[J].Cancer Res,2000,60(15):4270-4276.

[16]Rial NS,Lazennec G,Prasad AR,et al.Regulation of deoxycholate induction of CXCL8 by the adenomatous polyposis coli gene in colorectal cancer[J].Int J Cancer,2009,124(10):2270-80.

[17]Lew JL,Zhao A,Yu J,et al.The farnesoid X receptor controls gene expression in a ligand-and promoter-selective fashion[J].J Biol Chem,2004,279(10):8856-8861.

[18]Maran R.M,Ann Thomas,Megan Roth,et al.Farnesoid X receptor deficiency in mice leads to increased intestinal epithelial cell proliferation and tumor development[J].Pharm Exper Therap,2009,328(2):469-477.

[19]Lax S,Schauer G,Prein K,et al.Expression of the nuclear bile acid receptor/farnesoid X receptor is reduced in human colon carcinoma compared to nonneoplastic mucosa independent from site and may be associated with adverse prognosis[J].Int J Cancer,2012,130(10):2232-2239.

[20]De Gottardi A,Touri F,Maurer CA,et al.The bile acid nuclear receptor FXR and the bile acid binding protein IBABP are differently expressed in colon cancer[J].Dig Dis Sci,2004,49(6):982-989.

[21]Silva J,Dasgupta S,Wang G,et al.Lipids isolated from bone induce the migration of human breast cancer cells[J].J Lipid Res,2006,47(4):724-733.

[22]Pai R,Tarnawski AS,Tran T.Deoxycholic acid activates beta-catenin signaling pathway and increases colon cell cancer growth and invasiveness[J].Mol Biol Cell,2004,15(5):2156-2163.

[23]Wu H,Lin Y,Li W,et al.Regulation of Nur77 expression by β-catenin and its mitogenic effect in colon cancer cells[J].FASEB J,2011,25(1):192-205.

[24]Jean-Louis S,Akare S,Ali MA,et al.Deoxycholic acid induces intracellular signaling through membrane perturbations[J].J Biol Chem,2006,281(21):14948-14960.

[25]Im E,Martinez JD.Ursodeoxycholic acid (UDCA) can inhibit deoxycholic acid (DCA)-induced apoptosis via modulation of EGFR/Raf-1/ERK signaling in human colon cancer cells[J].J Nutr,2004,134(2):483-486.

[26]Zhu Y,Zhu M,Lance P.Stromal COX-2 signaling activated by deoxycholic acid mediates proliferation and invasiveness of colorectal epithelial cancer cells.Biochem[J].Biophys Res Commun,2012,425(3):607-612.

[27]Bernstein H,Holubec H,Bernstein C,et al.Unique dietary-related mouse model of colitis[J].Inflamm Bowel Dis,2006,12(4):278-293.

[28]Payne CM,Holubec H,Bhattacharyya AK,et al.Exposure of mouse colon to dietary bile acid supplement induces sessile adenomas[J].Inflamm Bowel Dis,2010,16(5):729-730.

[29]Baltgalvis KA,Berger FG,Pe a MM,et al.The interaction of a high-fat diet and regular moderate intensity exercise on intestinal polyp development in Apc Min/+ mice[J].Cancer Prev Res(phila),2009,2(7):641-649.

[30]Modica S,Murzilli S,Salvator L,et al.Nuclear bile acid receptor FXR protects against intestinal tumorigenesis[J].Cancer Res,2008,68(23):9589-9594.

[31]Onose J,Imai T,Hasumura M,et al.A new medium-term rat colon bioassay applying neoplastic lesions as endpoints for detection of carcinogenesis modifiers-validation with known modifiers[J].Cancer Lett,2006,232(2):272-278.

[32]Flynn C,Montrose DC,Swank DL,et al.Deoxycholic acid promotes the growth of colonic aberrant crypt foci[J].Mol Carcinog,2007,46(1):60-70.

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