Rh(D)阴性冰冻红细胞库的建立及临床应用

梁世艳，张支凤，李华领，唐朝晖

（甘肃省红十字血液中心，甘肃 兰州 730046）

2002年国际输血协会（ⅠSBT）血型命名委员会确认红细胞血型为29个系统，200多个抗原。ABO血型是临床输血中最重要的血型，Rh血型系统是最复杂的遗传多态性血型系统之一，是人类第二大血型系统，抗原性强度仅次于A及B抗原[1]。因此，Rh血型系统的临床意义仅次于ABO血型系统。随着临床成分输血的开展，临床用血对Rh（D）阴性血需求量日益增加，如何保障Rh血型系统患者医疗急救用血是一个十分迫切的问题[2]。特别是事故抢救和产妇大出血，短时间内需求的血量较多[3]。35天保存稀有血型血液明显不能满足临床急救输血。为了及时向临床提供足量的Rh（D）阴性血液，本中心应用深低温冰冻保存红细胞技术，于2010年开展了冰冻保存红细胞技术，建立了Rh（D）阴性冰冻红细胞库，目前已正式向临床供应冰冻解冻去甘油红细胞制品。现将Rh（D）阴性冰冻红细胞库的建立及临床应用情况报告如下。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

全自动红细胞处理仪（ACP-215型，美国血液技术公司）；一次性使用血液甘油化耗材（225型，美国血液技术公司）；一次性使用血液去甘油化耗材（235型，美国血液技术公司）；57.1%复方甘油溶液（北京伯德桑特输采血器材科技开发公司）、9%浓氯化钠溶液（北京伯德桑特输采血器材科技开发公司）；0.9%氯化钠溶液（四川南格尔生物医学股份有限公司）、100+1000 ml子母袋（四川南格尔生物医学股份有限公司）；无菌接管机（泰尔茂TSCDst-215A）；-80℃低温冰箱（青岛海尔特种电器有限公司BD-370CF）；离心机（德国6000i）；往复式恒温摇床（上海智诚分析仪器厂ZHWY-110X5）；封管热合机（韩国森通SE250）。

1.2 制备方法

1.2.1 甘油化红细胞 将采集后保存6天以内的Rh（D）阴性血液在4℃、2500 G/min的条件下离心去除血浆、白细胞、血小板，制备成浓缩红细胞。将浓缩红细胞转移至100+1000 ml的子母袋中。接通ACP-215全自动红细胞处理仪电源，机器自检通过后，选择甘油化程序。在ACP-215机器上安装好225型甘油化耗材后，用无菌接管机将装有浓缩红细胞的子母袋与225型耗材连接。再将连接耗材后的装有浓缩红细胞的子母袋固定在配套的振荡器上，将57%的复方甘油溶液与耗材穿刺接通。准备就绪后，按照操作规程进行浓缩红细胞的甘油化处理。结束后，将甘油化的红细胞在室温下静置30分钟，再在4℃、1250G/min的条件下离心去除多余的甘油，装盒、速冻后平放于-80℃低温冰箱冰冻保存。

1.2.2 去甘油、洗涤红细胞 先将Rh（D）阴性冰冻红细胞在37℃恒温水浴箱内进行融化。同时，接通ACP-215全自动红细胞处理仪电源，机器自检通过后，选择去甘油化程序。按照操作规程在ACP-215机器上安装235型去甘油耗材，先关闭耗材上的所有卡夹，再按照不同颜色标识分别将9%的浓氯化钠溶液和0.9%的氯化钠溶液与耗材穿刺接通。准备就绪后，将融化后的甘油化血液用无菌接管机连接235型耗材，疏通各条管路。再依据所准备血液的规格设定技术参数，确定无误后进行去甘油洗涤。操作完成后按照相应规格的标示量收集去甘油洗涤红细胞。

1.3 质量检测

将融化后洗涤前的甘油化红细胞及去甘油洗涤红细胞分别留样送往质量管理科进行红细胞回收率、残留白细胞、残留血小板、甘油含量、游离血红蛋白检测，体外溶血实验，6个项目的检测。

2 结果（见表 1、表 2、表 3）

所有去甘油洗涤红细胞的质控送检项目实验结果全部符合国家标准[4]。

表1 试验阶段冰冻解冻去甘油红细胞质控结果

表2 2007—2008年Rh（D）阴性血液的筛查及临床使用情况

表3 2007—2008年阴性血液的临床供血需求及保障情况[u（%）]

3 讨论

随着医学科学的发展，相关输血技术也在不断发展提高。输血在临床上作为一种特殊的治疗手段，拯救了无数患者，输血量也以百分之十几的速度在逐年增加。作为人类第二大血型系统的Rh（D）阴性血型的血液需求量也在逐年增加。据文献报道，Rh（D）阴性在我国汉族人群中只占0.3%～0.5%[5]，较高的民族如维吾尔族、哈萨克族也不过5%。甘肃省是一个多民族地区，有55个少数民族，占全省总人口的8.75%。2007年及2008年甘肃省血液中心筛查血液94506单位，筛查出Rh（D）阴性血液548.5单位，检出率为0.46%，Rh（D）阴性发生率明显高于汉族人群。由于受到液态血液保存期35天的限制，造成了稀有血型血液资源的严重浪费和突出的供需矛盾。甘肃省血液中心2007年和2008年两年共采集Rh（D）阴性血液548.5单位，临床使用 Rh（D）阴性血液488.5单位，而作为Rh（D）阳性使用的血液有60单位，占总采集量的11%。兰州市自2011年建立了Rh（D）阴性冰冻红细胞库以来，2011年采集Rh（D）阴性血液477.5单位，作为Rh（D）阳性使用的血液有15.5单位，占总采集量的3.25%，稀有血型血液资源的浪费明显减少，有效降低了兰州市稀有血型血液资源的浪费。

目前临床上紧急提供Rh（D）阴性血液的途径有两个：（1）从Rh（D）阴性血型献血者档案中选择血型适合的人，并联系其前来献血；（2）从其他地区调血。如果本地一时找不到合适的献血者，必须从外地调血，手续繁琐，耗时长，不能适应临床急救用血的需要。建立Rh（D）阴性冰冻红细胞库，可以在保证平时一定的液态血液库存前提下，将多余的各种血型的Rh（D）阴性血液冰冻保存，积累一定比例，以备急救时的临床用血需要[6]。本中心于2010年开展了冰冻保存红细胞技术，应用ACP-215全自动红细胞处理仪处理冰冻红细胞，其回收率及输注后存活率均十分理想[7]。建立Rh（D）阴性冰冻红细胞库以来，共制备Rh（D）阴性冰冻红细胞178.5单位,冰冻解冻去甘油红细胞38.5单位。2007—2008年阴性血液的临床供血需求716.5单位，正常供血488.5单位，占临床需求的68.2%；未满足67单位，占临床需求的9.4%。2011年建立Rh（D）阴性冰冻红细胞库后，未出现Rh（D）阴性血液不能满足临床供应问题。而且在Rh（D）阴性液态血液不能满足急救需要时，已有3次为临床提供“冰冻解冻去甘油红细胞”制品而挽救患者生命的成功事例。以上事例均证实，建立Rh（D）阴性冰冻红细胞库能解决稀有血型的临床急救用血，具有重要的临床意义。兰州市Rh（D）阴性冰冻红细胞库的建立和运行是带动提高我省血液储备和应对公共卫生突发事件血液供应能力的有力措施。将未开展该技术的兰州市周边地市的稀有血型收集保存，对保障兰州市及周边地市的稀有血型急救用血及时供给具有积极的社会意义。因此，Rh（D）阴性冰冻红细胞库的建立，将平时采集到的Rh（D）阴性血液深低温保存，能使红细胞保存期延长，有效解决了Rh（D）阴性血液不能长期保存，临床急需时不能及时满足需求的难题[2]。

[1]高峰.临床输血与检验[M].2版.北京：人民卫生出版社，2003.

[2]陈均.深低温保存Rh（D）阴性血冷冻血库的建立及其临床应用[J].临床血液学杂志：输血与检验版，2007，4（2）：66.-68

[3]唐秋民.稀有血型血液冷冻血库的建立及临床意义[J].广西医学，2008，30（9）：1400-1401.

[4]中华人民共和国卫生部.血站基本标准[S].2000.

[5]于琦.Rh（D）阴性血液冰冻血库的建立及意义[J].中国输血杂志,2001,1（14）：30-30.

[6]许德义，赵宁江，杜勇，等.红细胞的低温冷冻保存及临床意义[J].临床输血与检验，2004，6（3）：182-184.

[7]Valeri CR,Ragno G,P ivacek L,et al.In vivo surval of apheresis RBC,frozen with 40 percent（Wt/Vol）glycerol deglycerolized in the ACP215,and stored at 4 degrees C in AS-3 for up to 21 days[J].Tranfusion,2001,41(7):928-932.■