广枣四香丸中醇提部位工艺研究

苏智斌 王淑美 陈曦 陈静 梁生旺

广枣四香丸中醇提部位工艺研究

苏智斌 王淑美 陈曦 陈静 梁生旺

目的 优选广枣四香中醇提部位人参，广枣最佳提取工艺。方法 通过正交实验考察乙醇浓度，加醇体积，提取时间，提取次数4个因素，采用HPLC测定人参皂苷Rg1，Re，Rb1总含量以及紫外分光光度法测定总黄酮，总皂苷。结果 最佳工艺为6倍量70%乙醇提取2次，每次45 min。结论 该提取工艺经济、可行、可控。

正交试验;广枣四香;提取工艺

广枣四香滴丸是由广枣，人参等药材组成，是临床经验方，具有理气止痛，活血化瘀功能，用与气滞血瘀型的冠心病，心绞痛等［1］。现代研究表明广枣中总黄酮具有明显的治疗心血管疾病的作用，酚酸类成分如没食子酸也有明显的抗氧化、清除自由基、抑制血小板聚集作用和抗缺氧活性［2］。人参总皂苷对心血管系统的多种疾病如缺血性心脏病、心律失常、心力衰竭等方面均有临床意义［3，4］，固本实验采用乙醇为提取溶剂，采用紫外分光光度法测量总皂苷，总黄酮［5］，以及 HPLC 测定人参皂苷 Rg1，Re，Rb1含量之和［6］，通过正交实验优化广枣四香滴丸醇提部分提取工艺。

1 材料与方法

1.1 一般材料

紫外-可见分光光度计(日本岛津)，Waters2996高效液相色谱仪，迪马色谱柱(4.6 mm ×250 mm，5 μm)。

人参皂苷 Rg1，(110703-200322)，人参皂苷 Rb1(110704-200420)，人参皂苷Re(110754-200320)，芦丁对照品(批号100080-200306)均由中国药品生物制品检定所提供。广枣购自安徽亳州中药材市场，经广东药学院中药鉴定教研室刘基柱副教授鉴定为漆树科植物南酸枣的干燥成熟果实广枣Choerospondias axillaris(Roxb);人参(批号100320)购自广州致信药业有限公司。液相用试剂均为色谱纯，水为双蒸水，其他试剂均为分析纯。

1.2 方法

1.2.1 广枣、人参提取条件的考察 取广枣100 g、人参66 g，加乙醇回流提取，并采用正交设计试验，对乙醇浓度、乙醇用量、提取时间、提取次数进行条件优选，考察指标为总皂苷含量，总黄酮含量，人参皂苷Rg1，Re，Rb1含量之和为指标，用L9(34)正交表安排试验。因素水平表见表1。试验结果见表2。

表1 因素水平

表2 醇提正交实验结果表

1.2.2 供试品制备 取人参(粉碎)66 g，广枣100 g(粉碎)放入圆底烧瓶中，按正交实验的最佳提取条件，提取液过滤，合并滤液，减压蒸馏，回收乙醇适量，剩下溶液过滤后，加水定容至500 ml容量瓶中(相当于生药0.332 g/ml)，放置冰箱备用。

1.2.3 总皂苷含量测定 精密称取在105℃减压干燥至恒重的人参皂苷Re对照品10.35 mg，加95%乙醇溶解，转10 ml容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(1.035 mg/ml)，精密吸取该液 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0 ml，分别置于10 ml试管中，在分别加入高氯酸5 ml，放置15 min显色，以相应试剂做空白，于543 nm处测定吸光度。以浓度(C)与吸收度 进行线性回归。得回归方程：A=6.3184C-0.1543，R2=0.9997(n=5)，可见在 21 ～104 μg/ml浓度范围内线性系良好。

供试品含量测定：分别精密量取上述9个广枣正交醇提液1 ml至10 ml容量瓶中，按上述显色方法显色后，在543 nm波长下测定吸光度，计算含量。结果见表2。

1.2.4 总黄酮含量测定 精密称取在105℃减压干燥至恒重的芦丁对照品19.20 mg，加95%乙醇溶解，转入25 ml容量瓶中，用95%乙醇稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液(0.768 mg/ml)，精密吸取该液 1、2、3、4、5 ml，分别置于 25 ml容量瓶中，加蒸馏水至 6 ml，加5%NaNO2试液1.0 ml，放置6 min，加 l0%硝酸铝1.0 ml摇匀，放置6 min;加10%NaOH试液10 ml加水至刻度，摇匀，放置15 min，以相应试剂做空白。于508 nm处测定吸收度。以浓度(C)与吸收度进行线性回归。得回归方程：A=12.503(C)-0.0507;R2=0.9996(n=5)，可见在31～153 μg/ml浓度范围内线性系良好。

供试品含量测定：分别精密量取上述9个广枣正交醇提液1 ml，定容至25 ml，按上述显色方法显色后，在508 nm 波长下测定吸光度，计算含量。结果见表2。

1.2.5 人参皂苷含量测定 色谱条件：迪马(4.6 mm ×250 mm，5 μm)，乙睛(A%)-0.5%磷酸水(B%)：0 ～35 min 81～71(B%)，35～70 min 71(B%)，70～100 min 71～60(B%)。进样量 10 μl，检测波长 203 nm。

供试品含量测定：分别精密量取上述9个广枣正交醇提液10 ml，加饱和正丁醇萃取，取正丁醇层最终定容到25 ml，按上述色谱条件进行测定，记过见表2。

2 结果

结果以各有效成分或指标性成分的含量越高越好，以含量最高的为结果以各有效成分或指标性成分的含量越高越好，以含量最高的为100分，根据y1’=y1×100/y1 max换算后，各指标得分均乘以权重系数相加后得综合评分。

由方差分析可知，影响各指标含量高低的最主要因素是A，其次C、B，D因素的影响较小，综合考虑提取成本，故最佳工艺条件为A2B1C1D1，即加6倍量70%乙醇提取2次，每次45 min。

3 讨论

3.1 本实验采用多指标综合法对广枣四香丸中醇提部位提取工艺进行研究。由于文献报道广枣四香丸醇提部位中广枣，人参的有效成分为总黄酮，总皂苷等，不同的提取工艺有可能增加某一类成分的含量同时减少另一类成分的含量，因此只用某一类物质的含量这种单一指标方法去评价广枣四香丸醇提部位提取工艺是不全面的。所以本实验通过考察醇提部位总皂苷，总黄酮，以及对人参皂苷Rg1，Re，Rb1进行含量测定，全面、综合评价提取工艺，为寻找科学有效的提取工艺提供依据。

3.2 建立了70%乙醇提取的方法，有效成分总黄酮和总皂苷以及人参皂苷Rg1，Re，Rb1的提取转移率较高，说明药材的有效成分得到充分的提取，经过三批药材验证本实验结果，总黄酮，总皂苷，人参皂苷Rg1，Re，Rb1均符合标准。本提取方法简单，有效，经济，环保，适合大规模生产。

［1］国家药典委员会.中华人民共和国药典2005版(一部).化学工业出版社，2005：29，52.

［2］邓科君，张艺，王平，等.反相高效液相色谱法同时测定藏药广枣中没食子酸和原儿茶酸的含量.色谱，2006，24(6)：652.

［3］王强，莫雪梅，杨小英.人参皂甙治疗心血管疾病的现代研究进展.心血管病学进展，2006，27(3)：325.

［4］祝连彩，王伯初，谭君.银杏叶提取物与人参皂苷对血管活性物质的影响.重庆大学学报(自然科学版)，2007，30(4)：136.

［5］易跃能，杨华，赵勇，等.渗漉法提取广枣中黄酮类成分的工艺研究.中国中药杂志，2010，35(14)：1806.

［6］王京霞，陈琳，乔晴等.参血胶囊中人参皂苷Rg1，Re，Rb1含量的测定.浙江中医药大学学报，2011，35(1)：82-85.

广州市科技计划项目(项目编号：2006Z3-E5121)

510006 广东药学院中药学院

梁生旺 E-mail：swliang371@163.com