变应性鼻炎患者外周血CD4+CD25+Treg及Foxp3的检测及意义

王淑慧 王桂琴

变应性鼻炎(allergic rhinitis，AR)是发生在鼻黏膜的变态反应性疾病，以鼻痒、喷嚏、鼻分泌亢进，鼻黏膜肿胀为主要特点，是严重影响人类生活质量的变态反应性疾病。在上个世纪九十年代中期，由Sakaguchi等首先证实了天然CD4+CD25+Treg为一类具有免疫抑制作用的T细胞，约占外周CD4+T细胞的5% ～10%［1］。这群细胞具有免疫耐受和免疫抑制两大特性，对维持机体免疫的稳定性起着重要的调节作用。Treg细胞常用的分子标记有CD25、Foxp3(叉头/翼状螺旋转录因子)等，其中Foxp3是CD4+CD25+Treg的特异性标志，是调节性T细胞发育的一个重要开关［2］。目前调节性T细胞的研究已受到学术界的广泛关注，但是其在变应性鼻炎发病中的作用还不是很明确。本文采用流式细胞术分析变应性鼻炎患者外周血PBMC中CD4+CD25+Treg、CD4+CD25highTreg及Foxp3占外周血T细胞的百分比，以进一步探讨其临床意义。

1 资料与方法

1.1 一般资料 2011年1月至2011年12月在山西省汾阳医院就诊的30例AR患者(男16例，女14例，年龄16～53岁，平均30.1岁)，15例健康者作对为照组，来自本院体检的健康人群，均取得本人同意(男8例，女7例，年龄 25～45岁，平均31岁)。以上所有受试对象均排除其他急慢性疾病，8周内未用抗组胺、糖皮质激素。

1.2 主要试剂和仪器 FITC标记的CD25、PC5标记的CD4均购自美国BD公司;PE标记的Foxp3，固定剂，破膜剂，稀释液以及淋巴细胞分离液均购自eBiosciense公司，EPICS XL流式细胞仪为美国Beckman-Coulter公司。

1.3 检测方法 所有检测对象均于清晨空腹采集静脉血2 ml加入EDTA抗凝管制备单个核细胞(PBMC)悬液，加入PC5-CD4、FITC-CD25单克隆抗体20μl，室温避光孵育 30 min，并PBS洗涤1次，弃上清。加入新鲜配制的固定/破膜液1 ml，4℃避光 30～60 min，用固定/破膜缓冲液2 ml洗涤2 次，加入 Foxp3-PE20μl，4℃ 避光 30 min，用固定/破膜缓冲液2 ml洗涤2次，弃上清，加入 0.5 mlPBS，4 h内上流式细胞仪检测。流式细胞检测采用 EPICS XL流式细胞仪，应用Cell Quest软件进行结果分析，在 FSC-SSC散点图上选定淋巴细胞群，以CD4细胞群和 SSC设门，选择 CD4+细胞分析CD25和Foxp3表达，将 CD4 CD25细胞群平均荧光强度＞7.0的亚型细胞群定义为CD4 CD25highT细胞，结果以CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25highT细胞和Foxp3占CD4+T细胞的百分率表示。

1.4 统计学方法 应用SPSS 16.0软件处理资料，结果均采用±s表示。组间比较采用t检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

流式细胞技术检测结果显示，AR组 CD4+CD25+/CD4+、CD4+CD25high/CD4+T细胞百分比及Foxp3表达与正常对照组相比明显减少，差异均有统计学意义(P＜0.05)。见表1。

表1

3 讨论

流行病学的研究证实，近年来，变应性鼻炎的发病率在全球范围内逐渐升高，除了环境因素以外，越来越多的研究证实变应性鼻炎是一种多基因疾病，且具有明显个体差异和地域性，这都为变应性疾病的研究带来一定困难。过去较为认同的是T细胞分化调节假说，一直以来认为Th1/Th2免疫失衡是变应性鼻炎发病机制中的主要环节，然而，进一步的研究发现，Th1细胞是前炎性细胞，其促炎症作用超过了抗炎作用，与Th1相关的炎症反应并不下调变应性鼻炎。而在Th2细胞介导的免疫反应疾病中，变应性鼻炎的发病率也并未增高［3-4］。说明单纯的Th1/Th2失衡理论不足以解释变应性鼻炎的发病机制。最近，一种在过敏性炎症反应中发挥较强免疫抑制功能的T细胞受到广泛关注，这一细胞群被称为调节性T细胞(Treg)。Treg细胞对Th1反应和Th2反应均表现为抑制作用，以起到维持机体自身稳态的作用。其中CD4+CD25+Treg细胞作用最强，研究它的免疫调节作用及其机制是近年来的研究热点。CD4+CD25+Treg表达多种表面分子，Foxp3是目前公认的CD4+CD25+Treg细胞的特异性标志［5］。除作为分子标记外，Foxp3介导 CD4+CD25+Treg在胸腺的发育、外周的表达及功能的维持，可反映CD4+CD25+调节性T细胞的活性水平［6］。CD4+CD25+Treg的这种调节作用可能在AR中存在缺失或缺陷，导致CD4+CD25+Treg对树突状细胞活化的抑制作用减弱，以及对Th2细胞的增殖作用降低，进而不能够阻止针对变应原的Th2型反应。有研究表明，变应性鼻炎患者外周血PBMC中CD4+CD25+Treg的比率低于正常人，同时鼻黏膜中Foxp3的表达降低［7］。但也有研究表明CD4+CD25+Treg细胞数量无明显差别甚至增加，但 Treg细胞不能发挥正常的免疫抑制功能［8］。

本研究结果显示，变应性鼻炎患者外周血PBMC中的CD4+CD25+Treg细胞及Foxp3比例明显低于正常人，进一步证实了Treg细胞数量不足和(或)功能缺失在变应性鼻炎发生发展中的意义。虽然目前直接将Treg细胞用于治疗AR的报道较少，但是，随着变应性鼻炎发病机制的深入研究，升高Treg细胞数量或增强其活性有利于Treg细胞调节作用的发挥，可能在AR的免疫治疗中获得广泛的应用前景。

［1］Beissert S，Schwarz A，Schwarz T.Regulatory T cells.J Inwest Dermatol，2006，126:15-24.

［2］Hori S，Nomura T，Sakaguchi S.Control of regulatory T cell development by the transcription factor Foxp3.Science，2003，299(5609):1057-1061.

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［4］Halvor S，Devendra K，Agrawal G.Th2 Cells in the Pathogenesis of Airway Renodeling .Immunol Res，2006，35(3):219-231.

［5］Lopes JE，Soper DM，Ziegler SF.Foxp3 is required throughout the life of a regulatory T cell.Sci Stke，2007(393):36-42.

［6］Marson A，Kretschmer K，Frampton GM，et al.Foxp3 occupancy and regulation of key target genes during T-cell stimulation.Nature，2007，445(7130):931-935.

［7］Xu G，Mou Z，Jiang H，et al.A possible role of CD4+CD25+T cells as well as transcription factor Foxp3 in the dysregulation of allergic rhinitis.Laryngoscope，2007，117(5):876-880.

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