洛匹那韦药代动力学的研究进展

姚亚敏，沐 俊，孙 骥，马 芳，卢洪洲，张丽军(.上海市公共卫生临床中心，上海0508;.苏州大学医学部，江苏苏州53)

洛匹那韦(LPV，结构式如图1)是一种新的抗HIV的蛋白酶类抑制剂药物，主要通过细胞色素P450 3A(CYP3A，主要是CYP3A4)得以快速代谢，与少量的利托那韦(RTV)组成一种复合制剂(克力芝)，利托那韦是CYP3A抑制剂，竞争性抑制洛匹那韦的代谢，可以增强洛匹那韦的吸收利用，增强药物治疗效果［1］。最近的研究表明监测洛匹那韦的血药浓度与疗效、毒副作用密切相关;由于艾滋病患者常常进行长期的联合用药，药物与药物之间相互作用所导致的疗效降低或者毒副作用增强成为临床研究不容忽视的领域;此外，药物代谢酶的个体差异所导致血药浓度差异较大［2～4］。因而，准确、简单易行的监测抗病毒药物洛匹那韦的血药浓度具有非常重要的意义。本研究就洛匹那韦在各种生物体液中的浓度检测方法，药代动力学研究进展作一个系统性的综述。

图1 洛匹那韦的化学结构

1 洛匹那韦浓度分析方法

1.1 生物样品处理方法 文献报道的样品前处理方法有蛋白沉淀法［5］，液液萃取法［6～11］，固相萃取法［1～12］，干血点法［13］，以及蛋白沉淀联合液液萃取提取法［14］。这5种方法各有优缺点，蛋白沉淀法处理过程简单，成本低，但是样品被稀释，检测限低，要求仪器具有足够的灵敏度，而且蛋白沉淀法往往处理不干净，会有蛋白进入待分析的样品中，污染仪器和色谱柱;液液萃取法萃取溶剂量大，容易造成环境污染，而且只适合于极性小的化合物的提取，其优点是对脂溶性化合物提取效率高，样品比较干净;固相萃取法可以对样品分离、纯化和浓缩，与传统的液液萃取法相比较可以提高分析物的回收率，更有效的将分析物与干扰组分分离，但是目前其成本比较高;干血点法(dried blood spot，DBS)，即将全血样品收集在卡纸上，在血样采集方法上比传统方法有一定的优势。它需求较少的血量，可减少动物和人的痛苦，方便血样采集、存储运输，简化样品前处理，特别适用于采血体积较少的药物实验的研究，其缺点是采集时血样必须均匀，对点样工具、点样温度、点样体积要求比较高;蛋白沉淀联合液液萃取提取法虽然提取的样本比单独的蛋白沉淀法要干净，但是适用于脂溶性化合物，而且为两步提取，操作复杂。笔者对洛匹那韦生物样品的样品处理过程做了一个整理，具体见表1。每个实验室可根据自身实验条件选择合适的样品处理方法。

表1 文献报道的处理洛匹那韦样品的方法

1.2 生物样品的分析方法 生物样品中的洛匹那韦大多以μg/ml或ng/ml浓度水平存在，其检测不仅受同时存在的多种结构相似的内源性物质干扰，还受和原型药仅有微小差别的代谢物干扰，因此其检测方法必须灵敏度高，专属选择性强。目前文献报道的有高效液相色谱(HPLC)、液质联用法(LCMS/MS)等方法来分析检测洛匹那韦的。高效液相色谱只能检测在紫外可见光光谱内有吸收的化合物，要求分析物与干扰的内源性物质必须达到完全分离，灵敏度不及液相色谱串联质谱仪;液质联用法目前普遍采用多反应监测(Multiple reaction monitor，MRM)，其原理是每个化合物有特定的母子离子对，对其进行定量分析，专属性好，灵敏度高。表2例举了血浆、脑脊液、全血、超滤液、PBMC等生物样本中洛匹那韦的线性检测范围，流动相、色谱柱规格、检测波长、检测离子对等详细内容，可以为分析研究者提供参考。

2 药代动力学研究进展

洛匹那韦作为一个重要的一线蛋白酶类抑制药物，在艾滋病的治疗中扮演重要角色。为了更好的指导临床用药，近年来有较多的上市后再评估研究，包括药物相互作用、不同剂量药代动力学、药物浓度与药物基因组学关系、时辰药代动力学、PK-PD、群体药动学等研究，获得了一些具有临床指导意义的药动学参数(表3)。在药物相互作用研究方面，Eric等研究了洛匹奈韦与奈韦拉平的相互作用，发现奈韦拉平能诱导洛匹那韦的代谢，增加其清除速度，降低其体内浓度［3］。Jackson等从复方制剂中利托那韦(RTV)能提高洛匹那韦(LPV)的生物利用度角度出发，比较了克力芝 LPV/RTV 400/100 mg、200/150 mg、200/50 mg的药代动力学，发现 LPV/RTV 200/150 mg可以与LPV/RTV 400/100 mg达到相同的生物利用度［18］。在PK-PD研究方面，Ann等人进行洛匹那韦PK-PD研究，发现当克力芝合用依非韦伦时LPV/RTV剂量为400/100 mg与不合用依非韦伦但LPV/RTV剂量为533/133 mg的PK-PD相当，说明依非韦伦可以提高洛匹那韦的生物利用度［19］。在药物基因组学研究上，Matthias等研究了洛匹那韦药物浓度与基因的关系，发现在一部分CYP2B6超强代谢者LPV浓度偏低，治疗失败，究其原因是LPV主要通过CYP3A4代谢，而RTV能抑制3A4从而提高 LPV的浓度，但是 RTV又是通过CYP2B6代谢，CYP2B6超强代谢型能快速代谢RTV，从而导致体内LPV的浓度降低，这部分人由于基因差异LPV达不到有效治疗浓度从而治疗失败［4］。另外Van等学者对洛匹那韦进行了时辰药代动力学研究，发现无论是早上服药还是下午服药其药代动力学过程均无影响，食物也不会影响其在体内的代谢过程［16］。Natella等则对LPV进行了群体药代动力学研究，成功建立了PPK模型应用于治疗效果不佳的HIV患者疗效的研究实现个体化用药［20］。以上各种研究均为洛匹那韦的合理安全用药提供了依据。

表2 文献报道的检测洛匹那韦的方法

表3 洛匹那韦药动学参数

3 结论

蛋白酶抑制剂洛匹那韦在AIDS的治疗中扮演重要角色，其药物浓度不足或过大均会影响疗效或发生毒副作用。本文对近年来洛匹那韦生物样品检测方法及洛匹那韦的药代动力学研究进行了全面的归纳总结。就样品提取方法而言，液液萃取法以其能同时满足提取效率高、成本低，内源性物质干扰小、操作简单易行等优势而被广泛采用。对于定量分析方法，液质联用法(LC-MS/MS)由于具有较好的选择性和定量准确性。纵观研究进展，在相同的给药剂量(400 mg，一天2次)下，各研究实验中tmax，Cmax，AUC，CL/F，V/F，Cssmin等参数都相近。当剂量减为200 mg时，Cmax，AUC相应变小(不成相应比例)，但是tmax、半衰期不改变。这些药动学参数(半衰期、达峰时间、峰浓度和谷浓度)为LPV的合理使用提供了理论基础。

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