甜瓜枯萎病不同生理小种的鉴定方法

邵元健 ，周小林 ，包卫红 ，吴雯雯 ，张娟

（1.江苏南通农业职业技术学院，226007；2.江苏南通市农业生物技术重点实验室；3.江苏海门市农业科学研究所；4.南通大学）

甜瓜枯萎病由尖镰刀菌甜瓜专化型（Fusarium oxysporumf.sp.melonis，简称FOM）的病原菌侵染所致。该病首次报道于1930年，是在美国纽约发现的，现在在全世界各地均有发现，但各地分布并不一致[1]。

1 甜瓜枯萎病抗性主基因及生理小种

1976年，Risser等[2]提出命名甜瓜枯萎病生理小种及其对应的抗性基因的标准方法，抗性基因按照发现的先后编号，而小种则根据对应的抗性基因进行编号。目前，报道的甜瓜枯萎病的抗性基因主要有3个，生理小种有4个，分别为小种0、1、2和1.2。1973年，Risser报道了两个抗病基因，分别为Fom1和Fom2。其中，Fom1来自品种Doublon，抗甜瓜枯萎病专化型生理小种0和2，感生理小种1和1.2；Fom2来自品种CM17187，抗生理小种 0和 1，感生理小种2和1.2。Joobeur等[3]2004年克隆分离得到该基因。Zink等[4]在品种Perlita FR中发现了第3个抗病基因Fom3，抗生理小种0和2，对生理小种的抗性表现与Fom1表现一样。另外，生理小种1.2 为害症状有两种，一种是枯萎型（race 1.2w），一种是黄化型 （race 1.2y）。研究发现甜瓜对 race 1.2的抗性表现为多基因控制[5]。不同寄主对4种生理小种的标准鉴定方法如表1。

2 接种鉴定程序

枯萎病接种方法是采用孢子悬浮液或菌丝体悬浮液进行接种。技术操作规程如下。

表1 不同寄主对不同小种的抗性表现

2.1 播种与发芽条件

种子播种在蛭石中，发芽温度控制在25～30℃，保持16 h光照，不施用肥料。

2.2 菌种培养

播种3 d后，开始培养菌种，采用V-8液体培养基（200 mL V-8 培养液，800 mL 水，3 g CaCO3），放在摇床中培养，温度控制在30℃。

2.3 接种时间及接种液准备

一般播种后10 d，即子叶完全展开时开始接种。将培养液用纱布过滤得到孢子接种液，再将孢子浓度调整到1×106个/mL。

2.4 接种方法

将幼苗从蛭石中取出，洗净根部，在接种液中浸泡5 min，然后移栽到营养钵中，放在凉爽、遮光、高湿的环境中过夜，以使其尽快恢复生长。

2.5 接种后管理

第二天，将苗放置到培养室中或人工培养室中培养，温度保持在24℃，光照12 h，培养3周。

2.6 结果鉴定

接种5～7 d后，感病植株开始萎蔫；3周后，植株的抗病性鉴定结果显现明了。抗病植株无症状，而感病品种将死亡。有时，也可以将发育异常植株的茎切开，以检查维管束木质部是否变褐，变褐即再次证明植株感病。

[1]Zitter T A.Fusarium wilt of melon,a worldwide problem in temperate and tropical regions[J].Acta Horticulturae,1999∶492:157-160.

[2]Risser G,Banihashemi Z,Davis D W.A proposed nomenclature ofFusarium oxysporumf.sp.melonisraces and resistance genes inCucumismelo[J].Phytopathology,1976,66:1 105-1 106.

[3]Joobeur T,King J J,Nolin S J,et al.The fusarium wilt resistence locus Fom-2 of melon contains a single resistance gene with complex features[J].The Plant Journal,2004,39(3):283-297.

[4]Zink F W,Gubler W D.Inheritance of resistance in muskmelon toFusariumwilt[J].J Amer Soc Hort Sci,1985,110(5):600-604.

[5]Perchepied L,Pitrat M.Polygenic inheritance of partial resistance toFusarium oxysporumf.sp.melonisrace 1.2 in melon[J].Phytopathology,2004,94(12):1 331-1336.