羟丙基－β－环糊精包合对穿心莲内酯的增溶作用

马海涛

(浙江省绍兴市人民医院，浙江绍兴312000)

羟丙基－β－环糊精包合对穿心莲内酯的增溶作用

马海涛

(浙江省绍兴市人民医院，浙江绍兴312000)

目的研究羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)包合对穿心莲内酯(AND)溶解度和溶出度的增强作用。方法以HP-β-CD为载体，分别采用研磨法、超声波法和共沉淀法制备AND的HP-β-CD包合物，测定其溶出度和溶解度，并与AND原药、AND和HP-β-CD的物理混合物的溶出性能进行比较。结果AND与HP-β-CD形成了包合物，HP-β-CD可使AND溶解度增加55;4倍。结论HP-β-CD极大地增加了AND的溶解度和溶出度。

穿心莲内酯;羟丙基-β-环糊精;包合物;相溶解度;溶出度

穿心莲内酯(andrographolide，AND，Mr为350;45 g/mol)为爵床科植物穿心莲Andrographis paniculata Nees中提取的二萜内酯类化合物［1-2］。研究证实其具有抗菌、抗病毒、增强免疫等作用，临床上广泛用于治疗上呼吸道感染、细菌性痢疾等感染性疾病［3-4］。目前，AND主要有片剂和胶囊剂两种剂型，但因其在水中溶解度较小(25℃时为46;3 μg/mL)而致体内的生物利用度低。本研究中主要以羟丙基-β-环糊精(HP-β-CD)为包合材料，用研磨法、超声法和共沉淀法制备AND的包合物，以提高AND的溶解度和溶出度。

1 仪器与试药

S52型紫外分光光度计(上海棱光技术有限公司);RCZ-8A型智能药物溶出仪(天津大学精密仪器厂);THZ-C型恒温振荡器(江苏太仓市实验设备厂)。HP-β-CD(Mr为1 402 g/mol，取代度为0;66，江苏一鸣精细化工有限公司);AND(成都欧康植化科技有限公司);乙醇(浙江杭州大方化学试剂厂);十二烷基硫酸钠(SDS，天津市博迪化工有限公司);试验用水为蒸馏水。

2 方法与结果

2．1 环糊精包合物及物理混合物的制备

研磨法:按物质的量之比1∶1称取药物AND和HP-β-CD适量，加入2倍蒸馏水，将HP-β-CD磨匀，分次加入AND，置研钵中充分磨成糊状，于40℃干燥，过80目筛即得。平行制备3份。

超声波法:在HP-β-CD饱和水溶液加入AND(物质的量之比1∶1)，混合后立即超声6 h，用0;45 μm的微孔滤膜过滤，于40℃干燥，过80目筛即得。平行制备3份。

共沉淀法:按物质的量之比1∶1称取适量AND和HP-β-CD，加5 mL乙醇超声使AND溶解，60℃保温，慢速滴入30 mL 60℃的HP-β-CD水溶液中，搅拌30 min，室温下磁力搅拌24 h，用0;45 μm的微孔滤膜过滤，于40℃干燥，过80目筛即得。平行制备3份。

物理混合物的制备:按物质的量之比1∶1称取上述相同量的AND和HP-β-CD在研钵中均匀混合，过80目筛。

2．2 AND含量测定方法的建立

检测波长选择:精密称取AND 7;5 mg，置1 000 mL容量瓶中，用1%SDS溶解并定容，摇匀，按照紫外分光光度法在200～400 nm波长范围内扫描。结果在223 nm波长处有最大吸收，且HP-β-CD不干扰AND的测定，故选择223 nm为检测波长。

标准曲线绘制:精密称取AND，以1%SDS为溶剂配制AND标准溶液，质量浓度范围为2;94～29;4 μg/mL。以1%SDS为空白，用紫外分光光度计于223 nm波长处测定吸光度。以穿心莲内酯的质量浓度(C，μg/mL)为纵坐标、吸收值(A)为横坐标进行线性回归，得回归方程C=27;6A-0;22(R2=0;999 8)。

精密度试验:精密吸取标准溶液进行日内、日间分析(n= 5)。结果日内RSD为0;86%，日间RSD为0;98%，符合精密度小于2%的要求。

回收率试验:分别精密称取药物AND 8;0，10;0，12;0 mg(相当于80%，100%，120%)，置1 000 mL量瓶中，分别按比例加入空白辅料HP-β-CD，加适量1%SDS溶解并定容至刻度，混匀，用0;45 μm微孔滤膜过滤，在223 nm波长处测定吸光度，根据标准曲线方程计算其含量，计算平均回收率。结果80%，100%，120%的回收率分别为(100;62±0;98)%，(99;73± 0;81)%，(99;43±1;04)%，RSD分别为0;98%，0;81%，1;04%回收率均符合RSD＜2%的要求［5］。

2．3 包合率测定

精密称取2;1项下制备的AND包合物10 mg，置100 mL量瓶中，加入1%SDS充分溶解，定容至刻度。用0;45μm的微孔滤膜过滤，以1%SDS为空白，在223 nm波长处测定吸光度，根据标准曲线计算AND含量，并计算包合率(%)=［包合物含药量/投药量］×100%。结果研磨法、超声法、共沉淀法所得的包合物产率分别为89;8%，82;4%，84;3%。试验证明，制备工艺不同，包合物产率也不同。

2．4 相溶解度测定

称取250 mg AND 8份，分别置50 mL量瓶中，加入10 mL不同浓度(0～50 mmol/L)的HP-β-CD溶液。将悬浮液在(37± 1)℃，120 r/min避光振荡7 d。用0;45 μm微孔滤膜过滤，将滤液用蒸馏水稀释，在223 nm波长处测定紫外吸收值，计算其AND溶解度。以HP-β-CD浓度为横坐标、AND溶解度为纵坐标绘制相溶解度曲线，判断其包合类型，并计算其稳定常数Ks。Ks= slope/S0(1-slope)，其中S0是AND在37℃时不存在HP-β-CD时的浓度，slope是斜率。此公式适用于形成1∶1包合物时计算其稳定常数。AND∶HP-β-CD体系的相溶解度见图1。可见，在浓度0～50 mmol/L范围内，AND的溶解度随着溶液中HP-β-CD浓度的增加而增加。AND∶HP-β-CD体系的相溶解度曲线为AL型［7］，由稳定常数公式得稳定常数K1∶1为1;34×103L/mol。在50 mmol/L的HP-β-CD溶液中，AND的溶解度比在水中的溶解度增加了55;4倍。

2．5 溶出度测定

图1 37℃水中AND∶HP-β-CD体系的相溶解度图(n=3)

分别称取AND与2;1项下各方法制得的包合物及其物理混合物，参照2005年版《中国药典(二部)》溶出度测定方法［6］，以1%SDS溶液为介质，在(37;0±0;5)℃以50 r/min的速度搅拌，分别于1，2，4，6，8，12，16，30 min时取样5 mL，并及时补充等量37℃的1%SDS溶液，用0;45 μm微孔滤膜过滤(自取样至过滤30 s内完成)，将滤液适当稀释，用紫外分光光度法在223 nm波长处测定，计算AND的累积溶出百分率(%)=(已溶出AND的量/样品中AND的实际含量)×100%。结果见图2。可见，原药的溶出速率最慢，其次是物理混合物，其他各种环糊精包合物的溶出速率都要快得多，说明HP-β-CD包合可显著地增加AND的溶出速率。与原药和物理混合物相比，包合物的溶出速率有了大幅度提高。AND原药的溶出速率极慢，30 min时溶出率为52;5%。所有的二元体系都在一定程度上提高了AND的溶出度，物理混合物30 min时AND的溶出率为57;0%，这是因为HP-β-CD增加了AND的吸湿性，使其在水中的溶出速率加快。几种方法制备的HP-β-CD包合物可以极大增加AND的溶出速率，用研磨法、超声法和共沉淀法所制得的包合物在1%SDS溶液中30 min时的溶出率分别为93;9%，83;4%和89;4%。这3种包合方法所制得的包合物反应比较完全，大部分AND和HP-β-CD已形成包合物。

图2 AND、物理混合物及HP-β-CD包合物的溶出曲线(n=3)

3 讨论

通过比较包合物与AND及其物理混合物的溶解度和溶出度可知，HP-β-CD极大地增加了AND的溶解度和溶出度，因此HP-β-CD是一种理想的包合载体，比β-CD和SBE-β-CD的增溶效果均好［8］，利用它改善难溶性药物AND的溶解度是一种行之有效的方法。

［1］Samy RP，Thwin MM，Gopalakrishnakone P;Phytochemistry，pharmacology and clinical use of Andrographis paniculata［J］;Nat Prod Commun，2007，2:607-618;

［2］Singha PK，Roy S，Dey S;Protective activity of andrographolide and arabinogalactanproteinsfromAndrographispaniculataNees;against ethanol-induced toxicity in mice［J］;J Ethnopharmacol，2007，111(1): 13-21;

［3］Poolsup N，Suthisisang C，Prathanturarug S，et al;Andrographis paniculata in the symptomatic treatment of uncomplicated upper respiratory tract infection:systematic review of randomized controlled trials［J］;J Clin Pharm Ther，2004，29(1):37-45;

［4］Iruretagoyena MI，Tobar JA，Gonzalez PA，et al;Andrographolide interferes with T cell activation and reduces experimental autoimmune encephalomyelitis in the mouse［J］;J Pharmacol Exp Ther，2005，312(1): 366-372;

［5］刘文英;药物分析［M］;第5版;北京:人民卫生出版社，2005:80-81;

［6］国家药典委员会;中华人民共和国药典(二部)［M］;北京:化学工业出版社，2005:附录74-附录75;

［7］Del Valle EMM;Cyclodextrins and their uses:a review［J］;Process Biochemistry，2004，39(9):1 033-1 046;

［8］应国烽，陈梅莉;不同种类环糊精对穿心莲内酯的增溶效应研究［J］;中国药业，2010，19(24):26-28;

Study on Solubility of Andrographolide by Its Complexation with Hydroxypropyl-β-Cyclodextrin

Ma Haitao
(Shaoxing People's Hospital in Zhejiang，Shaoxing，Zhejiang，China312000)

ObjectiveThe dissolution and solubility of poorly water soluble drug andrographolide(AND)by its complexation with hydroxypropyl-β-cyclodextrin(HP-β-CD)were investigated;MethodsIn this study HP-β-CD was used as solubilizing agent;Inclusion complexes of AND were prepared by co-grounding，ultrasonic and co-precipitation method;The dissolution of inclusion complexes was determined and compared with drug alone and their physical mixture;Further，binary systems of AND with HP-β-CD;ResultsThe result showed that HP-β-CD and AND can form molar ratio 1∶1 inclusion complex and the solubility of AND was enhanced by 55;4 times;ConclusionThe solubility and dissolution rate of AND was increased by HP-β-CD inclusion complexation evidently;

andrographolide;hydroxypropyl-β-cyclodextrin;inclusion complexes;phase solubility;dissolution

TQ461;R284．1;R282．71

A

1006-4931(2012)13-0010-03

2011-06-26;

2011-12-14)