扑尔敏PLGA缓释微球的制备及体外质量评价

周荣平 姚雯雯 傅红兴 李 慧 叶其纯 夏 烽

温州医学院药学院，浙江温州 325035

扑尔敏PLGA缓释微球的制备及体外质量评价

周荣平 姚雯雯 傅红兴▲李 慧 叶其纯 夏 烽

温州医学院药学院，浙江温州 325035

目的 以扑尔敏为模型药物，开发一种PLGA缓释微球给药系统。 方法 采用复乳-溶剂挥发法制备扑尔敏PLGA缓释微球，紫外分光光度法测定其载药量、药物释放。 结果 制得的扑尔敏PLGA缓释微球平均粒径为（112±57）μm，含药量为（798.33±145.00）μg，载药量为（0.32±0.12）%；药物9 d累积药物释放量可达87%。 结论 本研究扑尔敏PLGA缓释微球制备方法简单，药物能达到长期缓慢释放。

扑尔敏；乳酸/羟基乙酸共聚物；微球；复乳-溶剂挥发法

微球是指利用天然的或合成的高分子材料将固体微粒或液滴包裹起来的微型球状实体[1]。微球被用于药物控缓释体系来治疗许多疾病，或者通过靶向作用使药物到达特定的组织和器官后缓慢释放，提高药物的治疗效果[2]。乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA）是FDA 批准用于临床试验的可生物降解高分子聚合物，体内代谢终产物为CO2和H2O，常用于作为缓释微球的载体[3]。扑尔敏为水中溶解药物，主要用于抗过敏治疗，临床上有Smith Kline Beecham公司生产的扑尔敏缓释小丸，作为组织胺H1受体拮抗剂，抗组胺作用较持久。本研究选择扑尔敏做为模型药物，采用复乳（W/O/W）-溶剂挥发法制备扑尔敏缓释微球，探讨了其制备条件对微球的粒径大小及其分布、包封率和载药量的影响。

1 仪器与试药

1.1 试药

扑尔敏（99.8%，湖北兴银河医药化工有限公司）；聚乳酸-羟基乙酸共聚物（PLGA，山东省医疗器械研究所提供，LA-GA：50∶ 50，M.W.10 000）；泊洛沙姆 188（F68，德国巴斯夫公司）；吐温-80、司盘-80（中国医药集团上海化学试剂公司）。

1.2 仪器

紫外可见分光光度计（UV-7502 PC，上海欣茂仪器有限公司）；冷冻干燥机（北京博医康实验仪器有限公司）；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；扫描电镜（S-3000N，HITACHI，日本）。

2 实验方法

2.1 扑尔敏PLGA缓释微球的制备

资料[4]及本实验室已有基础，称取扑尔敏8 mg至1.5 mLEP管中，加入50 μL蒸馏水中溶解，加1 mLPLGA溶液（二氯甲烷∶丙酮=3∶1为溶剂）混匀，吸至5 mL注射器，逐滴加至20 mL含F-68的蒸馏水中，用磁力搅拌器搅拌，转速500 rpm。滴加完后将含药PLGA溶液迅速倒至100 mL搅拌的蒸馏水中，室温下搅拌12 h，使PLGA固化。将溶液放置于旋转蒸发器浓缩至约30 mL，加入5%乳糖作为冻干保护剂在真空下冻干即得。

2.2 扑尔敏含量测定

2.2.1 扑尔敏标准曲线的绘制 精密称定扑尔敏25 mg置250 mL容量瓶中，加生理盐水溶解并定容作为母液。移取上述母液 1.0、2.0、5.0、10.0、20.0、30.0 mL 置 100 mL 容量瓶，加生理盐水定容，得到浓度为1.0～30.0 μg/mL，在223 nm处用紫外测定吸收度A，以空白生理盐水调零，对浓度（C）和吸收度（A）进行回归得到标准曲线方程：C=22.721A+0.161 1，R2=0.999 7；说明扑尔敏在1.0～30.0 μg/mL范围内浓度与吸收度之间线性关系良好。

2.2.2 制剂总含药量测定 精密称取微球冻干制剂（含扑尔敏约1 mg）至15 mL离心管中，加入5 mL生理盐水充分混悬，移取1 mL至25 mL的容量瓶中，用生理盐水定容，再加入二氯甲烷1 mL，超声破膜1 min，3 000 rpm离心5 min，取上层水相，稀释后在223 nm处测定吸光度A，代入标准曲线计算微球的总含药量。

2.3 微球粒径的测定

取扑尔敏PLGA缓释微球冻干粉末，加生理盐水3 mL，分散均匀后，吸取微球混悬液1 mL，光镜下测定其平均粒径。记录为平均粒径（± s）。

2.4 微球的体外药物释放实验

精密称取微球适量（含扑尔敏药量约2 mg），均匀分散于6 mL 生理盐水中，装入密闭透析袋，置于100 mL 生理盐水中，在磁力搅拌器中（37.0±0.5）℃，500 r/min，分别于 0、2、4、8、12、24、36、48、60、72、120、144、168、192、216 h 取 出 释 放介质5 mL，同时补充生理盐水5 mL，可见分光光度法测定吸光度。代入标准曲线计算不同时间的药物释放量和累积释放百分率。

2.5 微球外观形态的观察

称取扑尔敏 PLGA缓释微球冻干粉末适量，用蒸馏水混悬后过0.22 μm微孔滤膜后，室温下自然干燥或冻干，在真空下喷金，再利用电镜的二次电子方式进行观测。

3 结果

3.1 扑尔敏PLGA缓释微球的外观及平均粒径

扑尔敏PLGA缓释微球冻干粉外观呈均匀的白色疏松块状物，色泽均匀，外观饱满，表面细腻光洁。称取10 mg冻干样品加生理盐水2 mL混悬后在光学显微镜下观察测量，结果显示扑尔敏 PLGA微球平均粒径为（112±57）μm。

3.2 微球质量评价

3.2.1 含量测定结果（表1）

表1 扑尔敏微球制剂总含量测定（ ± s，n=10）

表1 扑尔敏微球制剂总含量测定（ ± s，n=10）

指标 含药量（μg） 载药量（%） 药物利用率（%）结果 798.33±145.00 0.32±0.12 32.70±5.77

由表1可知，PLGA微球中药物的含量和载药量依然比较低。

3.2.2 药物释放度的实验结果 以37℃的生理盐水溶液为释放介质，对扑尔敏PLGA缓释微球的体外释药，见图1。

图1 微球药物释放度曲线图

由图1可见，微球体外释药9 d累积药物释放量可达87%，最初24 h内，吸附在微球表面的药物快速释放，形成突释，有利于药物的快速起效；而24 h 后药物释放较匀速，接近零级释放，可减少药物浓度的波动和副反应，可延长药物浓度处于有效期的时间。

3.2.3 PLGA微球外观形态的观察

由图2、3可见，在自然干燥条件下，扑尔敏PLGA微球呈现圆润光滑的球体；而在烘干条件下，微球则出现塌陷和皱缩的情况。这说明温度升高，PLGA微球会产生变形。

图2 扑尔敏PLGA微球自然干燥

图3 扑尔敏PLGA微球烘干

4 讨论

水溶性药物的包封率一般均比较低，尤其在以水为外水相时，本研究采用复乳-溶剂挥发法来制备载药微球，理论上较0/W或W/0法的对水溶性药物的包封率要高[5]。实验中也发现，随着PLGA浓度提高，相同条件下形成的纳米粒包封率、药物利用率都随之增大。其原因可能为当PLGA浓度增大时，油相粘度随之上升，使得纳米粒在分散形成过程中速度减慢，药物不易随着有机溶剂挥发而向球外扩散，因此药物损失减小。今后研究重点是通过配方和制作工艺的改进从而完善此缓释系统，以便更好地应用于医学领域。

[参考文献]

[1] 朱家蕙，沈正荣，王芳，等.含睾丸酮的乳酸聚乳酸共聚物微球的制备及外释放 [J].中国药学杂志，1997，32（10）：595-598.

[2] 贾文娟.药物缓释微球的制备、表征及性能研究[D].成都：四川大学，2007，24（5）：38-42.

[3] Gomes A J，Faustino A S，Machado A E H，et al.Characterization of PLGA microparticles as a drug carrier for 3-ethoxycarbonyl-2H-benzofuro [3，2-f]-1-benzopyran-2-one ultrastructral study of cellular uptake and intracellular distribution[J].Drug Deliv，2006，13（2）：447-454.

[4] 慕容，严向阳，张连营，等.载阿霉素磁性壳聚糖微球靶向治疗大鼠移植性肝癌的研究[J].西北大学学报（自然科学版），2007，37（5）：785-788.

[5] Gomes A J，Faustino A S，LunardiC N，et al.Evaluation of nanoparticles loaded with benzopsoralen in rat peritoneal exudates cells[J].Int J Pharm，2007，332：153-160.

Preparation of Chlorpheniramine PLGA sustained release microspheres and quality evaluation in vitro

ZHOU Rongping YAO Wenwen FU Hongxing LI Hui YE Qichun XIA Feng
Wenzhou Medical College Pharmacy School,Wenzhou 325035,China

ObjectiveTo develop of a new type of PLGA microspheres drug delivery system of Chlorpheniramine.MethodsThe PLGA sustained-release microspheres were made by double emulsion-solvent evaporation technique. The contents and the drug release were determined by ultraviolet spectrophotometry.ResultsThe mean diameter of PLGA microspheres is(112±57)μm,the contents of the drug is(798.33±145.00)μg, and the drug loading is(0.32±0.12)%.Drug accumulate release in 9 days can reach 87%.ConclusionThe Chlorpheniramine PLGA sustained-release microspheres are easily made,and the drugs can achieve long-term sustained release.

Chlorpheniramine;Poly lactic-co-glycolic acid;Microspheres;Double emulsion-solvent evaporation technique

R917

A

2095-0616（2012）09-52-02

温州医学院本专科学生科研立项资助课题（wyx201101052）。▲

（收稿日期：2012-03-22）