高效液相色谱法测定白酒中罗汉果V的含量

曹玉发，徐 燕，李 建，姜 雪

（江苏省宿迁市产品质量监督检验所，江苏宿迁223800）

高效液相色谱法测定白酒中罗汉果V的含量

曹玉发，徐 燕，李 建，姜 雪

（江苏省宿迁市产品质量监督检验所，江苏宿迁223800）

采用高效液相色谱法测定白酒中罗汉果甜苷V的含量，从而达到检测白酒中添加罗汉果浸泡液的目的。检测条件为：Welch Materials Column-XB-C18（4.6×250mm，5μm）色谱柱，以乙腈－水（77∶23）为流动相，流速为1mL/min，检测波长为203nm，柱温25℃。罗汉果甜苷V进样量在0.4~20μg之间线性关系良好（R2=0.9983），回收率范围在97.5%~105.5%，RSD为2.56%（n=6）。该方法操作简便、测定快速、结果准确，同时具有良好的精密度、重复性和稳定性，可作为白酒中添加罗汉果浸泡液的检测方法。

罗汉果，罗汉果甜苷V，白酒，高效液相色谱法，检测

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

白酒样品 自配，无水乙醇溶液与水按50∶50（V/V）配制而成；罗汉果干燥果实 温岭市哲翰保健食品有限公司，20110412；罗汉果甜苷V标准品（mogroside V） ≥98%，深圳时得佳科技有限公司；乙腈、甲醇 均为进口色谱纯试剂。

电子分析天平 梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；SCQ-2201超声波清洗器 上海声彦超声波仪器有限公司；Waters 510高效液相色谱仪 美国Waters公司。

1.2 实验方法

1.2.1 标准溶液的配制

1.2.1.1 1000μg/mL罗汉果甜苷V标准储备液 精确称取50.0mg罗汉果甜苷V，用白酒溶解后定容至50mL，配制成浓度为1000μg/mL的罗汉果甜苷V标准储备液。

1.2.1.2 系列浓度罗汉果甜苷V标准溶液 从1000μg/mL的罗汉果甜苷V标准储备液中准确吸取2、5、10mL溶液，分别用白酒定容至100mL，配制成20、50、100μg/mL的罗汉果甜苷V标准溶液；从1000μg/mL的罗汉果甜苷V标准储备液中准确吸取2、5mL溶液，分别用白酒定容至10mL，配制成200、500μg/mL的罗汉果甜苷V标准溶液。

1.2.2 阳性样品溶液的制备 罗汉果干燥果实1个，称重，粉碎后置于1L锥形瓶中，加入300mL水，超声提取20min，冷却30min后继续超声提取20min，冷却，过滤，将滤液4000r/min离心10min，取上清液2mL，用白酒定容至1000mL，充分混匀，制成含有罗汉果浸泡液的白酒阳性样品溶液。

1.2.3 样品处理方法 用100mL单标移液管准确量取样品溶液100mL至150mL烧杯中，50℃水浴蒸干，用1mL甲醇定容；经微孔过滤膜（0.45μm）过滤后供高效液相色谱测定用。

1.2.4 白酒中罗汉果甜苷V检测的液相色谱法 采用高效液相色谱仪检测白酒中的罗汉果甜苷V。具体操作条件为：Welch Materials Column-XB-C18（4.6× 250mm，5μm）色谱柱；流动相：V乙腈∶V水=77∶23；流速：1.0mL/min；紫外检测器；柱温：25℃；检测波长：203nm；进样量：20μL。

1.2.5 空白白酒及罗汉果甜苷V标准溶液中罗汉果甜苷V含量测定的高效液相色谱图 空白白酒样品按实验方法1.2.3和1.2.4进行处理和测定，得高效液相色谱图。对100μg/mL罗汉果甜苷V标准溶液按实验方法1.2.4进行测定，得高效液相色谱图。

1.2.6 罗汉果甜苷V标准曲线的绘制 将1000、500、200、100、50、20μg/mL的罗汉果甜苷V标准溶液，均按实验方法1.2.4进行测定，得相应谱图。以罗汉果甜苷V浓度为横坐标，对应峰面积为纵坐标作图，即得罗汉果甜苷V标准曲线。

1.2.7 罗汉果甜苷V回收率计算与精密度实验 对800、400、200、80、40、20μg/mL不同浓度的罗汉果甜苷V酒样按实验方法1.2.3和1.2.4进行处理和测定，对照罗汉果甜苷V标准曲线得各实测值，与加标值进行比较，即可进行回收率计算。

将100μg/mL罗汉果甜苷V酒样按实验方法1.2.3和1.2.4进行处理和测定，重复测定六次，求精密度。

1.2.8 稳定性实验 准确量取白酒样品溶液100mL，按1.2.3步骤处理样品，于0、4、8、12、24、48h分别按1.2.4条件进样测定，外标法计算罗汉果甜苷V的含量，观察其稳定性。

1.2.9 白酒中及罗汉果中甜苷V含量的测定 从同一瓶白酒样品溶液中准确量取5份样品，每份100mL，按1.2.3和1.2.4进行样品处理和HPLC分析。外标法计算白酒样品溶液中罗汉果甜苷V的含量。

2 结果与讨论

2.1 空白白酒及罗汉果甜苷V标准溶液中罗汉果甜苷V含量测定的HPLC图

图1 空白白酒的高效液相色谱图Fig.1 HPLC chromatogram map of blank liquor

图2 罗汉果甜苷V标准溶液的高效液相色谱图Fig.2 HPLC chromatogram map of mogroside V standard solution

图1为空白白酒的高效液相色谱图，图2为罗汉果甜苷V标准溶液的高效液相色谱图，对比可以看出：图1空白白酒（未添加罗汉果甜苷V）的高效液相色谱图，除了在5min处有溶剂峰以外，其它时间图线基本在基线附近，图像平稳清晰，无其他峰的出现；图2罗汉果甜苷V标准溶液的高效液相色谱图，罗汉果甜苷V的保留时间为11~12min，所以空白酒样不含罗汉果甜苷V。

2.2 罗汉果甜苷V标准曲线的绘制

图3 罗汉果甜苷V标准曲线图Fig.3 Standard curve of mogroside V of HPLC detection

图3为罗汉果甜苷V标准曲线图。根据罗汉果甜苷V浓度和峰面积的线性关系，可以建立标准曲线，并求出回归方程为：y=4804.2x-21419，R2=0.9983。结果表明罗汉果甜苷V进样量在0.4~20μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。

2.3 罗汉果甜苷V的回收率与精密度

表1 回收率实验考察结果Table 1 Recovery rate of mogroside V at different spiked amounts

表2 100μg/mL罗汉果甜苷V酒样精密度实验考察结果Table 2 Six repetitive data of mogroside V using HPLC method in for liquor

通过计算，得到回收率范围在97.5%~105.5%（见表1）。经重复测定，得到RSD为2.56%（n=6），表明该方法具有良好的精密度（见表2）。

2.4 稳定性实验

表3 白酒中罗汉果甜苷V测定稳定性实验考察结果Table 3 Stability test of mogroside V in liquor

经测定，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V平均峰面积积分值为110264.12，RSD为1.58%（n=6），表明白酒样品溶液中罗汉果甜苷V在48h内稳定（见表3）。

2.5 白酒中及罗汉果中甜苷V含量的测定

由图4可见，白酒中罗汉果甜苷V的保留时间为11.382min，谱图中除溶剂峰外，其它时间图线基本在基线附近，图像平稳清晰，无其他峰的出现。

从实验方法1.2.2和1.2.3可得，罗汉果甜苷V在果中含量的计算公式为：

图4 白酒中罗汉果甜苷V含量测定色谱图Fig.4 HPLC chromatogram map of content of mogroside V in liquor

表4 白酒中及罗汉果中甜苷V含量的测定Table 4 Repeatability test and content of mogroside V in liquor

经测定，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V的平均含量为27.72μg/mL，在果中平均含量为0.8048%，RSD为1.78%（n=5）。结果表明，该方法具有良好的重复性。

3 结论

3.1 通过实验得到该方法白酒中罗汉果甜苷V标准曲线方程为：y=4804.2x-21419，R2=0.9983。结果表明罗汉果甜苷V进样量在0.4~20μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。通过计算，得到回收率范围在97.5%~105.5%，RSD为2.56%，表明该方法具有良好的精密度。

3.2 通过实验证实，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V在48h内稳定。

3.3 通过实验测得，白酒样品溶液中罗汉果甜苷V的平均含量为27.72μg/mL，在果中平均含量为0.8048%（这一结果与文献报道的结果较为一致[5，9]，说明本实验采购的罗汉果质量优良，符合实验要求），结果RSD为1.78%（n=5），实验表明该方法具有良好的重复性。3.4 该方法操作简便、测定快速、结果准确，同时具有良好的精密度、重复性和稳定性，可作为白酒中添加罗汉果浸泡液的检测方法。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典（一部）[M].北京：化学工业出版社，2005：147.

[2]黎海彬，王邕，李俊芳，等.罗汉果的化学成分与应用研究[J].食品研究与开发，2006，27（2）：27.

[3]肖刚，王勤.罗汉果研究进展[J].上海中医药杂志，2006，40（11）：71-73.

[4]Takemoto T，Arihara S，Nakajima T，et al.Studies on the constituents of Fructus Momordicae.I.on the sweep principle[J]. Yakugaku Zasshi，1983，103（11）：1151-1154.

[5]欧莹，陈金月，覃荣灵.HPLC测定罗汉果中罗汉果甜苷V的含量[J].广西中医学院学报，2007，10（4）：85-86.

[6]李典鹏，黄永林，刘金磊，等.HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷ⅡE、苷Ⅲ的含量[J].天然产物研究与开发，2006，18：850-853.

[7]周兢，王梦月，李晓波，等.HPLC法测定罗汉果中罗汉果苷V和11-氧化罗汉果苷V[J].中草药，2007，38（2）：196-198.

[8]梁宇锋，林永春.分光光度法测定罗汉降糖颗粒中罗汉果甜苷含量[J].牡丹江医学院学报，2009，30（2）：37-38.

[9]黄丽婕，苏小建，何星存，等.固相萃取-高效液相色谱法快速测定罗汉果甜甙V的含量[J].食品研究与开发，2008，29（10）：84-87.

[10]马少妹.罗汉果甜苷的HPLC法分析[J].福建分析测试，2006，15（4）：3-6.

Determination of mogroside V in liquor by HPLC

CAO Yu-fa，XU Yan，LI Jian，JIANG Xue
（Product Quality Supervision and Testing Institute of Suqian，Suqian 223800，China）

To establish an optimal HPLC method for determining the contents of mogroside V in liquor，and gain the ends of detection of Momordica grosvenori infusion in liquor.Welch Materials Column-XB-C18（4.6×250mm，5μm）was used with acetonitrile-water（77∶23）as mobile phase，while flow rate was 1mL/min.Detection wavelength was set at 203nm according to the fixed UV detector.Column temperature was 25℃.The liner range of mogroside V was 0.4～20μg（R2=0.9983）while the range recovery of mogroside V was 97.5%～105.5%with 2.56%of RSD. HPLC method was simple，rapid，accurate，while with good precision，repeatability and stability.It can be used in the detection of momordica grosvenori infusion in liquor.

Momordica grosvenori；mogroside V；liquor；HPLC；detection

TS207.3

A

1002-0306（2012）07-0350-04

国家颁布的GB/T 18356-2007《地理标志产品贵州茅台酒》中规定，以茅台为代表的酱香型白酒存放时间需在3年以上。此时酒体颜色会呈微黄，这是因为长时间存放以后，其中某些微量物质会发生颜色的变化，而其它白酒必须为无色透明液体。但由于陈放的酒比新酿造的酒味道芳香、甜味甘醇，加上部分企业大肆宣传陈年老酒的商业炒作行为，致使许多消费者盲目跟风，错误地认为只有酒体呈现微黄才是真的陈酒。为了迎合消费者的这种错误心理，有些生产厂商就在酒中投放添加剂。据调查，目前大多数小型白酒生产厂家通过添加色素，而一些有条件的大企业可能会通过向酒中添加罗汉果浸泡液的方式使酒体呈现微黄色。罗汉果是我国广西特产中药，为葫芦科植物罗汉果[Siraitia grosvenorii（Swingle）C. Jeffery ex lu et Z.Y.Zhang]的果实[1]，其主要化学成分为非糖甜味物质-甜苷。目前对罗汉果的研究与开发主要集中在甜苷上，其中葫芦素烷型三萜皂苷类罗汉果甜苷V（mogroside V）是甜苷中主要甜味成分，占总甜苷量的30%~40%[2-3]。罗汉果甜苷V因具有甜度高、热量低、色泽浅、水溶性及稳定性好、食用安全等优点，我国已于1996年批准该产品为食品添加剂，可作为甜味剂部分或全部代替蔗糖，而广泛用于各种食品[4]。罗汉果甜苷V作为罗汉果中最主要的成分，已有部分学者对其进行了研究，建立了罗汉果中罗汉果甜苷V含量的测定方法，以此作为罗汉果药材的质量控制方法[5-10]。然而，酒类中罗汉果甜苷成分的检测方法还未见报道。因此，本研究拟采用高效液相色谱技术，检测白酒中罗汉果甜苷V含量，从而为判定白酒中是否添加罗汉果浸泡液提供一种简便、可靠的方法。

2011－06－20

曹玉发（1979－），男，在读硕士，工程师，研究方向：食品科学。

江苏省质量技术监督局资助项目（KJ103736）。