安徽地区汉族人群血小板膜糖蛋白Ⅰa C807T基因多态性与老年人急性心肌梗死的关系

刘 萍，徐 彬，刘 平，张 志，李建平，张 立，苏 浩

(1.安徽医学高等专科学校，合肥 230601;2.合肥工业大学医院内科，合肥 230009;3.安徽省立医院心内科，合肥 230001)

近年来，我国急性心肌梗死(acute myocardial infarction，AMI)的发病率呈上升趋势，严重威胁着人民生命健康。AMI属于多基因遗传性疾病，且是环境与多种遗传因素相互作用的结果。血小板膜糖蛋白(GP)是血小板发挥黏附和聚集功能的主要成分，受GPⅠa-807基因的多态性的影响，在血栓形成及止血过程中起到重要作用［1］。本研究通过检测安徽地区汉族人中AMI患者及健康对照者的血小板膜糖蛋白(GP)受体Ⅰa C807T基因多态性，明确血小板GPⅠa C807T的基因型，探讨其多态性与老年人AMI发病的关系，分析GPⅠa-807等位基因型是否为汉族人AMI发病的危险因素，以及与冠心病发病的是否存在相关性，以期对预防该病提供临床资料。

1 资料与方法

1.1 一般资料 以2009年1月—2011年12月在安徽医科大学第一附属医院、省立医院和新安医院心内科收集AMI患者为实验组(74例)，其中男51例，女23例;均符合WHO心肌梗死的诊断标准;年龄47～79岁，平均年龄(64.8±9.2)岁。以同期门诊体检健康者为对照组(60例)，其中男41例，女19例;年龄 46～74岁，平均年龄(59.2±7.8)岁。两组在年龄、性别构成、血脂水平及吸烟量方面差异无统计学意义，具有可比性。

1.2 方法

1.2.1 标本采集 取AMI患者和健康者外周静脉血2 ml，于EDTA-2Na抗凝管中，用全血基因组DNA抽提试剂盒(购自上海生物工程有限公司)提取DNA，用紫外分光光度计测定DNA浓度，－80℃保存备用。

1.2.2 检测方法 使用PCR技术扩增外周血基因组DNA，其引物见表1。扩增目的基因片段长度约为184 bp，引物均由上海生工公司合成。PCR反应体系如下:在EP管中，加入以下试剂，使终末浓度分别为 1 × buf，MgC122.8 mmol/L，dNTP200 μmol/L，引物 0.25 pmol/μl，基因组 DNA400 ng，Taq 酶 2 U，总体积达 50 μl，上面覆盖 40 μl石腊油。

表1 扩增外周血基因组DNA引物

PCR扩增程序如下:先95℃变性3 min，35个循环，93℃变性 50 s，55℃退火 50 s，72℃延伸1 min，最后72℃再延长20 min。用1×TBE缓冲液进行电泳，在100 V下电泳约30 min，至点样液在凝胶上行进2/3处停止电泳。在紫外透射仪下观察结果，通过PCR产物的条带与DNA Marker的对比分析，当 P1、P2出现扩增产物时，基因型为 GPⅠa807nt CC;仅P1、P3有扩增产物时，GPⅠa基因型为807nt TT;当P1、P2和P1、P3均有扩增产物时，基因型为GPⅠa807nt TC。

1.2.3 统计学分析 应用SPSS 13.0统计学软件对各项资料进行统计学分析，采用χ2检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

两组GPⅠa 807nt的基因型及等位基因型分析:PCR扩增后GPⅠa的基因产物经2%的琼脂糖凝胶电泳，紫外灯下观察结果，产物为184 bp的片段，符合目的片段的大小。

在74例AMI患者中，GPⅠa基因807nt C等位基因出现的频数为73，T等位基因出现的频数为77，对照组中C等位基因出现的频数为86，T等位基因出现的频数为34(表1)。两组GPⅠa基因型及等位基因频率分布实验组GPⅠa T等位基因携带者频率与对照组相比差异有统计学意义(χ2=7.33，P ＜0.05)，见表2。

表2 实验组与对照组GPIa-807基因C807T多态性分析

实验组与对照组比较，TT+TC基因型分布明显增多(图1)。实验组T等位基因出现的频率也显著高于对照组(χ2=7.33，P ＜0.05)(表 2)。由此可见，血小板膜GPⅠa基因C807T多态性与心肌梗死有关联性。

图1 实验组与对照组GPⅠa 807nt基因型比较

3 讨论

随着分子生物学的发展，对GP基因多态性与AMI关系的研究也越来越深入。同时高血压、高血脂、吸烟和糖尿病等也被认为是AMI的危险因素。若能对以上这些因素的进行提早干预，则能在一定程度上可防止AMI的发生。

GPⅠa是1条 α2链，GPⅡa又称血小板/内皮细胞黏附分子-1，是1条 β1链，GPⅠa/Ⅱa中，只有GPⅠa 有多态性［2］。Kunicki等［3］研究发现，GPⅠa基因的多态性与GPⅠa-Ⅱa表达水平均有相关性。携带T等位基因的个体，GPⅠa-Ⅱa表达水平高;反之，携带C等位基因个体，GPⅠa-Ⅱa表达水平低。GPⅠa-Ⅱa能引起血小板的黏附和聚集，在血栓形成及止血过程中起到重要作用［4］。

本研究显示，实验组的患者年龄都较大，提示AMI的发生与高龄有一定的相关性。与对照组相比，实验组TT+TC基因型携带者明显增多，同时实验组T等位基因出现的频率也有显著提高，表明GPⅠa C 807T基因多态性与AMI有相关性。Douglas等［5］认为TT纯合子是心肌梗死的重要原因，CC基因型不是AMl发病的独立危险因素，而TT+TC基因型的高表达可能是AMI的一个遗传性危险因素。

AMI是由多因素相互作用引起的复杂性疾病。临床环境下，不同AMI患者的临床结果以及药物疗效的差异均提示血小板受体GPⅠa的基因多态性可能与AMI的发生、发展有关。Antoniades等［6］指出GPⅠa基因807nt多态性与老年人AMI的发病有相关性，是对心肌梗死急性期和心肌梗死人群发病后Ⅰa发生变异的独立预测因子［6］。

本研究只对一个地区汉族人群GPⅠa-807T基因型和AMI的关系进行分析，无法控制基因和环境相互作用这一潜在的混杂因素，因此还需在不同人种和不同人群的大量患者中进行进一步研究，为AMI发病的遗传性因素的早期发现提供更充分的依据，以便对高危患者和有遗传性AMI发病的人群进行早期识别和干预。

［1］江 雁.血小板膜糖蛋白及其多态性的研究［J］.中国实验诊断学，2003，7(4):281-283.

［2］陈 赟.血小板膜糖蛋白与血栓性疾病［J］.新乡医学院学报，2012，29(3):221-223.

［3］Krupinski J，Kaluza J，Kumar P，et al.Role of angiogenesis in patients with cerebral ischemic stroke［J］.Stroke，1994，25:1794-1798.

［4］杨学伟，黄 金，周 畅.血小板膜糖蛋白ⅠaC807T基因多态性与脑梗死急性期血小板功能的关系［J］.齐鲁医学志，2006，21(2):111-113.

［5］Douglas H，Michaelides K，Gorog D A，et al.Platelet membrane glycoproteinⅠbα gene-5T/C Kozak sequence polymorphism as an independent risk factor for the occurrence of coronary thrombosis［J］.Heart，2002，87:70-74.

［6］Antoniades C，Tousoulis D，Vasiliadou C，et al.Genetic polymorphisms of platelet glycoproteinⅠa and the risk for premature myocardial infarction:effects on the release of sCD40L during the acute phase of premature myocardial infarction［J］.J Am Coll Cardiol，2006，47(10):1959-1966.