分光光度法测定鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量

王永昌，高克立，樊锦慧，李 娟

（甘肃省医学科学研究院分析实验中心，甘肃 兰州 730050）

分光光度法测定鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量

王永昌，高克立，樊锦慧，李 娟

（甘肃省医学科学研究院分析实验中心，甘肃 兰州 730050）

目的 建立鸡矢藤药材中总环烯醚萜苷的含量测定方法。方法 采用分光光度法，以鸡矢藤苷为对照品，经香草醛-乙酸显色，紫外-可见光全波长扫描在620 nm处有最大吸收，并在此处测定其含量。结果 鸡矢藤苷及其药材在620 nm处有最大吸收，测得含量稳定，重现性好，鸡矢藤苷在10．3～51．5μg/m l范围内线性关系良好（R2=0．999 5）。结论 建立鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量测定方法，该方法简便、准确、可靠，可作为鸡矢藤提取、分离、纯化过程的质量控制方法。

分光光度法；鸡矢藤；总环烯醚萜苷；含量测定

鸡矢藤为茜草科鸡矢藤属多年生草质藤本植物，鸡矢藤[Paederia scandens（Lour．）Merr．]或毛鸡矢藤[P．scandens（lour．）merr．var．tomentosa（Bl．）H．-M．]全草或根是我国传统的中草药，具有祛风活血，止痛解毒，消食导滞，除湿消肿的功效，在我国分布广泛。鸡矢藤含有多种化学成分，包括挥发油、环烯醚萜苷类、多种烷醇、齐墩果酸等油脂及甾醇类化合物[1]。现代研究证明，鸡矢藤提取物具有良好的保肝、镇痛、抗惊、解毒、消炎、抗病毒和抗肿瘤等作用[2～7]。研究表明，鸡矢藤总环烯醚萜苷是一类有效成分[8～9]。目前，对鸡矢藤中总环烯醚萜苷的质量控制研究较少[10]。我们通过分光光度法建立了鸡矢藤中总环烯醚萜苷含量的测定方法，此法简便、快速、准确、易行，适于对鸡矢藤中总环烯醚萜苷的含量进行测定。

1 材料及仪器

1.1 材料

鸡矢藤药材采自甘肃陇南地区，标本经甘肃省医学科学研究院石长栓副研究员鉴定为茜草科鸡矢藤属植物鸡矢藤的全草。

鸡矢藤苷对照品由本研究室分离纯化并鉴定结构，采用HPLC归一法测定其含量为98．60%。

薄层层析硅胶G（批号：040212，青岛海洋化工有限公司生产）、层析用硅胶（100～140目，青岛海洋化工有限公司生产）、D101 型大孔吸附树脂[非极性，批号：04/05/12（1-2）]、活性炭（粒状，批号：020226，天津市天达净化材料精细化工厂生产）、冰醋酸、甲醇、乙酸乙酯、正丁醇及其他试剂均为市售AR级。

1.2 仪器与设备

AE260（万分之一）型电子分析天平（上海）、DHG-9030型电热恒温鼓风干燥箱（上海）、SHB-Ⅲ型循环水式多用真空泵（郑州）、KDM型调温电热套（山东）、B3200S-T型超声波振荡仪、BüCHI 461型旋转蒸发仪（瑞士）、UV-240型紫外-可见分光光度仪（日本岛津）、Aligent-1100型高压液相色谱仪（德国）、DLSB-5/10型低温循环泵（郑州）。

1.3 对照品溶液的制备

精密称取鸡矢藤苷对照品10．0 mg置10 m l容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，制成1．03mg/m l的对照品溶液备用。

1.4 供试品溶液的制备

精密称取在60℃干燥后粉碎的鸡矢藤粗粉10．0g，用甲醇索氏提取2 h，过滤取滤液，定容至100 ml容量瓶中，摇匀，作为供试品溶液。

2 实验

2.1 显色条件

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和甲醇0．5m l于10 m l试管中，水浴蒸干，冷却至室温后，加入0．2 ml的5%香草醛冰醋酸溶液和0．8m l的高氯酸，经60℃水浴加热15 min，取出立即置冰水浴中3min[11]，用冰醋酸定容至刻度，摇匀，以甲醇管为空白，用紫外-可见分光光度计于620 nm处测定吸光度。

2.2 吸收波长的选择

精密吸取对照品溶液、供试品溶液和甲醇 0．5 m l，按“2．1”项下显色条件显色，用紫外-可见分光光度计于200～700 nm范围扫描，结果对照品和供试品溶液在620 nm处具有相似最大吸收，故选择620 nm为测定吸收峰。

2.3 线性关系

精 密 吸 取 对 照 品 溶 液 0．10、0．15、0．20、0．25、0．30、0．35、0．40、0．45、0．50 ml，水浴蒸干，按“2．1”项下显色条件显色，在620 nm 处测定吸光度值，分别为 0．091、0．186、0．287、0．372、0．293、0．557、0．638、0．742、0．843。以对照品溶液浓度（c）为横坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制标准曲线，结果鸡矢藤苷在10．3～51．5μg/ml范围内具有良好的线性关系，得回归方程：A=0．018c-0．091 8，R2=0．999 5。

2.4 稳定性试验

精密吸取对照品溶液1．0m l，用甲醇定容至10m l容量瓶中，摇匀。精密吸取 0．5ml，水浴蒸干，按“2．1”项下显色条件显色后1～2 h内，每隔10min在620 nm处测定其吸光度，其吸光值分别为 0．047，0．047，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．048，0．047，0．047，0．046，0．046，平均值为 0．047，RSD=0．02%（n=12），表明在0～2 h内稳定性良好。

2.5 精密度试验

取对照品溶液 0．5 m l，水浴蒸干，按“2．1”项下显色条件显色，显色后 1 h 内连续测定 6 次吸光度，RSD=0．02%（n=6），表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验

精密称取鸡矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”项下方法制成供试品溶液。以“2．1”项下方法显色，测定结果平均含量为1．53%，RSD=2．33%（n=6），说明该法重复性良好。

2.7 加标回收试验

精密吸取“2．7”项各供试品溶液 5．0ml，分别精密加入对照品溶液 1．0m l，甲醇定容至 10．0ml，混匀，制成样标供试液。按“2．1”项下方法显色，测定并计算回收率，具体见表1。

表1 加标回收率试验结果

2.8 样品测定

精密称取鸡矢藤粗粉 6 份，每份 10．0 g，按“2．2”项下方法制成供试品溶液。以“2．1”项下方法显色，测定吸光度，根据标准曲线计算得出甘肃产地鸡矢藤中总环烯醚萜苷平均含量为1．50%。

3 讨论

（1）鸡矢藤中含有多种化学成分，包括挥发油、环烯醚萜苷类、多种烷醇、齐墩果酸等油脂及甾醇类化合物，仅对某一成分进行含量测定很难全面评价其质量的优劣。曲银锋等[12]对鸡矢藤注射液中的挥发油成分进行分析及测定，孙素珍[10]利用超高压液相色谱法测定了鸡矢藤熊果苷含量[10]，我们认为也应该对作为鸡矢藤抗炎镇痛的有效部位之一的环烯醚萜苷类，进行质量控制，并以鸡矢藤苷为对照品测定其总环烯醚萜苷较为合理。

（2）在试验过程中，曾选择香草醛-冰醋酸法[13]，对二甲氨基苯甲醛-盐酸法[14]，对二甲氨基苯甲醛-醋酸法[13]，用紫外-可见分光光度计在400～700 nm范围内扫描，3种显色方法均在620 nm处有最大吸收，香草醛-冰醋酸法中标准溶液显天蓝色，呈色较稳定，含量测定在2 h内较稳定。而对二甲氨基苯甲醛-盐酸法和对二甲氨基苯甲醛-醋酸法显色不明显，且不稳定。故认为选择香草醛-冰醋酸法测定鸡矢藤总环烯醚萜苷类成分较为理想。

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G424．31

A

1671-1246（2012）02-0096-02

甘肃省科技厅条件财务处项目（GKS022-B05-07）