复方桑黄颗粒中总黄酮成分提取工艺研究

陈雨微 张红玉 宋棋芬 徐茂义 黄越燕

嘉兴学院医学院，浙江嘉兴 314001

复方桑黄颗粒中总黄酮成分提取工艺研究

陈雨微 张红玉 宋棋芬 徐茂义 黄越燕▲

嘉兴学院医学院，浙江嘉兴 314001

目的优化复方桑黄颗粒的提取工艺。方法 以正交试验表对复方桑黄颗粒中总黄酮成分醇提工艺的影响因素进行考察，优选工艺条件。 结果 优选提取工艺为20倍量的70%乙醇，回流提取3次，总黄酮提取率为30.29%，出膏率为10.39%。 结论 该提取工艺条件稳定，重现性好，可为复方桑黄颗粒的大生产提供参考依据。

桑叶；总黄酮；提取工艺；正交试验

复方桑黄颗粒源自临床验方，是由桑叶、葛根、黄精、百合制成的复方制剂，具有滋肾润肺、补脾益气、除烦止渴之功效。现代医学研究证实，桑叶黄酮具有降糖、抗氧化、降血脂、抗动脉粥样硬化、抗菌、抗病毒等药理作用[1-2]，葛根素具有降低血管阻力，改善心脑血液循环，降血糖、抗氧化等药理作用[3]。根据各药材的有效成分及功能，为最大限度地保留有效成分[4-5]，并依据适当经济的原则，对桑叶、葛根采取乙醇回流提取总黄酮类成分，对黄精、百合水煎煮提取多糖成分，合并制成复方制剂。为保证制剂质量及临床疗效，本实验通过正交实验探讨复方桑黄颗粒中总黄酮成分提取工艺，以寻找最佳的提取工艺条件。

1 仪器与试药

1.1 仪器

RE-52AA型旋转蒸发仪（上海亚荣）；SB-5200型超声清洗仪（上海必能信）；GM-0.33II型隔膜式真空泵（天津腾达）；UV-210型紫外分光光度计（日本岛津）；BS110S型电子分析天平（北京赛多利斯）；DZF-6050型真空干燥箱（上海精宏）。

1.2 试药

芦丁对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100080-200708）；桑叶、葛根、黄精、百合，购于嘉兴嘉信医药股份有限公司，经鉴定符合《中国药典》2010年版有关规定。乙醇、丙酮、氯仿、甲醇等试剂为分析纯，乳糖、可溶性淀粉、糊精等为药用辅料。

1.3 统计学处理

应用SPSS17.0统计软件对样本率进行x2检验和Spearman相关系数分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 方法与结果

2.1 正交设计

通过预实验得知影响提取的主要因素为乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）、提取次数（D），为进一步优选各因素最佳工艺水平，设计正交试验，考虑到复方多成分作用的特点及方中黄酮类化合物的生物特性，选择浸膏得率与总黄酮提取率为综合评价指标，采用L9（34）正交表优选醇提的最佳工艺条件，因素水平设计见表1，平行重复3次实验（n=3）。

表1 正交试验因素水平设计

2.2 实验方法及结果

药材烘干至恒重，粉碎过12目筛，按复方桑黄颗粒处方比例精密称取桑叶、葛根共20 g，共计9份，按表1条件进行试验。即用相应溶剂密闭浸渍30 min，于70℃水浴条件下乙醇回流提取，提取液合并过滤，滤液于4 ℃冷藏2 h后减压回收乙醇至无醇味，水浴浓缩，抽滤，滤液定容于100 mL，摇匀，得1～9号样品，待测。平行操作3遍，共计27份样品，按“2.2.1”和“2.2.2”项目下操作，测定总黄酮提取率和浸膏得率，并充分考虑二者关系及对真实结果的影响，利用总黄酮平均提取率+浸膏平均得率作为综合加权评分，得出综合评分，结果见表2。为进一步确定各因素对结果的影响大小，对试验结果进行了方差分析，结果见表3。

2.2.1 浸膏得率的测定 精密量取50 mL的桑叶葛根提取液，置于洁净干燥并已称重的蒸发皿中，水浴蒸干，置于烘箱内105℃干燥3 h，于干燥器内冷却30 min，迅速精密称定质量，计算浸膏得率，记录3次平均值。浸膏得率=干膏质量/药材重×100 %。结果见表2。

2.2.2 总黄酮含量的测定 （1）对照品溶液的制备：精密称取芦丁标准品10.5 mg，加70%乙醇适量使溶解，定容于50 mL容量瓶中，摇匀，得对照品储备液。（2）标准曲线的绘制：精密量取对照品储备液 0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0、4.5、5.0、5.5、6.0 mL于25 mL容量瓶中，补加70%乙醇至6 mL，加入5%亚硝酸钠溶液1 mL，摇匀后放置6 min，加入10%硝酸铝溶液 1 mL，摇匀后放置6 min，加入4 %氢氧化钠溶液10 mL，用70%乙醇稀释至刻度，摇匀，得芦丁对照品溶液。以0 mL芦丁对照品溶液作空白，在360～600 nm波长范围测定吸光度，选择吸光度最大的500 nm处，测定其吸光度。以吸光度值（Y）为纵坐标，浓度（X）为横坐标绘制标准曲线，计算回归方程，得Y=0.093 1X-0.002 3（r= 0.996 7）。（3）供试品溶液的测定：量取少量样品液以0.45 μm微孔滤膜过滤，精密吸取50 μl滤液置于25 mL容量瓶中，加入70%乙醇6 mL，按照“2.2.2.2下”加入5 %亚硝酸钠起相同操作，制得供试品待测液，于500 nm处测定供试品中总黄酮的含量，计算总黄酮平均提取率。结果见表2。

表2 正交试验结果

表3 方差分析结果

从上述结果分析可以看出，各因素的影响大小依次为：B＞D＞A＞C。由表3结果可见，B，D两因素对颗粒剂的综合评分差异极显著，A因素呈显著性差异，而C因素在考察范围内的影响很小。从省时降耗及生产实际出发，在保证提取充分的前提下，综合分析各个因素对总黄酮的提取率和浸膏得率的影响，拟定最佳工艺为：20倍乙醇用量，提取3次，乙醇浓度60%，每次提取2 h。

表4 最佳工艺条件验证结果

2.2.3 验证性试验 按照正交试验确定的最佳工艺条件下，进行验证试验，重复3次，结果见表4。测定浸膏平均得率为10.39%，总黄酮平均提取率为30.29%，均高于正交实验的其余各组数据，证明优选工艺数据可靠。

3 讨论

随着我国人口老年化和人均生活水平的提高，糖尿病的发病人群和高危人群群体越来越大，中医药在治疗糖尿病方面也越来越受重视。复方桑黄颗粒由4味药材组方：桑叶、葛根、黄精、百合均列入我国卫生部公布的药食同源名录。原方为汤剂，改制成颗粒剂后，既省去了汤剂临用时煎煮的麻烦，又克服了汤剂贮存、携带、服用不便的缺点，更适合现代人的用药需求。

桑叶与葛根是本复方制剂处方中的重要药物，其降血糖的主要成分均为黄酮类化合物，因此选择总黄酮作为其乙醇提取工艺阶段的主要考察评价指标。本试验根据各药材的理化性质并结合预实验结果，筛选符合工艺实际的多个指标进行试验，采用综合权重评分法结合正交设计优化制备工艺，因此较单指标分析的传统方法更全面、科学、实用。方差分析结果显示，影响提取极其显著的因素是乙醇用量、提取次数，较显著的因素为乙醇浓度，提取时间为不显著因素。经过直观分析和方差分析，结果一致，说明本研究方法合理，数据可靠，结果可信。

本研究重点讨论复方桑黄颗粒中总黄酮成分的提取工艺，对于本处方的制备工艺中，多糖类化合物的提取工艺条件的优化另行研究及报道。

[1]原爱红，马骏，蒋晓峰.桑叶中糖苷酶抑制活性组分的筛选[J].中国中药杂志，2006，2（3）：223-227.

[2]万利秀，肖更生，刘亮 .桑叶中黄酮的研究进展 [J].广东蚕业，2009，3（30）：44-48.

[3]李健.葛根总黄酮的研究进展[J].安徽医药，2008，12（12）：1117-1118.

[4]刘利，潘一乐.春秋桑叶总黄酮含量分析及提取工艺优化[J].食品科学，2009，30（4）：72-75.

[5]甘琳，周芳，张越非，等.葛根总黄酮提取工艺比较[J].时珍国医国药，2010，21（4）：929-931.

Studies on extraction of total flavonoids of compound Sanghuang granules

CHEN Yuwei ZHANG Hongyu SONG Qifen XU Maoyi HUANG Yueyan
Medical College of Jiaxing Universtity,Jiaxing 314001,China

Objective To optimize the extraction process for compound sanghuang granules.Methods Factors affecting the ethanol extraction process to flavonoids of compound sanghuang granules was studied,the best preparation technological conditions was screened by orthogonal design.Results The optimal extraction technique conditions were as follows:20 times of amount of 70% alcohol,extracted for 3 times,each time for 2 hours.High yield of extractum (30.29%) and high content of flavonids (10.39%) are obtained with the present technology.Conclusion The extracting method are stables and replicable,which can provide reference for preparation of compound sanghuang granules.

Mulberry;Flavonoids;Extraction technology;Orthogonal test

R284.2

A

2095-0616（2012）03-152-02

浙江省嘉兴市科技局资助项目（2010AY1066）；2010年度浙江省大学生科技创新活动计划资助项目（2010R417005）。

▲通讯作者

2011-12-23）