ANA谱检测对自身免疫性疾病诊断的临床意义

刘 萍

(云南省普洱市人民医院，云南普洱665000)

自身免疫性疾病是指机体自身对自身抗原发生免疫反应，从而导致自身组织损害所引起的疾病。病人血清中可检测出高滴度的自身抗体。ANA谱的检测在判断疾病的活动过程、观察治疗效果，以及指导临床用药等方面有重要的临床意义[1］。临床常见的自身免疫性疾病有系统性红斑狼疮(SLE)、干燥综合症(SS)、硬皮病(PSS)、多发性肌炎和皮肌炎(Pm/Dm)及混合型结缔组织病(MCTD)、类风湿关节炎(RA)、原发性胆汁肝硬化(PBC)等。

1 资料与方法

1.1 一般材料:选取2008年至2011年本院经临床确诊为自身免疫性疾病患者110例，为A组，有SLE 30例;SS 40例;PSS 12例;RA 15例;Pm/Dm 7例;MCTD 3例;PBC 3例。本院健康体检者110例为B组。

1.2 标本采集:取空腹血3mL，离心分离血清，－20℃冰箱保存。

1.3 检测方法与试剂:ANA谱检测采用免疫印迹法，试剂由德国欧蒙(杭州)医学实验诊断有限公司研制生产。待测血清用标本缓冲液1:101稀释，将稀释血清与检测膜条反应温育。如果样本阳性，特异性的IgG(也包括IgA和IgM)与相应抗原结合，为检测已结合的抗体，加入酶标抗人IgG(酶结合物)进行第二次温育。然后加入酶底物液，以产生可观察的颜色反应。待膜条用吸水纸小心吸取水分，风干后采用EUROLineScan评判结果，将待分析膜条放置在相应的工作纸上，进入EUROLineScan软件，Test的代码是Ana3(ANA谱3，14 个抗原)，LIDE 扫描[2］。

1.4 统计学处理:采用SPSS 13.0统计学软件进行数据分析，阳性率之间的比较采用χ2检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

ANA谱检测自身免疫性疾病，A组自身抗体阳性检出88例，阳性率为88/110，即80%。各类自身免疫性疾病单项或多项自身抗体阳性率分布见表1。因考虑到成本费用，B组先采用间接免疫荧光筛选(试剂用欧蒙)，110例健康体检者有7例阳性，再将这7例用欧蒙ANA谱试剂膜条分析。该组自身抗体阳性检出7例，阳性率为7/110，即6.2%。但这7例抗原带着色均较浅或无色，扫描分析结果均为阴性。

表1 各类自身免疫性疾病单项或多项自身抗体阳性分布

健康体检采用间接免疫荧光筛选(试剂用欧蒙)，110例健康者有7例阳性，考虑到成本费用，将这7例再用欧蒙ANA谱试剂膜条分析。抗原带着色较浅或无色，扫描分析均为阴性。分析表1可知，各种自身抗体在膜条上的阳性率以SS－A、Ro－52、SS－B为主，为39%(43/110);ds－DNA、核小体次之，为5.4%(6/110);再者是nRNP/Sm，为4%，Sm为1.8%。各种疾病如SLE出现nRNP/Sm、SS－A、Ro－52、SS－B、ds－DNA、核小体、HI、核糖体 P 蛋白、Sm 多种抗体，SS出现SS－A、SS－B抗体频率较高。PSS抗URNA、抗Sct－70为75%(10/12)，RA抗URNP为26%(4/15)，Pm/Dm、Jo－1为 50%(1/2)，MCTD 抗 URNP为 33%(1/3)，PBC、AMA－M2为66%(2/3)。

3 讨论

自身免疫性疾病是以多个脏器系统损伤为特点所引起的疾病。总体上可分为器官特异性和系统性自身免疫病两类。器官特异性自身免疫病指组织器官的病理损害和功能障碍，仅限于抗体或致敏淋巴细胞所针对的某一器官，如PBC。系统性自身免疫病指由于抗原抗体复合物广泛沉积于血管壁等原因导致全身多器官损害，习惯上又称为胶原或结缔组织病[3］，如SLE、SS等。自身免疫疾病一般病理较长，慢性疾病，发作与缓解反复交替出现，任何年龄、性别均可发病，女性大于男性，常累计多器官多系统。自身免疫性疾病主要是自身免疫抗体存在于患者体内。检测患者自身免疫抗体也成为诊断自身免疫疾病的重要依据。采用ANA谱检测可查到自身抗体14种(IgG)，不同的疾病可出现不同程度的阳性[4］。

3.1 系统性红斑狼疮SLE，病人血清中可出现多种自身抗体。抗Sm和抗ds－DNA一起出现可为特异性诊断指标(90%)。ds－DNA滴度的变化可以作为检测SLE病情变化的实验指标。

3.2 原发性干燥综合征SS，是一种累积外分泌腺体的慢性炎性反应疾病。SS－A、Ro－52、SS－B对原发性干燥综合症诊断具有较高敏感性，二者抗体几乎总是相伴出现，40例SS患者中单独出SS－A+Ro－52的有23例，单独出现SS－B的有16例。在诊断干燥综合症时，抗SS－B抗体比抗SSA抗体更特异，是干燥综合症血清中的特异抗体。同时在其他自身免疫性疾病中也有抗SS－A和SS－B抗体出现，如SLE、RA，但血清滴度水平远低于干燥综合症。

3.3 进行性系统硬化症PSS，在12例皮肤有弥漫型多发性系统性硬化症患者血清中有抗Scl－70抗体有10例。

3.4 多肌炎:抗Jo－1、PM－Scl对多发性肌炎具有较强特异性，2例患者中出现1例，阳性率为50%。

3.5 混合型结缔组织病MCDT，在MCDT病中抗U1－RNP抗体几乎均为阳性，且有较高滴度的血清水平。抗体滴度与疾病活动相关，在SLE也可检出U1－RNP抗体，但几乎均伴有Sm抗体。在没有其他抗体存在的情况下，一般认为抗U1－RNP抗体是MCDT的诊断指标。

3.6 原发性胆汁性肝硬化PBC，高滴度的AMA－M2抗体是PBC的诊断指标。在其他肝病(慢性肝脏疾病30%和进行性系统性硬化症7% ～20%)中可见出抗体AMA－M2抗体，但滴度较低。若在PSS中出现AMA－M2可能是重叠有原发性胆汁肝硬化疾病。

总之，自身免疫性疾病因其发病原因至今未明，临床表现变化多样，不易被早期诊断。自身抗体14项抗体的检测对多种自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断具有重要意义，但是存在一定的假阳性(就如本文中的110例健康者也有7例阳性)，还需要和其他检测方法(如FII、ELSE、斑点法)联合检查。临床医生在对实验结果做出正确判断之前，还要结合临床表现、病史等，不能孤立地看待每项结果。应将疾病全面衡量，以免本末倒置，给予正确的诊断疾病。

[1]刘军锋，贾克钢，刘远德.免疫印记法检测在自身免疫性疾病ENA多肽抗核抗体谱及临床意义[J］.国际检验医学杂志，2006，27(7):669 －670.

[2]欧蒙公司:ANA谱(IgG)检测试剂盒(欧蒙印迹法)产品说明书第5页.

[3]张德法，崔毓祥，陈子庆，等.8种自身抗体联合检测对自身免疫性疾病诊断的临床意义[J］.江苏医药，2010，36(10):1123.

[4]刘兰，陈娟.抗核抗体与5种自身免疫性疾病应用[J］.检验医学与临床，2010，7(20):2263 －2264.