紫外分光光度法测定黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的含量

蔡 君

(广州中医药大学第一附属医院，广州 510400)

黄芪是1味重要的中药，具有益卫固表、利水清肿、托毒生肌、补中益气等功效，民间常用于治疗自汗、盗汗、血痹、浮肿、痛疽不溃或溃久不敛、内伤带虚、脾虚泄泻及一切气衰血虚之症［1］。黄芪总皂苷为黄芪的主要活性成分之一。研究表明，黄芪总皂苷有良好的黏膜保护作用［2］。我们利用羟丙基甲基纤维素(HPMC)和丙稀酸树脂E100作为黏附材料和骨架材料，将黄芪总皂苷制成口腔黏附缓释片，为保证质量我们对制剂工艺进行考核，并建立了简便、快捷、准确的紫外分光光度法，以测定黄芪总皂苷口腔黏附缓释片中总皂苷的含量。

1 材料与仪器

1.1 材料与试剂

黄芪总皂苷购自南京泽朗医药科技有限公司，黄芪甲苷对照品由中国药品生物制品检定所提供(批号 110781—200613)，浓硫酸、香草醛、无水乙醇、甲醇均为分析纯。

1.2 仪器

TU-1810紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有限责任公司)，AE200型电子分析天平(瑞士梅特勒公司)，电热恒温水温箱(上海跃进医疗器械厂)。

2 方法与结果

2.1 标准品溶液的制备［3］

精密称取黄芪甲苷对照品5.1mg置于10mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀备用。

2.2 供试品溶液的制备

取黄芪总皂苷制成口腔黏附缓释片20片，置于干燥、洁净的研钵中充分研碎并研磨均匀，精密称取细粉100mg置于25mL量瓶中，准确加无水乙醇25mL称重，超声处理(53KHz，功率 100%)30min，取出放凉，用无水乙醇补足减失的重量滤过，收集续滤液备用。

2.3 测定波长的选择

图1、2显示，精密吸取对照品溶液和供试品溶液各0.3ml，分别加入具塞试管中，加无水乙醇补足体积至0.5ml再分别加入8%的香草醛无水乙醇试液0.5 ml和 72%的硫酸 5.0ml，摇匀，立即放入62℃恒温水浴中，保温20 min后置冷水浴中冷却至室温，以试剂作空白对照，用紫外分光光度计在400～700 nm范围扫描。结果对照品溶液在580 nm波长处有最大吸收，供试品溶液在580 nm波长处也有较大吸收，故确定测定波长为580 nm。

图1 黄芪甲苷对照品吸收图谱

图2 供试品溶液吸收图谱

2.4 标准曲线的制备［6］

分别精密吸取黄芪甲苷对照品溶液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 mL 至具塞试管中，加无水乙醇补足体积至0.5 ml，再分别加入8%的香草醛无水乙醇试液0.5 ml和72%的硫酸5.0 ml摇匀，立即放入62℃水浴加热20min取出，置冷水浴中冷却至室温，于580 nm波长处测吸光度。同时以随行试剂作空白，以吸光度为纵坐标，黄芪甲苷的浓度为横坐标，得标准回归方程为:Y=0.00159 X+0.06855(r2=0.9942)，表明黄芪甲苷浓度在51～510mg·L－1范围，线性关系良好。

2.5 稳定性试验

取同一批供试品溶液，按“2.2.4”项下方法操作，分别在 0min、30min、60min、90min、120min 测定吸光度。结果RSD为1.71%，供试品溶液在2h内吸光度基本无变化，稳定性良好。

2.6 重复性试验

取同一批样品6份，按“2.2.2和2.2.4”项下方法操作，分别测定吸光度并计算含量。结果6份样品的RSD为1.57%，重复性良好。

2.7 加样回收率试验

精密吸取供试品溶液共6份，分别加入黄芪甲苷对照品溶液0.10 mL，按“2.2.4”项下方法操作，结果平均回收率为99.00%，RSD为2.68%。

2.8 样品含量测定

表1显示，取3批不同批次的黄芪总皂苷口腔黏附缓释片，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，按“2.2.4”项下方法操作，分别测定吸光度并计算含量。

表1 样品中黄芪总苷含量测定结果(n=3)

3 讨论

黄芪总皂苷口腔黏附缓释片的药物为黄芪总皂苷，通过测定其皂苷成分即可有效地控制该制剂的质量。实验结果表明，采用香草醛-硫酸作为显色试剂，显色灵敏度较高，方法重现性好，快速简便，是较理想的总皂苷定量方法。

在香草醛-硫酸比色加热显色反应过程中，应严格控制水浴温度、加热时间，显色后立刻冷却至室温;香草醛溶液必须在临用前新鲜配制，否则会影响显色灵敏度。

［1］中药大辞典下册［M］.上海:上海科学技术出版社，1986:2038.

［2］孙雪莲，黄可儿，匡忠生，等.黄芪皂苷类不同有效组分对大鼠急性胃黏膜损伤的保护作用研究［J］.中华中医药杂志，2011，26(5):1181-1185.

［3］骆苏芳，许重远，陈英.比色法测定参芪含片中总皂苷的含量［J］.中国医院用药评价与分析，2010，10(5):448-449.

［4］严安定，高建，王培培，等.紫外分光光度法测定当归补血汤的总苷含量［J］.安徽医学，2011，32(5):636-638.