HPLC测定胃舒止痛片中原阿片碱的含量

李俊芳，黄飞龙，郑艳春，崔雅慧，董海荣，李冰

（1.承德颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000；2.河北省中药新辅料工程技术研究中心，河北 承德 067000）

HPLC测定胃舒止痛片中原阿片碱的含量

李俊芳1，2*，黄飞龙1，2，郑艳春1，2，崔雅慧1，2，董海荣1，2，李冰1

（1.承德颈复康药业集团有限公司，河北 承德 067000；2.河北省中药新辅料工程技术研究中心，河北 承德 067000）

目的：建立胃舒止痛片中原阿片碱的含量测定方法。方法：采用高效液相色谱法测定胃舒止痛片中原阿片碱的含量。色谱法分析条件为Kromasil-C18柱（4.6mm×150mm，5μm），流动相：甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1），流速：1.0 mL·min-1，检测波长：290 nm。结果：原阿片碱在0.025 6～0.153 6μg与峰面积呈良好的线性关系，r＝0.999 9，平均回收率为98.17%，RSD＝1.64%。结论：该方法操作简便，结果可靠，为胃舒止痛片的质量研究提供有效的方法。

高效液相色谱法；胃舒止痛片；原阿片碱；含量测定

胃舒止痛片是由白屈菜流浸膏、枯矾、牡蛎（煅）组成的复方制剂，具有制酸、止痛、收敛的功效。临床广泛应用于胃及十二指肠溃疡引起的胃脘疼痛、吐酸。现行标准中仅采用滴定法对其枯矾中KAl（SO4）2进行了含量测定。为全面提高产品质量标准，保证临床用药安全、有效，笔者采用HPLC对白屈菜流浸膏中的主要成分原阿片碱进行了含量测定［1-7］。

1 仪器与试药

1.1 仪器

SPD-10ATP型高效液相色谱仪（日本岛津公司），UV-2401紫外-可见分光光度仪（日本岛津公司），AL104型电子分析天平（梅特勒-托利多仪器上海有限公司），HH-S型水浴锅（巩义市英峪予华仪器厂），SK3200H超声清洗器（上海科导仪器有限公司）。

1.2 试药

原阿片碱对照品（中国食品药品检定研究院，批号：110853-200402）；甲醇为色谱纯，其他所用试剂均为分析纯；胃舒止痛片（承德颈复康药业集团有限公司，批号：090821，090835，090836）。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱：Kromasil-C18柱（4.6 mm×150 mm，5μm）；流动相：甲醇 -水 -三乙胺（68∶32∶0.1）；流速：1.0 mL·min-1，检测波长：290 nm；进样量：10μL。在上述色谱条件下原阿片碱峰的保留时间约为10.5 min，理论塔板数按原阿片碱峰计算不低于2 000。

2.2 对照品溶液的制备

取原阿片碱对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含原阿片碱10μg的溶液，即得。

2.3 供试品溶液的制备

取本品20片，精密称定，研细，混匀，取约2.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶内，精密加入浓氨2 mL，使润湿，再精密加入甲苯50 mL，密塞，称定重量，振摇2 min，放置过夜，超声处理（功率250W，频率30 kHz）30 min，放冷，称定重量，用甲苯补足减失的重量，摇匀，过滤，精密量取续滤液25 mL，低温蒸干，残渣用甲醇转移至5 mL量瓶中并稀释至刻度，滤过，取续滤液，即得。

2.4 线性关系考察

精密称取原阿片碱对照品2.56 mg，置100 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀作为对照品储备液（浓度为0.025 6 mg·mL-1）；精密吸取此液1，2，3，4，5，6 mL置10 mL容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇匀，制成6种不同浓度的对照品溶液，按2.1项下色谱条件进行测定。以峰面积（Y）为纵坐标，原阿片碱进样量（μg）为横坐标，绘制标准曲线，得回归方程为Y＝1 470 052.46X-4 508.87，r＝0.999 9（n＝6）。结果表明原阿片碱在0.025 6～0.153 6μg线性关系良好。

2.5 空白试验

去除白屈菜药材，按照胃舒止痛片制剂工艺处方比例制成空白样品，照2.3方法制备，按2.1色谱条件测定，结果在原阿片碱色谱峰的位置上没有峰，因此说明阴性样品无干扰。HPLC图见图1。

图1 胃舒止痛片及其对照品HPLC图

2.6 精密度试验

取上述对照品溶液，连续进样6次，进样量均为10μL。根据对照品峰面积考察精密度，计算RSD＝0.85%，说明仪器精密度良好，方法可行。

2.7 稳定性试验

取同一份供试品溶液分别在0，1，2，4，6，8，12，24 h进样10μL。根据原阿片碱峰面积考察样品的稳定性，计算RSD＝0.93%，说明样品在室温下稳定。

2.8 重复性试验

称取胃舒止痛片样品粉末（批号：090411）6份，每份2.5 g，精密称定，照2.3项制备供试品溶液，照2.1色谱条件进行测定，测得原阿片碱平均含量为22.98μg·g-1，RSD＝1.46%，表明本方法重复性良好。

2.9 回收率试验

取重复性试验项下的胃舒止痛片样品粉末6份，每份约1.25 g，精密称定，分别精密加入0.028 8 mg·mL-1的原阿片碱对照品溶液1 mL，挥干溶剂，照2.3项下方法制备供试品溶液，进样10μL，测定，计算回收率，结果平均加样回收率为98.17%，RSD＝1.64%，见表1。

表1 胃舒止痛片中原阿片碱回收率试验

2.10 样品含量测定

取胃舒止痛片3批，每批取样3份，按上述方法测定其中原阿片碱的含量，并计算平均值，见表2。

表2 胃舒止痛片中原阿片碱的测定含量（n＝3）

3 讨论

3.1 检测波长的选择

由于不同的文献报道对原阿片碱测定所采用的波长不一样，为确定实验中最终的检测波长，本文通过利用原阿片碱对照品溶液采用UV-2401紫外-可见分光光度仪在波长200～350 nm范围内扫描，扫描图谱显示，原阿片碱在290 nm和241 nm波长处有最大吸收，考虑290 nm波长处干扰较小，故选择290 nm为本品的检测波长。

3.2 流动相的选择

本实验曾考察了含0.4%磷酸的甲醇-水（65∶35），使用三乙胺调节pH值为5；含0.1%三乙胺的甲醇 -水（65∶35），用盐酸调 pH值为5；含0.1%三乙胺的甲醇-水（60∶40）；甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1）等不同的流动相进行试验，经比较以甲醇-水-三乙胺（68∶32∶0.1）为流动相，所得到的色谱图效果最佳，前后无干扰，分离较为完全。

3.3 样品处理方法的确定

因白屈菜中所含主要成分为生物碱类，其中原阿片碱在甲醇、三氯甲烷、乙醇、甲苯等溶剂中溶解度较高。胃舒止痛片中白屈菜流浸膏使用酸水提取方法提取，本品中脂溶性杂质较少。因此本实验用浓氨水调碱性后依次选用不同体积分数的三氯甲烷、甲苯、甲醇和乙醇作溶媒对样品进行提取方法的摸索。经过优选最终选用以浓氨水调碱性，甲苯作为提取溶剂，处理样品最佳。通过对加热回流、超声提取进行比较，发现用超声提取效率较高，并且对提取时间也进行了考察，结果表明浸泡过夜，超声30 min提取率最高。由于甲苯作为供试品溶剂直接注入色谱系统，色谱图溶剂出峰较多，干扰测定，故选用甲醇作为供试品溶剂。取一定量甲苯提取液蒸干，残渣用甲醇溶解作为供试品溶液。

综上所述，本研究建立了HPLC测定胃舒止痛片中原阿片碱含量的方法，该法操作简单、结果准确、重复性好，可用于胃舒止痛片的质量控制。

［1］苏玉严，周海妹，展学孔，等.HPLC法测定夏天无薄膜衣片中原阿片碱的含量［J］.中国药房，2010，21（36）：3445-3447.

［2］蒋遐芝，叶锦霞，曾建伟，等.HPLC测定小花黄堇中原阿片碱的含量［J］.中国中药杂志，2010，35（17）：2315-2317.

［3］吴爱军，汝秋明.HPLC法测定胃痛平糖浆中原阿片碱［J］.中国实用医药，2010，5（35）：145.

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［5］谢彩娟，张志琪，张富强，等.RP-HPLC法同时测定延胡索药材中延胡索乙素和原阿片碱［J］.陕西师范大学学报（自然科学版），2005，33（1）：82-85.

［6］李向阳，屠万倩.HPLC法测定夏天无胶囊中原阿片碱的含量［J］.中药新药与临床药理，2005，16（4）：272-273.

［7］周利贤.HPLC法测定夏天无注射液中原阿片碱的含量［J］.中国药师，2010，13（10）：1454.

Determ ination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets by HPLC

LI Jun-fang1，2，HUANG Fei-long1，2，ZHENG Yan-chun1，2，CUIYa-hui1，2，Dai Hai-rong1，2，Li Bing1
（1.Chengde Jingfukang Pharmaceutical Group Co.Ltd，Chengde067000，China；2.New Excipients of Traditional Chinese Medicine Engineering Research Center of Hebei Province，Chengde067000，China）

Objective：To establish a method on determination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets.Methods：HPLC is the determination of Protopine in Weishu Zhitong Tablets.Column was Kromasil-C18（4.6 mm×150 mm，5μm）.Mobile phase was methanol-water-triethylamine（68∶32∶0.1）at flow rate of 1.0 mL·min-1.Detection wavelength was 290 nm.Results：Protopine showed linear regression at 0.025 6～0.153 6μg（r＝0.999 9）.The average recovery was98.17%（RSD ＝1.64%）.Conclusion：Thismethod has good repeatability and flexibility.It can be used for quality control ofWeishu Zhitong Tablets.

HPLC；Weishu Zhitong Tablets；Protopine；Content；Determination

2012-06-25）

*［通讯作者］李俊芳，Tel：（0314）2292050，E-mail：ljf19791221＠163.com