几种石斛粗提物抗氧化活性的对比研究

李婵娟

（保山中医药高等专科学校，云南 保山 675000）

研究表明，氧化应激是许多疾病和损伤的病理基础，也是加速机体衰老的重要原因[1]。特别在心脑血管疾病中，氧化损伤是心脑血管疾病发展的一个重要阶段。石斛因其具有抗氧化、清除自由基等功效，长期以来一直用于心、脑血管疾病的防治以及抗衰老、抗肿瘤、治疗白内障等。本实验通过探讨溴代苯致肝脏脂质过氧化小鼠的肝脏MDA含量改变，旨在对比研究几种石斛粗提物的抗氧化作用及其机制，从而为开发利用这一类天然药物提供参考。

1 实验材料

1.1 样品

1.1.1 受试物 鼓槌石斛SHch（Dendrobiumchrysotoxum），棕色浸膏，提取率为3.15%；金钗石斛SHn（D.nobile），棕色浸膏，提取率为5.42%；翅梗石斛SHtr（D.trigonopus），棕色浸膏，提取率为4.34%；长距石斛SHl（D.longicornum），棕色浸膏，提取率为4.16%；报春石斛SHp（D.primulinum），棕色浸膏，提取率为13.81%；球花石斛SHth（D.thysiflorum），棕色浸膏，提取率为11.80%；玫瑰石斛SHcr（D.crepidatum），棕色浸膏，提取率为121.11%；叠鞘石斛SHd（D.denneanum），棕色浸膏，提取率为13.24%；黑毛石斛SHw（D.williamsonii），棕色浸膏，提取率为11.39%；流苏石斛SHf（D.fimbriatum），棕色浸膏，提取率为14.27%；由中科院昆明植物研究所提供。所有样品均为60%乙醇提取物，易吸湿，常温密闭保存。

1.1.2 对照药品 维生素C片（国药准字 H53021188）100 mg／片，昆明制药集团股份有限公司出品，批号090908。

1.1.3 配制方法 各种石斛粗提物按提取率折算成6.0 g／kg的生药剂量为实验的给药剂量，临用前称取适量样品于乳钵中，用1%CMC－Na研磨后配制成相当于生药0.30 g／m L浓度的混悬液供小鼠灌胃用；阳性对照维生素C片的配制方法同石斛粗提物。为保证受试物的稳定性，所有样品均为临用前新鲜配制。

1.2 动物 SPF级昆明种小鼠，全雄，体重18～24 g；购自于昆明医学院实验动物中心。合格证号：SCXK（滇）2005－0008

1.3 主要仪器 AL104电子分析天平（称量试剂、药品、脏器），梅特勒－托利多仪器（上海）有限公司；JJ2000型电子天平（称量动物体重），常熟双杰测试仪器厂；F5810－R型台式高速冷冻离心机，德国Eppendorf；Thermo1500型酶标仪，芬兰雷勃；Millipore超纯水处理系统，美国 Millipore公司；BCD－225E冰箱，青岛海尔冰箱厂；HS－1恒温水浴箱，江苏金坛。

1.4 主要试剂 氯化钠注射液，国药准字 H53020469，500 mL／瓶，昆明南疆制药有限公司，批号A091011e1；溴代苯，分析纯，中国青浦合成试剂厂出品，批号20000405；橄揽油，化学纯，中国医药集团上海化学试剂公司出品，批号20090801；丙二醛测定试剂盒（MDA，硫代巴比妥酸法），南京建城生物工程研究所出品，批号20091107。

1.5 统计学处理 实验结果以均值±标准差（±s）表示，用DAS ver1.0统计软件进行数据处理。方差齐用t检验，方差不齐用t’检验；偏态分布资料用秩和检验；计数资料用χ2检验。

2 方法与结果

选18～22 g雄性昆明种小鼠130只，按体重随机分为13组：空白对照组；模型对照组；阳性对照维生素C片200 mg／kg组；10种石斛样品粗提物6.0 g／kg组；每组10只。各组动物每日分别按剂量灌胃给药1次，连续灌胃3d，空白对照组灌服等容量1%CMC－Na 20 mL／kg.bw。末次给药后30 min，除空白对照组外，其余各组均以10 m L／kg.bw的剂量灌胃给予0.3 mol／L的溴代苯橄榄油溶液，间隔4h再加强给药1次。造模20 h后脱臼处死小鼠，摘取肝脏用PH7.4的Tris－HCl缓冲溶液清洗后，称取200 mg同部位肝组织，加生理盐水制成10%肝匀浆，以3000转／min离心10 min，取上清液按试剂盒方法测定 MDA（肝脏丙二醛）含量[2]。结果见表1。

表1 石斛样品粗提物对小鼠体内抗氧化作用的影响

由表1可知，模型组小鼠肝组织中MDA含量明显高于空白对照组，表明溴代苯诱发小鼠肝脏脂质过氧化模型成功；阳性对照维生素C片、鼓槌石斛、金钗石斛及报春石斛组，对溴代苯诱发的小鼠肝损伤有不同程度的保护作用，可使肝组织中的MDA含量明显下降，表明抗氧化作用显著；除玫瑰石斛外，其余各组仅有一定作用趋势。

3 讨论

脂质过氧化是一典型的自由基链式反应，是自由基攻击细胞膜上的多聚不饱和脂肪酸而引发的一系列链式反应，产生大量脂肪质过氧化物及许多中间产物，如丙二醛等，可导致人体细胞氧化损害、老化、致癌和动脉硬化等许多疾病。通过食用具有抗氧化能力的食物或药物，可防止多种疾病发生。食物的抗氧化能力可通过体外和体内抗氧化实验进行评价[3]。

生物体系（如肝细胞等）脂质过氧化反应的最终产物有丙二醛，测定丙二醛的含量，在一定程度上可以反映脂质过氧化损伤的程度，是目前公认的反映脂质过氧化的指标[4]。溴代苯是一种有毒的氧化剂，在体内对肝脏有很强的亲和力，能造成动物细胞脂质过氧化性损伤[5]。本文采用溴代苯致小鼠实验性肝损伤模型，测定肝组织匀浆MDA含量。本实验中给予小鼠溴代苯油20h后，小鼠肝脏代偿性增大、坏死，溴代苯可使模型组小鼠肝匀浆MDA含量明显增加，表明溴代苯引起肝损伤的机制与脂质过氧化有关。本结果显示，鼓槌石斛、金钗石斛及报春石斛组能显著降低肝匀浆丙二醛含量，说明以上这三种石斛具有抗脂质过氧化能力。翅梗石斛、长距石斛、球花石斛、叠鞘石斛、黑毛石斛、流苏石斛仅有一定作用趋势，与损伤模型组差异无统计学意义。本次实验因样品量仅够用药3 d，而以往实验的连续用药时间多在7 d以上，是否存在给药时间太短而影响结果的判断？有待于进一步的研究。

[1]Szweda PA，Friguet B，Szweda L I.Proteolysis free radicals and aging[J].Free Radic Biol Med，2002，33（1）：29.

[2]张均田.现代药理实验方法学[M].北京：中国协和医科大学联合出版社，1998：1232.

[3]宋怀恩，闻韧.抗氧化筛选方法的研究进展[J].中国药物化学杂志，2003，13（2）：119～123.

[4]刘方，武子斌，牛淑敏，等.中药材抗氧化及自由基清除活性的研究[J].中国药学杂志，2001，36（7）：442～445.

[5]吴植强，周智，韦奇质.水罗伞提取物对溴代苯小鼠肝损伤的保护作用和抗氧化作用[J].中国药理学通报，2004，20（11）：1221～1223.