高致病性蓝耳病弱毒疫苗及灭活疫苗免疫效果的比较

梁 莹 ，杨 莉

（1.四川省绵阳农业学校，四川绵阳 621000；2.四川省绵阳市梓潼县动物疫病预防与控制中心，四川绵阳 622150）

猪繁殖与呼吸综合征（PRRS，俗称猪蓝耳病），是由猪繁殖与呼吸综合征病毒（PRRSV）引起的危害养猪业的一种重要传染性疾病。该病主要造成仔猪呼吸道疾病等生长发育障碍和妊娠母猪流产、死胎，公猪精液品质下降、携带PRRSV病毒等繁殖障碍[1]。1996年，郭宝清等人首次从国内暴发 PRRS 猪群流产胎儿中分离到 PRRSV，证明PRRSV在中国猪群内确实存在。2006年，我国南方地区暴发了一场以“三高一低”（高热、高发病率、高死亡率、低治疗率）为特征、传播迅速的高致病性蓝耳病（HP-PRRS），波及国内25个省份，给我国养猪业造成了巨大的经济损失[2]。PRRSV毒株分为美洲型和欧洲型，引发该病的高致病性PRRSV是由美洲株变异引起，分子水平的差异主要表现在NSP2基因缺失30个氨基酸[3]，该病毒具有抗原变异性、嗜巨噬细胞性、持续感染性以及抗体依赖性增强作用（ADE）等生物学特性，临床上常与其他病原混合感染[4]。

目前，该病的发病机制和免疫机理尚不十分清楚，因此在实践生产中难以取得令人满意的防控效果，而疫苗免疫仍是该病最主要的防控途径[5]。在疫苗的研发方面，先后有灭活和弱毒（活疫苗）等常规疫苗投入生产，与此同时，亚单位疫苗、活载体疫苗和 DNA 疫苗等新型疫苗也在积极的研究中。为比较灭活、弱毒两种常规猪蓝耳病疫苗的免疫效果，于2011年9—10月梓潼县秋季防疫工作期间，对该县32个乡镇使用不同种类猪蓝耳病疫苗进行免疫并跟踪调查，免疫28天后采集猪血清样品进行免疫抗体检测，通过灭活及弱毒疫苗免疫效果的分析对比，为猪蓝耳病疫苗的选用和防控技术的建立提供参考。

1 材料方法

1.1 试验分组

本试验将注射不同PRRS疫苗及未注射疫苗的猪分为3组：（1）灭活组，对18个乡镇的养猪规模场注射PRRS灭活疫苗（厂家：中牧成都，批号：1107022）；（2）弱毒组，对剩下14个乡镇的养猪规模场注射PRRS活疫苗（厂家：中牧成都，批号：1107037-1）；（3）对照组，在所有32个乡镇的养猪规模场中保留少部分未注射PRRS疫苗的猪。集中免疫时间：2011年9月15日至10月15日；免疫对象：70~100日龄猪。

1.2 样品采集

2011年11月10日至15日对本县各乡镇规模场中的已免疫和未免疫猪分别进行前腔静脉采血，将全血于冰箱内冷藏2 h，3 000 r/min离心7 min分离制备血清，-20 ℃保存备用。

1.3 样品检测

使用猪繁殖与呼吸综合征病毒ELISA抗体检测试剂盒（厂家：武汉科前动物生物制品有限责任公司，批号：111011），对猪血清进行抗体检测，操作步骤参照试剂盒说明书。

1.4 结果判定

将反应完毕后的血清反应板放入酶标仪（318MC型，上海三科仪器有限公司），读取各孔630 nm吸光度OD（OD630nm）值。试验成立条件是阳性血清对照孔平均OD630nm值≥0.7，阴性对照孔平均OD630 nm值＜0.3。样品OD630 nm值≥0.3，判为阳性；样品OD630 nm值＜0.3，判为阴性。

1.5 数据分析

记录3组血清抗体OD值并计算阳性率，利用SPSS 17.0软件中的Duncan's test对各组样本进行差异显著性分析，P < 0.05表示差异显著。

2 结果

表 1 不同PRRS疫苗免疫28天后的抗体检测结果

表1显示，两种PRRS疫苗免疫及未免疫猪，均可检测到PRRSV抗体，但阳性率各有不同：弱毒疫苗免疫后的抗体阳性率较高（94.55%），灭活组的阳性率居中（49.30%），对照组最低（19.09%）。未免疫猪血清及PRRS灭活疫苗、弱毒疫苗免疫后猪血清中的PRRSV抗体OD值分别为0.2232，0.3758，1.108；其标准误也随之增大（0.00875，0.01926，0.03483）。经方差分析：灭活组免疫抗体OD值显著高于对照组（P < 0.05），弱毒组的OD值显著高于灭活组和对照组（P < 0.05）。

3 讨论

3.1 PRRS灭活疫苗与弱毒疫苗的优缺点

PRRS灭活疫苗主要用于经产母猪和后备母猪，预防因PRRS感染造成的繁殖障碍。它的优点是安全性好，不存在病毒扩散和毒力返强等危险[6]；缺点是在灭活过程中主要的抗原决定簇易丢失，因而免疫次数多、免疫剂量和副作用大、免疫产生期长、免疫持续期短、不能快速激发细胞毒性 T 细胞反应（CTL），因而不适合仔猪的PRRS免疫，通过灭活疫苗免疫猪群难以达到根除PRRSV的目的。

PRRS弱毒疫苗可以用于各年龄段猪，主要用于仔猪的免疫。它的优点是注射剂量少、副反应小、免疫产生期长、免疫持续期短、免疫效果优于PRRS灭活疫苗。弱毒疫苗注入体内的效果与感染野毒没有多大差别，会像野毒一样穿过胎盘侵害胎儿。如果疫苗的基因序列与某一群体存在的PRRSV基因序列相似性达到70%~80%时，会产生较好的免疫效果；如果基因序列相似性低且减毒不彻底，则可能引发新的蓝耳病临床感染。因此，PRRS弱毒疫苗存在着病毒扩散和毒力返强等安全性问题，限制了PRRS弱毒疫苗的临床使用[6]。

3.2 PRRS灭活疫苗与弱毒疫苗对抗体水平的影响

朱良强等（2009）报道，仔猪蓝耳病弱毒疫苗免疫效果优于灭活疫苗免疫[7]。本试验的结果表明，PRRS弱毒疫苗免疫后产生的抗体阳性率（94.55%）及OD值（1.108）均高于灭活疫苗（49.30%，0.375 8）（P< 0.05），这与前人的研究结果相似[8-9]；弱毒组OD值的标准误（0.034 83）高于灭活组（0.019 26），表明弱毒组抗体水平的一致性较灭活组差。

影响PRRS免疫效果的因素很多。首先，PRRSV包括多种毒株亚型且毒株间的交叉保护免疫反应小[10]，只有当疫苗的基因序列与群体中PRRSV相似性较高时，才能产生较好的免疫保护作用。另外，PRRSV特异性抗体水平的高低不能作为体液免疫水平的唯一评价指标，还存在细胞因子等诸多因素的影响。综上所述，弱毒组的抗体水平虽然显著高于灭活组，但其整齐度低于灭活疫苗，因此，不能判定弱毒疫苗在控制PRRS疫情方面优于灭活疫苗。

对于猪蓝耳病的防控，关键在于提高猪群PRRSV抗体的水平与整齐度[8]。PRRS疫苗的选择应视猪场不同的情况而定：种猪和阴性场应该选用安全性高的灭活疫苗，而仔猪和阳性场则选用免疫效果好的弱毒疫苗。

[1] 殷震，刘景华.动物病毒学[M].2版.北京：科学出版社，1997：619-625.

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