AEG-1与ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及意义

刘凯军，王文韬，魏 娉

（1.峰峰集团邯郸医院普通外科，河北邯郸 056002；2.河北省邯郸市第一医院普通外科，河北邯郸 056002；3.河北省邯郸市第一医院病理科，河北邯郸 056002）

AEG-1与ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达及意义

刘凯军1，王文韬2，魏 娉3

（1.峰峰集团邯郸医院普通外科，河北邯郸 056002；2.河北省邯郸市第一医院普通外科，河北邯郸 056002；3.河北省邯郸市第一医院病理科，河北邯郸 056002）

目的探讨星形细胞上调基因 -1（astrocyte e1evated gene-1，AEG-1）、细胞间黏附因子 -1（interce11u1ar adhesion mo1ecu1e-1，ICAM-1）和基质金属蛋白酶（MMPs）在胃癌组织中的表达及意义。方法对胃癌和癌旁组织标本45例进行免疫组织化学染色，检测AEG-1与ICAM-1、MMP-2、MMP-9在2种组织中的表达。结果胃癌组织中AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9阳性表达率分别为77.8%、62.2%、73.3%、71.1%，癌旁组织中分别为26.7%、77.8%、35.6%、37.8%，AEG-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中阳性表达均比癌旁组织高（P＜0.01）；而ICAM-1在胃癌组织中阳性表达率表达低于癌旁组织（P＜0.05）。相关分析显示，AEG-1与MMP-2、MMP-9表达呈正相关（r=0.379 2、0.485 3，P＜0.05）；ICAM-1与MMP-2表达呈负相关（r=

胃肿瘤；星形细胞上调基因；细胞间粘附因子

星形细胞上调基因 -1（astrocyte e1evated gene-1，AEG-1）由于与多种肿瘤的发生进展有关而成为目前研究的热点。已有研究［1-3］证实，AEG-1在乳腺癌、神经胶质瘤、肝细胞癌、食管癌等多种恶性肿瘤组织中高表达，对肿瘤细胞的多种功能如侵袭、黏附、增殖、凋亡、转移等都具有调节作用，已成为恶性肿瘤生物治疗的潜在靶点。但迄今关于AEG-1的作用机制还没有完全阐明，有关AEG-1在胃癌组织中表达情况及与其他侵袭黏附相关因子关系的研究也较为罕见，推测胃癌细胞中AEG-1可能与其他侵袭黏附相关因子通过协同作用而导致肿瘤进展。因此，本研究检测了AEG-1在胃癌及癌旁组织中的表达，同时检测了反映胃癌细胞侵袭黏附能力的蛋白质细胞间黏附因子-1（interce11u1ar adhesion mo1ecu1e-1，ICAM-1）、基质金属蛋白酶（matrix meta11oproteinase，MMP）-2、MMP-9在胃癌及癌旁组织中的表达，对它们之间的关系进行了分析，并对AEG-1在胃癌组织中的作用和临床意义进行了初步探讨。

1 资料与方法

1.1 标本来源：标本取自2008年10月—2011年5月在我院手术并经病理证实的45例胃癌患者肿瘤组织石蜡标本，其中男性28例，女性17例，年龄31～72岁，平均（64.6±6.3）岁。术前均未接受包括放化疗在内的任何治疗。术中取肿瘤组织1.0cm ×0.5cm×0.5cm，标本以4%中性甲醛溶液固定，常规石蜡包埋，切片行HE染色和AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9免疫组织化学染色（SP法）。

1.2 免疫组织化学染色测定AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表达：兔抗人AEG-1多克隆抗体购自英国Abcam公司，兔抗人ICAM-1、MMP-2、MMP-9多克隆抗体及免疫组织化学试剂盒均购自美国Santa Cruz公司，采用SP法分别对肿瘤组织和癌旁组织（距肿瘤边缘≥3cm）进行各指标的免疫组织化学染色，染色步骤严格按试剂盒说明书进行操作。用PBS代替一抗作阴性对照，已知阳性切片作阳性对照。

1.3 免疫组织化学结果判定：由2位病理学医师分别阅片，双盲法进行结果判断。每张石蜡切片随机取5个高倍视野（ ×400），每视野计数100个细胞，AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9以细胞质呈棕黄色着染为染色阳性，按肿瘤细胞着色强度和阳性细胞率分别进行记分。按着色强度记分，无着色（0分），淡黄色（1分），黄色（2分），棕黄色（3分）。按肿瘤细胞阳性细胞率记分，阳性细胞≤5%为0分，6% ～25%为1分，26% ～50%为2分，51%～75%为3分，≥76%为4分。2种记分标准相乘，0～1分记为阴性（ -），2～3分记为弱阳性（+），4～7分阳性（++），≥8分强阳性（+++）。1.4 统计学方法：应用SPSS13.0统计分析软件进行分析。结果以等级资料表示，AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9在胃癌和癌旁组织中的比较采用秩和检验，各蛋白质之间的相关采用Spearman相关分析。P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 胃癌和癌旁组织中 AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表达：45例胃癌组织中AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9阳性表达率分别为77.8%、62.2%、73.3%、71.1%；癌旁组织分别为26.7%、77.8%、35.6%、37.8%。AEG-1、MMP-2、MMP-9在胃癌组织中的表达均较癌旁组织增强（P＜0.01）；而ICAM-1在胃癌组织中阳性表达率低于癌旁组织（P＜0.05）。见表1。胃癌组织AEG-1、ICAM-1、MMP2、MMP-2阳性表达，见图1。

表1 胃癌和癌旁组织AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达比较（n=45，例数，%）

图1 胃癌组织AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9的表达（SP×200）

2.2 胃癌和癌旁组织中 AEG-1、ICAM-1、MMP-2、MMP-9蛋白表达的关系：胃癌组织中4种因子之间表达关系经Spearman等级相关分析显示AEG-1与MMP-2、MMP-9表达强度呈正相关性（rs=0.379，0.485，P＜0.05），ICAM-1与MMP-2表达呈负相关（rs=-0.297，P＜0.05）；AEG-1与ICAM-1、ICAM-1与MMP-9之间表达无相关性（rs=0.214、0.186，P＞0.05）。

3 讨 论

胃癌是我国发病率最高的恶性肿瘤，该病由于没有特异性临床表现，很难早期发现，患者就诊时多已处于进展期。我国的进展期胃癌占总患者数的90%以上。进展期胃癌的侵袭转移能力强、预后差，而以手术、化疗为主的综合治疗措施目前效果并不理想。因此，靶向治疗将是今后胃癌治疗的方向。寻找新的胃癌靶分子已成为胃癌研究的热点。AEG-1是近年来发现的与恶性肿瘤关系密切的一个新型肿瘤相关基因，该基因具有原癌基因的特性，在肿瘤细胞中作用广泛，AEG-1在多种肿瘤性疾病中均存在过表达，是反映肿瘤恶性程度的重要指标［1-3］。Song等［4］研究发现AEG-1阳性的子宫内膜癌预后较差，可作为预后因子对子宫内膜癌预后进行预测分析。本研究结果显示，AEG-1在胃癌组织中的表达明显高于癌旁组织，也说明AEG-1与胃癌关系密切，进一步研究其在胃癌中的功能和作用有可能对胃癌的综合诊治和评估有重要作用。

AEG-1可以通过多种途径促进肿瘤的发生进展。研究［5］显示，AEG-1的启动子缺少TATA盒，但含有多个Sp1位点并富含GC序列，可发挥多种功能。AEG-1可影响磷脂酰肌醇3-激酶/蛋白激酶B、Wnt/β连环蛋白、核因子-κB、丝裂原激活蛋白激酶等多条信号转导通路的功能状态，从而对肿瘤细胞的侵袭、黏附、增殖、凋亡产生影响。Emadad等［6］的研究表明，AEG-1可以通过调节PI3K/Akt通路的功能而使细胞侵袭性增强，从而发生癌变。ICAM-1在胃癌中表达降低，为一种糖蛋白，肿瘤细胞表面ICAM-1表达增高可以促进炎性因子对肿瘤细胞的杀伤，在肿瘤免疫中发挥重要作用［7］，本研究结果也证实ICAM-1在胃癌中表达低于癌旁组织。但也有研究［8］认为，肿瘤组织ICAM-1表达增高可以促进肿瘤的侵袭转移。MMPs可以降解细胞外基质中的蛋白成分，破坏防止肿瘤细胞侵袭的屏障，从而造成肿瘤细胞的浸润转移［9］。MMP-2、MMP-9为MMPs家族中的重要成员。有研究［10］发现，AEG-1可以通过增强MMP-9的表达而促进胶质瘤的侵袭进展。本研究显示，AEG-1与MMP-2、MMP-9表达呈正相关，说明AEG-1可能通过调控MMP-2、MMP-9表达而发挥促进胃癌细胞侵袭、黏附的作用。但本研究并未发现AEG-1与ICAM-1之间有明显关系，我们推测这可能是由于影响实体肿瘤的黏附、侵袭因素十分复杂，AEG-1只能调控部分胃癌侵袭相关因子，且AEG-1、ICAM-1所起的调控作用位于侵袭黏附过程的不同水平，所以相关性并不明显。

本研究初步证实了AEG-1过表达存在于胃癌组织，AEG-1可能通过影响部分MMPs的活性表达而促进胃癌细胞侵袭、黏附。但我们也发现AEG-1仅与部分侵袭相关蛋白有关，说明肿瘤影响肿瘤细胞侵袭功能的网络化调节极其复杂，进一步明确胃癌中AEG-1与其他侵袭黏附相关因子的关系并研究其作用机制，对开展针对AEG-1的胃癌靶向治疗具有重要意义。

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（本文编辑：刘斯静）

R735.2

B

1007-3205（2011）04-0441-03

2011-10-18；

2011-12-05

刘凯军（1973-），男，河北邯郸人，峰峰集团邯郸医院主治医师，医学学士，从事消化道肿瘤的基础与临床研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.04.026

-0.297 6，P＜0.05）。结论AEG-1在胃癌组织中过表达，其可能通过调节MMP-2、MMP-9表达而增强胃癌细胞的侵袭黏附能力，促进胃癌的侵袭进展。