膜细胞骨架连接蛋白及基质金属蛋白酶-2在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

郭艳峰，王如美，邵海琴，高建洲，聂栓锁，董超颖

（1.河北省邯郸市第一医院神经外二科，河北邯郸 056002；2.河北工程大学医学院临床检验教研室，河北邯郸 056004）

膜细胞骨架连接蛋白及基质金属蛋白酶-2在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

郭艳峰1，王如美2，邵海琴2，高建洲1，聂栓锁1，董超颖1

（1.河北省邯郸市第一医院神经外二科，河北邯郸 056002；2.河北工程大学医学院临床检验教研室，河北邯郸 056004）

目的探讨膜细胞骨架连接蛋白（Ezrin）和基质金属蛋白酶-2（matrixmetalloproteinase 2，MMP-2）在乳腺癌组织中的表达水平及其临床意义。方法应用免疫组织化学SP法，检测乳腺癌组织60例、癌旁正常乳腺组织标本30例中Ezrin、MMP-2的表达情况，并分析Ezrin、MMP-2阳性表达率与肿瘤大小、病理类型、组织学分级及淋巴结转移的关系。结果Ezrin和MMP-2主要表达于细胞膜和细胞质。乳腺癌组织中Ezrin、MMP-2的阳性表达率分别为63.3%（38/60）和65.0%（39/60），明显高于正常乳腺组织的20.0%（6/30）和30.0%（9/30），差异均有统计学意义（P＜0.05）。Ezrin的阳性表达率与乳腺癌患者的年龄、肿瘤大小、病理类型无关（P＞0.05），而与组织学分级、淋巴结转移有关（P＜0.05）。在乳腺癌癌组织中MMP-2的阳性表达率与乳腺癌患者的年龄、病理类型无关（P＞0.05），而与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移有关（P＜0.05）。在乳腺癌组织中Ezrin与MMP-2的表达水平呈显著正相关（rs=2.939，P＜0.05）。结论Ezrin和MMP-2参与了乳腺癌的发生和发展过程，联合检测Ezrin和MMP-2的表达有助于预测乳腺癌的恶性程度和转移潜能。

乳腺肿瘤；基质金属蛋白酶2；免疫组织化学

侵袭和转移是女性乳腺癌患者的主要死亡原因之一，其发病机制尚未完全清楚。膜细胞骨架连接蛋白（Ezrin）是ERM蛋白家族成员之一，对细胞的黏附和运动等起重要作用，其在肿瘤的发生、发展及转移中起重要作用［1］。本研究应用免疫组织化学SP法检测乳腺癌患者癌组织中Ezrin及基质金属蛋白-2（matrix metalloproteinase 2，MMP-2）的表达情况，并分析其与临床病理参数之间的关系，旨在探讨两者在乳腺癌的发生、发展及转移中的作用。

1 资料与方法

1.1 一般资料：选取2010年2月—2012年1月在河北工程大学医学院病理教研室行病理活检确诊的乳腺癌患者60例作为研究对象。患者均为女性，年龄30～76岁，平均（53.1±1.8）岁。入选患者均接受手术治疗，术前未进行任何治疗，临床病理资料齐全。所有手术标本经重新切片后HE染色确定病理诊断。60例乳腺癌患者中浸润性导管癌及导管内癌32例，浸润性小叶癌28例；伴腋淋巴结转移和锁骨上淋巴结转移者19例。根据Elston等［2］方法并进行改良后，将60例乳腺癌分为3级，Ⅰ级14例，Ⅱ级22例，Ⅲ级24例。同时取30例患者的癌旁正常组织作对照。

1.2 免疫组织化学染色：入选患者的标本常规取材，用10%甲醛溶液固定，常规石蜡包埋后4μm连续切片，常规HE染色和免疫组织化学染色，光镜下观察。免疫组织化学染色严格按照试剂盒说明书进行操作，微波修复抗原，用苏木素复染。用试剂盒提供的Ezrin及MMP-2阳性切片作为阳性对照，以PBS代替一抗作为阴性对照。兔抗人Ezrin多克降抗体（cell signaling产品，编号3142）、鼠抗人MMP-2单克隆抗体试剂盒均购于北京中杉金桥生物技术有限公司。

1.3 结果判定：光镜下观察，Ezrin、MMP-2阳性表达定位于细胞膜和细胞质，呈棕黄色颗粒（图1，2）。计数1 000个肿瘤细胞，阳性细胞数＜5%为（-），5%～25%为（+），＞25%～50%为（++），＞50%（+++）。

1.4 统计学方法：应用SPSS17.0统计软件进行统计学处理，计数资料以百分率表示，采用χ2检验，相关性采用Spearman等级相关分析，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结 果

2.1 Ezrin及MMP-2在乳腺癌组织和正常组织中的表达：Ezrin、MMP-2在乳腺癌组织中的阳性表达率为63.3%（38/60）和65.0%（39/60），均高于在正常乳腺组织中的阳性表达率20.0%（6/30）和30.0%（9/30），差异均有统计学意义（P＜0.05）。

2.2 乳腺癌组织中Ezrin阳性表达率与年龄及各病理指标的关系：不同年龄、肿瘤大小及病理类型患者其乳腺癌组织中Ezrin阳性表达率间差异均无统计学意义（P＞0.05），而不同组织学分级患者乳腺癌组织中Ezrin阳性表达率间差异有统计学意义（P＜0.05）；有淋巴结转移者癌组织中Ezrin阳性表达率高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

2.3 乳腺癌组织中MMP-2的阳性表达率与年龄及各病理指标的关系：不同年龄及病理类型患者其乳腺癌组织中MMP-2阳性表达率间差异均无统计学意义（P＞0.05），而不同肿瘤大小、组织学分级患者乳腺癌组织中MMP-2阳性表达率间差异均有统计学意义（P＜0.05）；有淋巴结转移者癌组织中MMP-2阳性表达率高于无淋巴结转移者，差异有统计学意义（P＜0.05）。见表1。

表1 不同病理情况下Ezrin和MMP-2的表达情况

淋巴结转移有19 16（84.2）无41 22（53.7）5.219＜0.05 17（89.5）22（53.7）7.320＜0.05

2.4 乳腺癌组织中Ezrin与MMP-2表达的关系：乳腺癌组织中Ezrin的表达与MMP-2的表达呈正相关（rs=2.939，P＜0.05）。

3 讨 论

Ezrin是连接细胞骨架肌动蛋白微丝与细胞膜的桥接蛋白，通过介导细胞膜与细胞骨架的连接，Ezrin在细胞的形态稳定、运动、黏附、增殖、信号转导及凋亡等方面发挥重要作用。Ezrin的异常表达将导致细胞生物学行为改变。在正常情况下，Ezrin主要在细胞膜表达，而癌细胞则主要在细胞质表达。李恩民［3］在对食管癌进行研究时发现，在永生化的食管癌细胞中Ezrin的表达上调，且Ezrin的表达有从细胞膜转位到细胞质的趋势。国外研究［4］显示，Ezrin在乳腺癌细胞中的表达高于正常组织，且随着肿瘤分级的增高、血管侵犯及淋巴级转移呈明显增高趋势，下调Ezrin的表达能明显抑制肿瘤细胞的生长、侵袭和转移［5］。本研究结果也显示，Ezrin在乳腺癌组织中的表达明显高于在正常乳腺组织中的表达，提示Ezrin可能参与了乳腺癌的发生和发展过程。本研究还显示，Ezrin的表达与肿瘤大小、组织学分级、淋巴结转移等指标有关，与国外的研究结果［4］相似，提示Ezrin与乳腺癌的预后有一定关系。

基质金属蛋白酶的主要作用是降解基质中的蛋白，目前已发现的有20多种［6］。MMP-2是其中的之一，与乳腺癌关系密切，特别是与乳腺癌的侵袭、转移以及骨破坏有关［7-8］。MMP-2可有效降解细胞外基质（extracellular matrix，ECM）和基底膜，并参与肿瘤的侵袭和转移［9］。本研究结果显示，MMP-2在乳腺癌组织中的阳性表达率明显高于正常组织，且MMP-2的表达与肿瘤大小、组织学分级和淋巴结转移有关，这与相关报道［10］一致。乳腺癌细胞MMP-2高表达者瘤体大、分化程度低，具有较高的淋巴结转移率，表明MMP-2可能在乳腺癌远处转移和局部侵袭中起重要作用，提示检测MMP-2的表达有助于判断乳腺癌恶性程度、侵袭及转移潜能。

本研究结果显示，Ezrin和MMP-2在乳腺癌组织中的表达呈明显正相关。Ezrin与MMP-2在乳腺癌转移中是否有协同作用，促进乳腺癌的发展，还有待进一步研究。

本研究提示Ezrin、MMP-2高表达与乳腺癌的发生、发展及预后密切相关，因此，联合检测Ezrin和MMP-2的表达有助于预测乳腺癌的恶性程度和转移潜能。（本文图见封二）

［1］ LAMB RF，ROY C，DIEFENBACH TJ，et al.The TSC1 tumour suppressor hamartin regulates cell adhesion through ERM proteins and the GTPase Rho［J］.Nat Cell Biol，2000，2（5）：281-287.

［2］ ELSTON D，ELIIS KL.Pathological prognostic factors in breast cancer I.The value of histological grade in breast cancer：experience from a large study with long-trem follow-up［J］. Histopathology，1997，19（5）：403-410.

［3］ 李恩民.细胞骨架结合蛋白Ezrin和Fascin在食管癌中的异常表达与功能及其相关细胞信号转导通路［J］.中国肺癌杂志，2009，12（6）：c54-55.

［4］ BAL N，YILDIRIM S，NURSAL TZ，et al.Association of Ezrin expression in intestinal and diffuse gastric carcinoma with clinicopathological parameters and tumor type［J］.World J Gastroenterol，2007，13（27）：3726-3729.

［5］ 谢柏臻，陈安民，郭风劲，等.下调Ezrin表达对前列腺癌细胞增殖和运动功能的影响［J］.肿瘤防治研究，2008，35（10）：701-704.

［6］ ROEB E，MATERN S.Matrixmetalloproteinases and colorectal cancer［J］.Med Klin，2003，98（12）：76-770.

［7］ LHOTAK S，ELAVATHIL LJ，POPOVIC V，et al. Immunolocalization of matrix-metallo proteinases and their inhibitors in clinical specimens of bone metastasis from breast carcinoma［J］.Clin Exp Metastasis，2000，18（6）：463-470.

［8］ 裴素霞，刘贵胜.Twist和基质金属蛋白酶-2在乳腺浸润性导管癌组织中的表达分析［J］.中国全科医学，2010，13（11）：3646-3647.

［9］ 毕立志.胃癌组织中MMP-2、MMP-9、VEGF的表达变化及意义［J］.山东医药，2011，51（14）：40-41.

［10］ 李伟汉.乳腺癌患者癌组织中组织蛋白酶D和基质金属蛋白酶-2的表达及其判断预后的价值［J］.中国老年学杂志，2012，32（4）：719-720.

（本文编辑：刘斯静）

R737.9

B

1007-3205（2012）07-0829-03

2012-01-23；

2012-03-13

邯郸市科学技术局课题（1123108078-13）

郭艳峰（1973-），男，河北磁县人，河北省邯郸市第一医院主治医师，医学硕士，从事神经外科疾病诊治研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.07.032