二级医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的筛选及药敏试验结果分析

郭嘉红

（河北省大厂回族自治县人民医院检验科，河北大厂 065300）

二级医院耐甲氧西林金黄色葡萄球菌的筛选及药敏试验结果分析

郭嘉红

（河北省大厂回族自治县人民医院检验科，河北大厂 065300）

目的研究耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）的筛选与耐药性。方法使用法国梅里埃APIStaph系统进行细菌鉴定，采用K-B纸片扩散法进行药敏试验，用美国临床实验室标准化委员会推荐的头孢西丁纸片扩散法筛选MRSA。结果169株金黄色葡萄球菌中MRSA 114株，占67.4%。所有MRSA对万古霉素、利奈唑胺、奎努普汀/达福普汀敏感。呋喃妥因、氯霉素耐药率较低分别为3.5%、7.0%。β-内酰胺酶类耐药率为100%。对其他抗生素的耐药率都在70%以上。结论MRSA临床分离率在二级医院亦较高，其体外药敏试验显示为严重的多重耐药。应加强对其临床检测，指导临床合理用药。

葡萄球菌，金黄色；微生物敏感性试验；抗药性，多药

金黄色葡萄球菌是人类重要的致病菌，也是临床上重要的院内感染病原菌之一。随着广谱抗生素的大量应用，耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（methicillin-resistant staphylococcus aureus，MRSA）感染率显著增加，MRSA从发现至今感染几乎遍及全球，其不仅对β-内酰胺类抗生素耐药，亦对氨基糖苷类、喹诺酮类、大环内酯类等多种抗生素耐药，由于MRSA严重的多重耐药性，给临床治疗带来很大困难，常常造成严重后果，而且能引起院内感染的暴发流行，其已成为一个严重的公共健康卫生问题。目前三级医院中MRSA的相关报道较多，而在二级医院较少。因此在临床中重视MRSA的筛选及其耐药性的监测对指导临床合理用药、减少耐药菌株的产生有重要意义。现将114株MRSA的筛选和药敏试验结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 菌株来源：来自2008年5月—2011年5月期间门诊、住院患者的血液、尿液、痰、咽拭子、脓液、胸腹腔积液、分泌物等各类标本分离出的金黄色葡萄球菌及MRSA。

1.2 试剂：使用法国梅里埃API Staph鉴定卡，药敏纸片购自于北京天坛药物生物公司，M-H培养基购自天津金章公司。

1.3 质控菌株：金黄色葡萄球菌ATCC 29213、金黄色葡萄球菌ATCC 43300。

1.4 细菌培养与鉴定：标本常规培养按《全国临床检验操作规程》（第3版）［1］处理，菌株鉴定使用法国梅里埃APIStaph鉴定系统鉴定。

1.5 药敏试验：采用纸片扩散法（Kirby-Bauer，K-B），按美国临床实验室标准化委员会2006年版标准解释结果［2］。

1.6 MRSA的筛选：采用头孢西丁纸片扩散法，挑取孵育18～24h的单个菌落，以生理盐水配成0.5麦氏单位，用无菌拭子均匀涂抹于M-H琼脂平板表面，待干后贴上头孢西丁纸片（30μg/片），35℃培养24h观察结果。

1.7 MRSA的判定：头孢西丁纸片扩散法，根据CLSI（2006年）标准进行试验，抑菌圈直径≤19mm为MRSA；≥20mm则为甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌（methicillin sensitive staphylococeus aureus，MSSA）。

2 结 果

2.1 MRSA检出率：2008年5月—2011年5月共检出169株金黄色葡萄球菌，其中MRSA 114株（67.4%）。2009年检出MRSA 21株占本年度总检出金黄色葡萄球菌的55.3%，2010年检出MRSA 43株（67.2%），2011年检出MRSA 50株（74.6%），其检出率呈逐年上升趋势。

2.2 MRSA耐药性分析：所有MRSA对万古霉素、利奈唑胺、奎努普汀/达福普汀敏感。氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、青霉素、头孢西丁它们的耐药率为100%。呋喃妥因、氯霉素的耐药率分别为3.5%、7.0%。克林霉素、红霉素、庆大霉素、加替沙星、左氧氟沙星、利福平、四环素的耐药率分别达到90.3%、93.8%、85.9%、76.3%、84.2%、70.1%、72.8%，所有MRSA呈多重耐药。见表1。

表1 MRSA的16种药敏试验结果Table 1 16 drug sensitivity test results of MRSA

3 讨 论

金黄色葡萄球菌是人类重要的致病菌，也是临床上重要的院内感染病原菌之一。随着广谱抗生素的大量应用，由MRSA引起的感染显著增加。1968年首次发现MRSA引起的感染，40多年来MRSA造成的院内与院外感染已遍布全球。在此次研究中从169株金黄色葡萄球菌中检出MRSA 114株占67.4%，高于文献报道［3］。本文MRSA的检出率由2009年的55.3%上升到2011年的74.6%，其检出率呈逐年上升趋势。由于其严重的多重耐药性，给临床治疗带来很大困难，因此要引起高度重视。

耐MRSA的耐药性至少存在3种耐药机制：①它获得了一个未知的DNA，这个DNA编码了一个超级β-内酰胺抗性的青霉素结合蛋白（penicillin binding protein，PBP），当细菌暴露给β-内酰胺抗生素时，它能像正常的PBP一样进行生物合成。它是由染色体的mecA基因编码产生的PBP2a。②增加β-内酰胺酶的产量而使药物灭活。③产生经过修饰的PBP而降低对药物的亲和力。用头孢西丁纸片扩散法检测到的MRSA一般表示分离菌为mecA阳性（经典耐药性）。头孢西丁纸片扩散法能方便可靠地检测MRSA经典耐药，其与检测mecA基因的“金标准”PCR法的结果具有很好的一致性［4］。经典耐药的MRSA常常对红霉素、克林霉素、四环素、利福平、喹诺酮类或氨基糖苷类耐药。本次用头孢西丁纸片扩散法检测到的MRSA对克林霉素、红霉素、庆大霉素、加替沙星、左氧氟沙星、利福平、四环素的耐药率分别达到90.3%、93.8%、85.9%、76.3%、84.2%、70.1%、72.8%。美国临床实验室标准化委员会推荐将带有mecA基因的金黄色葡萄球菌考虑为对所有β-内酰胺酶类、包括青霉素类、头孢菌素类、β-内酰胺酶类和β-内酰胺酶抑制剂复方制剂以及碳青霉烯类耐药、尽管它们在体外显示有活性，但在临床上对MRSA无效。氨苄西林/舒巴坦、头孢唑啉、青霉素的耐药率为100%。上述这些药物呈现出严重的多重耐药，耐药率达70%以上、甚至达到100%。说明这些抗生素已经不适合对MRSA的治疗。具有β-内酰胺酶或MOD-SA耐药的分离菌通常没有多重耐药性。

呋喃妥因的耐药率为3.5%，表明这种药对MRSA有较好的抗菌活性，但因其吸收差，血药浓度低，尿中浓度高，建议用于肠道与尿路感染。氯霉素的耐药率为7.0%，也较低、这可能与其骨髓毒性较大、临床上没有广泛大量应用有关。

114株MRSA没有发现对万古霉素、利奈唑胺、奎努普汀/达福普汀耐药菌株［5］。万古霉素一直以来被认为是治疗MRSA的首选药物，随着社区获得性MRSA也已经出现并开始流行，使其成为目前应用在MRSA感染最主要、最常用的抗生素。虽然本次试验没有发现耐万古霉素菌株，但随着万古霉素在临床长期应用，其最小抑菌浓度分布有逐渐升高趋势，目前已有对万古霉素耐药菌株的报道［6］。利奈唑胺属于恶唑烷酮类合成抗菌药物，其与细菌50s亚基上核糖体RNA 23s位点结合，从而阻止形成70s始动复合物，抑制细菌蛋白质的合成。由于利奈唑胺的使用靶部位和方式独特，因此不论具有天然或获得性耐药特征的阳性细菌都不易与其他抑制蛋白合成的抗菌药物产生交叉耐药。利奈唑胺不良反应少、应用方便，本研究显示MRSA对利奈唑胺耐药率为0%，因此它是目前治疗严重MRSA最佳抗菌药物之一［7］。但应严格掌握其适应证，避免滥用严防耐药菌株的产生。（耐万古霉素的肠球菌对其他抗生素都耐药，本品是目前惟一有效的药物）。奎努普汀/达福普汀为半合成链阳性菌素复方制剂，两者协同抑制细菌蛋白质的合成。其协同抗菌活性增强为单药的几倍，对某些细菌的抑制作用可转为杀菌，它可作为MRSA引起的重症感染时的首选药物之一。

综上所述，应加强实验室对金黄色葡萄球菌的检测，做到及早筛选出MRSA并对其做药敏试验，使临床有计划分期交替使用抗菌药物，避免滥用抗生素，迅速控制以多重耐药为特点的MRSA所造成的感染，以减少耐药菌株的产生。

［1］ 中华人民共和国卫生部医政司.全国临床检验操作规程［M］. 3版.南京：东南大学出版社，2006：736-753.

［2］ CLINICAL AND LABORATORY STANDARDS INSTITUTE（CLSI）.Performance standards for antimicrobial susceptibility testing［M］.Wayne：Pennsylvaina，2006：44-52.

［3］ 赵德军，罗阳，胡昭宇，等.综合医院感染耐甲氧西林金黄色葡萄球菌耐药性监测［J］.中华医院感染学杂志，2010，20（11）：1583-1585.

［4］ 吴李培，吴蓉，周玉贵，等.头孢西丁纸片扩散法筛选耐甲氧西林葡萄球菌［J］.实用医学杂志，2009，25（16）：2771-2772.

［5］ 赵金英，路娟，罗文涛，等.2007-2009年神经外科耐甲氧林的金黄色葡萄球菌耐药性分析［J］.中国实验诊学，2011，15（2）：298-299

［6］ CHONG S，SUVERT DM，HAGEMAN JC，et al.Infection with vancomycin resistant staphylococeus containing the van A resistance gene［J］.N Engl JMed，2003，348（14）：1342-1347.

［7］ 黄志刚，黄琛，洪胡萍，等.利奈唑胺等抗菌药物对1418株葡萄球菌的抗菌活性分析［J］.国际检验医学杂志，2008，29（6）：549-550.

（本文编辑：赵丽洁）

METHICILLIN-RESISTANT STAPHYLOCOCCUSAUREUS SCREENING AND ANALYSISOF SUSCEPTIBILITY TEST IN A SECONDARY HOSPITAL

GUO Jiahong
（Department of Clinical Laboratory，the People’s Hospital of Dachang Hui Autonomous County，Hebei Province，Dachang 065300，China）

ObjectiveTo study the screening and drug resistance of methicillin-resistant staphylococcus aureus（MRSA）.MethodsBacterial isolates were identified by the French bioMerieux APIStaph system.The susceptibility of antibioticswas performed by Kirby-Bauermethod，and Kirby-Bauermethod of cefoxitin was used to select MRSA recommended by Clinical and Laboratory Standards institute（CLSI）.ResultsAmong the 169 strains of Staphylococcus aureus，there were 114 strains of MRSA，accounting for 67.4%.All of MRSA were sensitive to vancomycin，linezolid，quinupristin/ dalfopristin.Nitrofurantoin，chloramphenicol resistance rate were lower，respectively 3.5%，7.0%.Betalactamase resistance rate was 100%.For other antibiotic，resistance rate was over 70%.ConclusionMRSA clinical separation rate in a secondary hospital is also high.The drug sensitivity test in vitro showed severemultiple resistance.It is important to strengthen the clinical detection and guide clinical rational drug use.

staphylococcus aureus；microbial sensitivity tests；drug resistance，multiple

R378.11

A

1007-3205（2012）07-0796-03

2011-09-27；

2012-04-26

郭嘉红（1971-），男，河北大厂人，河北省大厂回族自治县人民医院主管检验师，从事临床微生物检验学研究。

10.3969/j.issn.1007-3205.2012.07.019