高效液相色谱法测定胃乐宁片中麦角甾醇的含量

吴迎辉

南京老山药业股份有限公司，江苏 南京 211800

胃乐宁片含猴头菌丝，具有养阴和胃作用，用于胃脘疼痛，痞满，腹胀及胃、十二指肠溃疡，慢性萎缩性胃炎等症。［1］。为了保证临床用药效果，控制胃乐宁片的质量，本实验建立了高效液相色谱法测定胃乐宁片中麦角甾醇含量的方法。经方法学考察证实该方法灵敏度高，重现性好，结果满意。

1 仪器与试药

1.1 仪器

高效液相色谱仪系统包括高效液相色谱仪 (Waters 515);P200高压泵;Waters 2487紫外检测器;色谱柱Hanbang C18(200*4.6mm 5μm);数据采集及处理采用HS色谱数据工作站V4.0+(杭州英谱科技)。

1.2 试药

麦角甾醇对照品，上海纯优生物科技有限公司 (批号:20100509);胃乐宁片，南京老山药业股份有限公司提供(批号:20110318，20110524，20110621，20110727);其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件与系统适用性试验［2］

色谱柱:HangBang C18(200*4.6mm 5μm);流动相:甲醇－水 (98:2);使用前以0.45μM微孔滤膜减压过滤，检测波长为UV284nm;流速为1ml/min。此条件下分离度＞2.0，理论塔板数按麦角甾醇峰计算应不低于3500。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取麦角甾醇对照品8.06mg，置100 mL量瓶中，加流动相超声使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得0.0806mg/ml对照品溶液。

2.3 供试品溶液的制备

精密吸取本品10 g(约20片量)置100 mL容量瓶中，加流动相40mL，密塞，摇匀，超声处理 (功率300W，频率100Hz)60分钟，放冷，用流动相稀释至刻度，摇匀，用0.45μM微孔滤膜减压过滤，取续滤液作为供试品溶液。

2.4 线性关系

取对照品溶液，分别进样5、10、15、20、25μL，即相当于麦角甾醇0.403，0.806，1.209，1.612，2.015μg的对照品溶液，测定峰面积，以麦角甾醇质量为横坐标、峰面积为纵坐标，进行线性回归，得回归方程以及线性范围，分别为:Y=163986.2673X+453.6364，r=0.9999，麦角甾醇进样量在0.403～2.015μg范围内峰面积与进样量呈良好线性。

2.5 加样回收率

精密吸取已知含量的样品溶液5份，分别置50mL量瓶中，每份精密加入一定量对照品溶液，然后用流动相稀释到刻度，照含量测定方法操作，计算回收率。结果见表1。

表1 胃乐宁片加样回收率试验结果

2.6 进样精密度试验

在上述色谱条件下，取麦角甾醇对照品溶液重复进样8次10μL，记录峰面积，RSD为1.94%。

2.7 重复性试验

精密称取同一批号的样品 (批号:20110318)按照样品测定的方法重复操作8次，测得麦角甾醇平均含量和RSD，结果表明，重复性试验RSD为1.54% ，表明本法重现性很好。

2.8 稳定性试验

取样品 (批号:20110318)新配的供试品溶液分别在0、2、4、8、16h进样10μL，测定其中麦角甾醇的峰面积，结果RSD为1.25% ，表明供试品溶液在16 h稳定。

2.9 样品测定

取4批样品，按上述供试品溶液的制备方法制备供试品溶液，依上述色谱条件测定含量，分别进样10μL，记录色谱图，按外标法计算样品中麦角甾醇的含量。结果见表2。

表2 HPLC测定胃乐宁片中麦角甾醇的含量结果

3 讨论

根据所测四批样品的含量结果，胃乐宁片中麦角甾醇的平均含量为0.00885%，因此可规定胃乐宁片中麦角甾醇不得少于0.008%。本实验曾用几种方法处理样品，结果以本文拟订的方法结果最好，且操作简便，故选用超声处理(功率300W，频率100Hz)60分钟。麦角甾醇的分子光谱仅在284nm处有一中等强度的吸收峰，故选择284nm为检测波长。

［1］张声生，王垂杰，孙志广，等.胃乐宁片治疗胃痛445例临床观察总结［J］.中华中医药杂志，2005，20(3):166－168.

［2］李迎雪，戴肖东，詹亚光.HPLC法测定猴头菌菌丝体中麦角甾醇含量［J］.食用菌，2010(6):63－64.