补肾口服液中淫羊藿苷含量的HPLC测定方法研究

★ 陶松刘玲刘旭海许锦珍张璐（.江西中医学院 南昌330004；.江中药业股份有限公司 南昌330096）

补肾口服液是由补益名方“五子衍宗方”[1]加淫羊藿，韭菜子，桑葚子而组成的经验方，该方由枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子及淫羊藿等八味中药组成，具有补肾壮阳功效，用于肾虚腰痛，遗精早泄等症。本品中黄酮类成分为其主要有效成分，其中淫羊藿苷为主要成分，为了提高产品质量的可控性，确保用药的安全有效，本文建立的高效液相色谱法测定淫羊藿苷，结果表明，该方法可靠，准确度高，可用于检测补肾口服液中淫羊藿苷含量，达到有效控制产品质量的目的。

1 仪器与材料

Agilent 1100高效液相色谱仪(Agilent，USA)、Agilent Chemstation色谱工作站；SK5200H型数控超声波清洗器（上海科导超声仪器有限公司）；岛津AUW220十万分之一电子天平；AB104－N型万分之一天平（梅特勒－托利多）；超纯水机（美国Mill⁃pore公司）；所用玻璃仪器均为天玻牌A级。

补肾口服液（江中制药集团有限公司研制，瓶/ 100mL）；淫羊藿苷对照品（中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号：110737-200312）；甲醇（色谱纯，山东禹王实验有限公司化工分公司）；所用试剂水均为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

ZORBAX SB-C18色谱柱 (250mm×4.6 mm，5μm)；流动相：甲醇-水（63:37）；体积流量：1.0mL/ min；检测波长：270nm；柱温：25℃；进样量：10μL。

2.2 溶液制备

对照品溶液的制备：取淫羊藿苷对照品2.24mg，精密称定，置10mL容量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀，精密吸取1mL，置10mL量瓶中，用甲醇定容至刻度，摇匀即得对照品溶液[2,3]。

供试品溶液的制备[4]：精密吸取补肾口服液2mL置于25mL量瓶中，加甲醇超声处理30分钟，冷却至室温，用甲醇稀释至刻度，摇匀，经0.45μm滤膜过滤，取续滤液，即得。

阴性样品的制备[5]：按处方比例及制备方法，制备不含淫羊藿的阴性样品，同“2.3”项供试品溶液的制备方法，制成阴性供试品溶液。

2.3 方法专属性试验

精密吸取对照品溶液、供试品溶液、阴性样品溶液各10mL，在”2.1”项下色谱条件进样分析，淫羊藿苷峰形良好，无杂质干扰且基线平稳，结果对照峰与阴性溶液峰没有重叠，专属性良好，见图1。

图1 对照品溶液(A)、供试品溶液(B)及阴性样品溶液(C)

表1 淫羊藿苷含量测定加样回收试验

2.4 线性关系考察

精密吸取淫羊藿苷对照品溶液1、5、10、15、20μL注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，以对照品浓度（X）为横坐标对峰面积（Y）为纵坐标绘制标准曲线，得线性回归方程为：Y=1301X+16.91，相关系数r=0.9995。线性范围在0.0224~0.448mg，呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验

精密吸取对照品溶液，重复进样6次，每次进样10μL，按色谱条件测定，计算，结果淫羊藿苷面积平均值的RSD值为0.72%，表明仪器的精密度良好。

2.6 稳定性试验

按“2.3”项下制备供试品溶液，放置0、2、4、8、12、24h后，按上述色谱条件进行HPLC分析。结果淫羊藿苷峰面积的RSD值为1.37%，表明供试品溶液在24h内基本稳定。

2.7 重复性试验

取同一批号样品各6份，按“2.3”项下方法制备样品溶液，按上述色谱条件进行HPLC分析，以淫羊藿苷峰面积平均值计算含量，结果含量的RSD值为2.18%，表明该方法重复性较好。

2.8 加样回收率试验

精密吸取已知含量的本品溶液（批号：20110921）2mL，各6份，分别精密吸取淫羊藿苷对照品溶液2mL（0.224mg/mL），摇匀，按样品的处理方法将其制成供试品溶液，按上述液相色谱条件测定，计算加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定

取3批不同批号的补肾口服液，按“2.3”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10μL，分别注入液相色谱仪中，记录峰面积，以外标法计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果

3 讨论

检测波长的选择，淫羊藿苷对照品在200~ 380nm波长进行紫外扫描，淫羊藿苷在270nm处有最大吸收，并且供试品色谱中其他组分与淫羊藿苷可以达到基线分离，且灵敏度高，故确定270nm波长作为淫羊藿苷的测定波长。

补肾口服液由枸杞子、菟丝子、五味子、车前子、覆盆子及淫羊藿等八味中药组成，经试验证明，用甲醇超声提取淫羊藿苷，可以将淫羊藿苷提取完全，故选择用甲醇作为提取溶剂；同时对超声时间进行考察，对样品超声15、30、45分钟对淫羊藿苷提取的影响，结果表明，超声30、45分钟都能将淫羊藿苷成分提取完全，故初步选定超声时间为30分钟。

本试验建立的高效液相色谱法，能有效分离各组分，且空白试验无干扰，具有灵敏度高、操作简单、准确、专属性强、重现性好，可作为补肾口服液含量测定质量控制方法。

[1]张泰，窦桂芳，王学美，等.RP-HPLC法同时测定加味五子衍宗方汤剂3种活性成分的含量[J].药物分析杂志，2011，31（1）:22-26.

[2]张柳，何静文.仙茸壮阳口服液中淫羊藿苷的含量测定[J].中国药业，2004，13（11）:36-37.

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[4]高思英.健肾灵颗粒剂中淫羊藿苷的含量测定[J].安徽医药，2004，8（6）:463.

[5]王秀英，徐霞，丛江.大力神口服液中淫羊藿苷的含量测定[J].Chi⁃na Pharmacist，2003，6(10):638-640.