不同炮制方法对黔产淫羊藿中总黄酮及淫羊藿苷的影响*

王全洪

遵义医学院附属医院药剂科(遵义563099)

·方药纵横·

不同炮制方法对黔产淫羊藿中总黄酮及淫羊藿苷的影响*

王全洪

遵义医学院附属医院药剂科(遵义563099)

目的：探讨炮制方法对黔产淫羊藿及其炮制品中总黄酮及淫羊藿苷的影响。方法：分别采用紫外-可见分光光度及高效液相色谱法对黔产淫羊藿及其炮制品中的总黄酮及淫羊藿苷的含量进行测定。结果：淫羊藿总黄酮呈现良好的线性关系；淫羊藿苷在0.00105～0.0525mg/mL的浓度范围内呈现良好的线性关系，加样回收率为99.91%，RSD为2.14%。结论：黔产淫羊藿经炮制加工后，总黄酮及淫羊藿苷的含量总体上未出现较大的变化，仅酒炙淫羊藿中总黄酮及淫羊藿苷的含量略有上升。

淫羊藿具备风湿的祛除、肾脏阳气补足、筋骨的强壮等疗效，在临床上常被应用于风湿、肾衰及筋骨萎软等疾患的治疗[1-2]。淫羊藿中含有多种黄酮类成分，其中淫羊藿苷所占比例较高，临床主要使用的有炒淫羊藿、盐炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿等，不同炮制方法对淫羊藿中成分可能会产生影响，笔者对采用不同炮制方法制备的黔产淫羊藿中总黄酮及淫羊藿苷的含量进行测定，现报道如下。

1 材料与仪器

1.1 实验材料 淫羊藿苷的对照品(中国药品生物制品检定所制作，批号：120712-201309)；炒淫羊藿、盐炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿均购自贵州省药材公司，经鉴定均为黔产淫羊藿正品；乙腈(西陇化工股份有限公司，色谱纯，批号：201310002)；甲醇(济宁恒泰化工有限公司，分析纯，批号：201310019)。

1.2 实验仪器 UV-2550型可见-紫外分光光度计(日本岛津)；Agilent 1200高效液相色谱仪；超声波清洗器(上海必能信超声有限公司)；十万分之一电子天平(日本岛津)等。

2 方法与结果

2.1 淫羊藿总黄酮的含量测定 2.1.1 淫羊藿的对照品溶液的制备方法：应用精密电子称称取适量的淫羊藿苷对照品，放入10mL的容量瓶中并用甲醇并定容，摇匀即得浓度为0.05mg/mL溶液，备用。

2.1.2 供试品溶液的制备：精密称取黔产淫羊藿及其炮制品粉末(过三号筛)0.2g，并将其置入容量为100mL的具塞锥形瓶内，采用移液管精密量取20mL50%的乙醇加入其中，将重量称定，放入超声仪中进行60min的超声，60min后取出，然后放至冷却，再次精密称定具塞锥形瓶的重量，流失的重量使用适量的50%乙醇以补充，充分摇匀后将其静置并滤过，采用移液管精密量取续滤液0.5mL，放置于50mL容量瓶内，并用50%甲醇定容到刻度，充分摇匀后备用。

2.1.3 淫羊藿总的黄酮线性关系的研究：分别精密吸取0.1、0.3、0.5、0.6、0.9mL和1mL的淫羊藿苷对照品溶液，置于10mL量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，摇匀即得不同浓度的淫羊藿苷对照品溶液。选择测定波长为270nm，按照紫外-可见分光光度法，测定不同浓度淫羊藿苷对照品的吸光度，以对照品的浓度(C)和相应的吸光度(A)进行线性回归，可得到淫羊藿苷的线性回归方程：A=0.8427C-0.0752(r=0.9993)。

2.1.4 含量测定：分别取对照品、供试品溶液，并以相应的试剂作为空白，按照“2.1.4”项下的方法，测定淫羊藿及其炮制品的吸光度，计算总黄酮的含量。测定结果见表1。

表1 黔产淫羊藿及其炮制品中淫羊藿

2.2 淫羊藿苷的含量测定 2.2.1 色谱条件[3]：色谱柱为Hypersil ODS2 C18色谱柱；流动相为乙腈-水(30∶70)；流速：1mL/min；所需检测的波长是270nm，柱温：30℃，样品进入的体积是10μL。根据淫羊藿苷峰来计算理论板数，应≥1500。

2.2.2 淫羊藿苷的对照品溶液的制备：采用精密电子称称取适量的淫羊藿苷对照品，并将其放入10mL的容量瓶内，应用甲醇溶液定容到刻度，充分摇匀，便为浓度为0.105mg/mL的淫羊藿苷对照品溶液。

2.2.3 黔产淫羊藿及其炮制品的制备：取黔产淫羊藿及其炮制品粉末0.2g，应用精密电子称称定重量后，置入容量为25mL的具塞锥形瓶内，并用移液管量取20mL的 50%乙醇加入其中，对重量精密称定，置入超声仪中进行60min超声，6min后取出，放置冷却，再次对锥形瓶的重量进行称定，流失的重量利用50%乙醇进行补充，充分摇匀后静置并过滤，过滤出的液体便是黔产淫羊藿及其炮制品的供试品溶液。

2.2.4 方法学考察：2.2.4.1 线性关系的考察：对淫羊藿苷对照品溶液分别精密量取0.1、0.2、0.5、1、2、5mL，置于10mL的量筒中，应用甲醇定容到刻度，所得溶液便是不同浓度的淫羊藿苷的对照品溶液。分别精密吸取10μL上述淫羊藿苷对照品溶液，根据色谱条件测定其峰面积，并以淫羊藿苷的浓度(X)与其对应的峰面积(Y)作图并进行线性回归，可以得到淫羊藿苷的标准曲线：Y =10.61X-30.58，r=0.9996。结果显示，淫羊藿苷在0.00105-0.0525mg/mL的浓度范围内的线性关系良好。

2.2.4.2 精密度实验：取黔产淫羊藿的供试品溶液，每次的进样量均为10μL，连续进样5次，照色谱条件测定其峰面积，算峰面积的RSD值。结果显示，黔产淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值为1.59%，表明该方法的精密度良好。

2.2.4.3 稳定性实验：取同批黔产淫羊藿，制备其供试品溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，每隔2h进样1次，连续进样7次，照色谱条件测定其峰面积，计算RSD值。结果显示，黔产淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值为1.94%，表明黔产淫羊藿中的淫羊藿苷在12h内基本稳定，稳定性较好。

2.2.4.4 重复性实验：取5份黔产淫羊藿样品，根据制备照样品的方法，对供试品溶液进行制备，精密量取所制备的溶液10μL，并向高效液相色谱仪内注入，峰面积的测定根据照色谱条件进行，最后对淫羊藿苷的含量进行计算。由结果得出，黔产淫羊藿中淫羊藿苷的RSD值为1.62%，表明采用该方法用于黔产淫羊藿中淫羊藿苷的含量测定，重现性较好。

2.2.4.5 加样回收率实验：取6份已知含量的淫羊藿药材的粉末(过三号筛)，每份约0.5g，精密称定，分别等量加入的适量的淫羊藿苷对照品，按照制备样品的方法对溶液进行制备，并精密量取所制备的溶液10μL，将其向高效液相色谱仪内注入，其峰面积的测定根据色谱条件进行，最后对其加样回收率进行计算，见表2。

2.2.4.6 黔产淫羊藿及黔产淫羊藿炮制品的含量测定：按上述样品制备方法制备黔产淫羊藿及其炮制品的溶液，精密吸取10μL，注入高效液相色谱仪，照色谱条件测定其峰面积，根据淫羊藿苷的线性回归方程，计算各样品中淫羊藿苷的含量。淫羊藿苷含量测定的结果见表3。

表2 加样回收率试验结果(n=6)

表3 黔产淫羊藿及其炮制品中淫羊

3 讨 论 淫羊藿总黄酮具有有提高机体免疫功能、改善患者心脑血管功能、调节机体的内分泌功能、抗肿瘤等多重药理活性。传统中医常使用淫羊藿的炮制品，如炒淫羊藿、盐炙淫羊藿、酒炙淫羊藿、羊脂淫羊藿入药[4]。炮制前、后淫羊藿的活性成分是否发生了较大的变化，目前进行较全面的研究尚少，如崔莉等对淫羊藿炮制前、后在大鼠体内的药代动力学进行了研究，发现了其主要活性成分淫羊藿苷在大鼠体内的吸收量出现了较大的提高，从而表明了通过炮制可改善淫羊藿中淫羊藿苷在大鼠体内的吸收，提高淫羊藿中淫羊藿苷的生物利用度[5]。笔者测定了淫羊藿炮制前、后的主要化学成分变化，发现炮制后，淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷未出现较大的变化，提示炮制工艺的实施，可能对淫羊藿中其它成分可能会有一定的影响，从而促进主要活性成分的生物利用度提高，但对淫羊藿总黄酮及淫羊藿苷的含量未产生较大的影响，结果显示笔者采用的高效液相色谱法及紫外-可见分光光度法具有灵敏度较好、操作较为简单，可快速对淫羊藿中的活性成分进行测定，为控制淫羊藿及其炮制品的质量提供了重要的参考。

[1] 韩小东,张正祥,任光友,等.柔毛淫羊藿对去卵巢小鼠骨密度、破骨细胞和IL-β的影响[J].陕西中医,2011,32(7):917-918.

[2] 王雁录,王伟亮,唐自银,等.仙灵骨葆胶囊对膝骨性关节炎患者关节液SOD和 MDA水平的影响[J].陕西医学杂志,2008,37(7):892-893.

[3] 余晓晖,侯 嘉,赵 磊,等.甘肃不同产地淫羊藿中总黄酮和淫羊藿苷含量测定[J].甘肃中医学院学报,2014,31(1):13-16.

[4] 任桂友,刘海萍,王 爽,等.大孔树脂同时分离纯化淫羊藿中淫羊藿苷和淫羊藿次苷Ⅱ的工艺优选[J].中国实验方剂学杂志，2014,20(2):5-7.

[5] 崔 莉,孙 娥,樊宏伟,等.药理效应法测定淫羊藿生品及不同炮制品的药动学参数[J].中药材,2013,36(3):370-373.

(收稿2015-04-24；修回2015-06-17)

*贵州省中医药管理局中医药、民族医药科学技术研究项目(QZYY2013-100)

淫羊藿 炮制 色谱法，高压液相

R28.3

A

10.3969/j.issn.1000-7369.2015.11.043