HPLC测定养血糖浆中芍药苷的含量

★ 高华宏张升方永奇,3曾文雪,4**（1.广州中医药大学附属三亚市中医院 三亚57000；.广州中医药大学 广州 510405；3.广州中医药大学第一附属医院实验中心 广州 510405；4.江西中医学院 南昌330006）

养血糖浆系由当归、白芍、川芎、黄芪等药材加工提取制得的口服糖浆剂，具有补气血、调经的功效。目前主要用于月经不调，行经腹痛，贫血虚弱，产后体虚，萎黄肌瘦，产后血虚等症状。目前周坚等对其当归、川芎及黄芪进行了薄层色谱鉴别，并对总阿魏酸进行了含量测定[1]，为控制该产品质量提供了依据。本实验为了进一步完善其含量测定项目，对处方中的君药白芍的主要有效成分芍药苷进行了含量测定。

1 仪器与试药

高效液相色谱仪（美国WATERS，515泵，2487紫外检测器），电子天平（日本岛津AUY120）。

芍药苷对照品（中国药品生物制品检定所，批号110736-200526），养血糖浆（四川省通园制药有限公司，批号20110301-20110305），乙腈为色谱纯，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5μm），Diamonsil C18预柱，流动相0.1%磷酸溶液-乙腈（82：18），检测波长230 nm，温度室温，进样量10 μL，理论塔板数按芍药苷峰计算应不低于3 000。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液的制备 精密称取芍药苷对照品5.83 mg，置100 mL容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得58.3 μg/mL的对照品储备液。精密吸取上述储备液10 mL，加甲醇稀释，作为对照品溶液。

表1 芍药苷加样回收率试验

2.2.2 供试品溶液的制备 取本品10 mL，根据参考文献的方法[3-4]和预实验结果，精密量取加8倍量体积的70%乙醇萃取，取上清液，然后水浴挥干，最后用甲醇稀释至100 mL容量瓶中，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。

2.2.3 阴性对照溶液的制备 取不含白芍的阴性样品，照2.2.2项下方法制备，即得。

2.3 干扰试验 取上述对照品溶液、供试品溶液、阴性对照溶液各10 μL，按照2.1项下色谱条件，分别进样测定，记录色谱图，结果见图1。由图可知，其他原辅料对芍药苷的含量测定无干扰。

图1 养血糖浆高效液相色谱图

2.4 线性关系考察 精密称取对照品储备液0.5，1，2，10，25 mL，分别置于25 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为系列对照品溶液。按2.1项下色谱条件，分别吸取上述对照品溶液各10 μL，记录芍药苷峰面积值，以峰面积积分值（A）对对照品浓度C（μg/ mL）进行线性回归，得回归方程A=1134C-146.73（r= 0.9998）。结果表明，芍药苷对照品浓度在1.166-58.3μg/mL与峰面积值呈良好的线性关系。

2.5 精密度试验 取同一批样品制得的供试品溶液，重复进样5次，每次10 μL，记录峰面积，RSD为1.04%，表明仪器精密度良好。

2.6 重复性试验 分别称取本品同一批号样品6份，照2.2.2项下方法制备供试品溶液，分别测定芍药苷含量。结果RSD=0.98%(n=6)，表明本法的重复性良好。

2.7 供试品稳定性试验 对同一批样品制得的供试品溶液，分别于第0，2，4，6，8，10 h进样，测定峰面积，结果RSD为1.34%，表明供试品溶液在10 h内稳定性良好。

2.8 回收率试验 精密称取已知芍药苷含量的高、中、低浓度的样品各3份，共9份样品，分别加入芍药苷对照品98.0 μg，按照2.2.2项下供试品溶液制备方法制备溶液，按照2.1项色谱条件，分别测定，计算其加样回收率，结果见表1。

2.9 样品含量测定 取5批样品，按照2.2.2项下方法制备供试液。照上述色谱条件分别测定含量。结果如表2。

表2 样品芍药苷含量测定 /μg·mL-1

3 讨论

3.1 流动相的选择 在试验过程中，曾采用甲醇-水（25：75）、乙腈-水（26：74）等多种流动相，色谱峰分离效果均不理想，而未被采用。而以0.1%磷酸溶液-乙腈（82：18）为流动相时，分离效果较好，无其它干扰的杂质峰，峰形较好。

3.2 提取溶剂的选择 在供试品制备时，参考文献大多采用甲醇、不同浓度乙醇（70%、80%）作为提取溶媒[2-5]，通过试验发现70%、80%乙醇萃取得到的样品浓度大于甲醇，而70%、80%乙醇的提取效果差别不大，从节约溶剂的角度出发选择70%的乙醇。结合文献中加入量的考察，最终确定加入8倍量体积的70%乙醇。不仅无杂质干扰，且含量高，稳定可靠，而且操作方法简单有效。

[1].周坚,王宓.养血当归糖浆质量标准的研究[J].南京中医药大学学报,2003,23(1):61-62.

[2].周祖坤,孙代华,凌飒.高效液相色谱法测定当归芍药颗粒剂中芍药普的含量[J].药物分析杂志,2006,26(7):1 001-1 003.

[3].李衫,王亚楠,刘小宇,等.白芍总昔提取和纯化工艺的研究[J].食品科学,2007,28(5):173-175.

[4].邓一鸣,孙晓霞,薛立安.赤芍中芍药苷的提纯工艺研究[J].南京中医药大学学报,2004,20(6):363-365.

[5].周洪伟,许文博,王玉蓉,等.赤芍总苷提取与大孔树脂纯化工艺研究[J].中医药学报,2011,39(1):48-50.