基于荧光分析法的丁香酚提取工艺

周 晓 霞

(衡水学院 化工学院，河北 衡水 053000)

基于荧光分析法的丁香酚提取工艺

周 晓 霞

(衡水学院 化工学院，河北 衡水 053000)

几种不同提取条件下对丁香中丁香酚进行提取，比较提取后丁香酚溶液在发射波长为 315 nm，激发波长为280 nm处的荧光强度，发现用无水甲醇作为溶剂提取效果最好，而且无水甲醇自身的荧光强度很弱，不影响用荧光分析方法对丁香酚定量研究；超声波提取方法效果最好，用无水甲醇做溶剂超声5 min即可从丁香药材中将丁香酚全部提取出.

荧光分析法；丁香；丁香酚；提取工艺

丁香(Eugenia caryophyllataThunb)为桃金娘科常绿乔木，分布于欧洲和亚洲，我国东北至西南各省均有分布，丁香具有抗菌消炎[1]、抗病毒[2]、降压、镇咳、保肝利胆[3]等作用.丁香挥发油是丁香的主要成分[4]，挥发油中以丁香酚(eugenol)为主，丁香酚是中药丁香的有效成分，为《中国药典》中规定衡量丁香中药材及其中成药质量的重要指标[5].

荧光方法是一种新型的方法，在不经分离的情况下测定中药丁香中丁香酚的含量.用薄层荧光扫描法进行验证，表明方法简单易行，结果可靠,可用于丁香药材的质量评价.

李鹏等[6]报道用正己烷和乙醇提取丁香中的丁香酚,但是正己烷和乙醇本身的荧光强度较强,用此种溶剂提取出的丁香酚不能用于荧光分析方法分析.

1 材料

F-4600荧光分光光度计(hitachi)；超声波清洗器(KH-100B 昆山禾创超声仪器有限公司)；恒温水浴锅(HH-8 江苏省金坛市环宇科学仪器厂)；丁香对照药材(中国药品生物制品检定所，编号：1037-200002)；丁香酚(Eugenol 中国药品生物制品检定所，编号：110725-200711)以无水甲醇配制成浓度为 0.019 5 g·mL-1的标准溶液，使用时以水和无水甲醇适当稀释；NaCl水溶液：取分析纯的市售氯化钠试剂，配成 1.0 mol·mL-1的水溶液；无水甲醇(天津市科密欧化学试剂有限公司，分析纯)；无水乙醇(天津市永大化学试剂有限公司，分析纯)；NaOH、HCl均为分析纯，二次去离子水.

2 方法

2.1 丁香酚三维荧光光谱

丁香酚溶液在近中性条件下的三维荧光光谱如图 1所示.图中横坐标是发射波长λem，纵坐标是激发波长λex，等高线表示的是荧光强度.由图中可见丁香酚有两个荧光峰，分别位于λex/λem= 235 nm / 315 nm以及280 nm / 315 nm，这两个峰的发射波长相同，但是激发波长不同，其中以 280 nm为激发波长的荧光峰较强，我们只研究这个荧光峰.

2.2丁香中丁香酚最佳提取条件

称取0.008 75 g丁香对照药材置于25 mL容量瓶中，分别用1) 无水甲醇；2) 蒸馏水；3) 碱液(NaOH PH=12)；4) 酸液(HCl PH=2)；5) 无水乙醇.定容至刻度，并且室温浸泡 24 h后，摇匀，在F-4600荧光分光光度计上扫描，见图2.

图1 丁香酚的三维荧光光谱

通过对比各种提取条件下丁香酚的荧光强度，发现用无水甲醇作为溶剂，提取出丁香中荧光成分丁香酚的含量最高，又因为甲醇本身的荧光强度比较弱，对测定几乎没有影响，从而确定最佳溶剂为无水甲醇.

图2 丁香酚在不同提取条件下的激发和发射光谱

图3 不同提取时间下丁香酚的荧光强度

表1 无水甲醇提取并进行超声

表2 无水甲醇提取并进行沸水浴

2.3 提取方法的比较

2.3.1 用无水甲醇浸泡

称取0.008 75 g丁香对照药材置于25 mL容量瓶中，无水甲醇定容至刻度，准确量取丁香对照药材0.1～10 mL容量瓶中得c = 0.003 5 mg·mL-1的溶液，考察时间对其的影响，时间分别为：1/3, 0.5, 1, 1.5, 2, 3, 4, 5, 7, 8, 10, 16, 24, 48 h，如图3所示.

用无水甲醇做溶剂，浸泡丁香对照药材约0.5 h后荧光强度基本稳定，所以确定若用无水甲醇浸泡丁香药材，30 min即可将丁香酚提取完全.

2.3.2 超声波提取法

精确称取丁香对照药材35 μg 3份，分别于10 mL容量瓶中，精密加入10 mL无水甲醇(10 mL无水甲醇足以将药材中的丁香酚提取完全)，称重，依次超声5 min、10 min和 15 min，超声后静置15 min，再称重补足重量，过滤，扫描荧光光谱，数据如表1所示.

由表1的实验数据可知，用超声提取5 min就可将丁香中的丁香酚提取完全.

2.3.3 沸水浴提取法

同上述操作，提取方式改为沸水浴，沸水浴时间依次为10 min、20 min和60 min，扫描荧光光谱，数据如表2所示.

由表2的实验数据可知，用沸水浴提取20 min就可将丁香中的丁香酚提取完全.相比较超声波提取法，沸水浴提取法将丁香中丁香酚提取完全所需时间较长，而且若采用沸水浴提取丁香酚，丁香酚有可能会分解.

3 结论

在用荧光分析方法对丁香中的丁香酚分析时，无水甲醇因为其自身荧光较弱，影响很小，又能够将丁香酚全部提取至溶液中，是最佳的溶剂.在提取方法上可以用无水甲醇溶解丁香药材并超声 5 min或是用无水甲醇浸泡丁香药材 30 min均可，具体可以根据实验者的要求进行选择.

[1] 杨滋渊,李巧如,赵院莉,等.丁香挥发油的抗菌作用研究[J].西北药学杂志,2007,22(4):181.

[2] 薛俊玲,张宁,滕慧梅,等.甲丁胶囊的抗病毒实验研究[J].中医药信息,1997(2):47.

[3] 王峰,文玉晶,牛俊奇,等.丁香叶片药理和毒理的实脸研究[J].临床肝胆病杂志,2000,16(2):94-96.

[4] 臧亚茹.丁香及其有效成分药理作用的实验研究[J].承德医学院学报,2007,24(1):71-73.

[5] 中华人民共和国国家药典委员会.中华人民共和国药典[M].北京:化学工业出版社,2010:4.

[6] 李鹏,张琼光,丁英平,等.不同方法提取丁香中挥发油的比较[J].中国医院药学杂志,2006,26(8):945-947.

Extraction Techniques of Eugenol Based on Fluorimetry

ZHOU Xiao-xia
(College of Chemical Engineering, Hengshui University, Hengshui, Hebei 053000, China)

We extract eugenol fromEugenia caryophyllataThunb under different extraction condition. By comparing the fluorescence intensity at maximum emission wavelength 315 nm and excitation wavelengths at 280 nm, we find the effect is best by methanol, and methanol have weaker fluorescence intensity, which will not influence the quantitative study of eugenol based on fluorimetry. Ultrasonic is the best way in extracting eugenia. Extract all the eugenol fromEugenia caryophyllataThunb need five minutes by using methanol as solvent.

fluorimetry;Eugenia caryophyllataThunb; eugenol; extraction techniques

O657.39

A

1673-2065(2011)04-0043-03

2011-03-01

河北省科技支撑计划项目(10276435)

周晓霞(1979-),女,河北景县人,衡水学院化工学院讲师,理学硕士.

(责任编校：李建明英文校对：李玉玲)