HPLC法测定妇月康胶囊中阿魏酸的含量及含量均匀度

宾天海 胡帆

妇月康胶囊由当归、川芎、益母草、甘草(炙)、桃仁、干姜(炭)、红花等八味药组成的复方制剂，功能主要用于活血、祛瘀、止痛，用于产后恶露不行，少腹疼痛，也可试用于上节育环引起的阴道流血，月经过多等。本方中当归、川芎、益母草均含阿魏酸成分，阿魏酸为本方中有效成分之一。因此测定本品中阿魏酸的含量，可作为本品质量控制的指标之一。为了更好的控制该制剂的质量，保证药品使用安全、有效，本文采用HPLC法测定了阿魏酸的含量及含量均匀度。

1 仪器与试药

LC-10AP型高效液相色谱仪(日本岛津公司);SPD-10Avp紫外-可见检测器;LC-10ATVP7725(i)型手动进样器;威玛龙色谱数据工作站;Aglient 8456紫外可见分光光度计;kh-250db型超声处理器(昆山禾创超声仪器有限公司)。

阿魏酸对照品由中国药品生物制品检定所提供，批号为:110773-9910;妇月康胶囊(购自A厂，共3批);甲醇为色谱纯;其余试剂为分析纯，水为超纯水。

2 实验方法与结果

2.1 色谱条件 色谱条件为:色谱柱为大连依立特 ODS2柱(HyperClone C18，4.6 ×250 mm，5 μm);流动相为甲醇-1%冰醋酸溶液(26∶74)，流速为1.0 ml/min，检测波长为320 nm，进样量为5 μl;柱温为室温;理论塔板数按阿魏酸计算应不低于3000。在上述色谱条件下，供试品中阿魏酸能完全分离，对照品与阴性对照品溶液中没有峰重叠，色谱图见图1。

图1 高效液相色谱色谱图

2.2 对照品溶液的制备 对照品溶液的制备精密称取阿魏酸对照品10.0 mg，置25 ml棕色容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀;精密量取1.5 ml，至100 ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，即得(每1 ml含阿魏酸6 μg)(4℃以下避光保存)。

2.3 供试品溶液的制备 取装量差异项下的本品内容物，研细，混匀，取1.5 g，精密称定，置50 ml棕色容量瓶中，加甲醇至刻度，超声处理(功率250W，频率50kHz)30 min，放冷，摇匀，滤过，取续滤液，即得。

2.4 测定法 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液5 μl，注入液相色谱仪，以上述色谱条件测定，根据阿魏酸峰面积，以外标法计算供试品中阿魏酸含量。

2.5 线性关系考察 线性关系考察 精密量取阿魏酸对照品溶液10 mg，置25 ml棕色容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，摇匀，制成400 μg/ml对照品溶液，备用。分别精密吸取 400 μg/ml阿魏酸对照品溶液 0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 ml，分别置100 ml棕色容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，进样测定。以对照品进样浓度为横坐标(X)，峰面积积分值为纵坐标(Y)绘制标准曲线，回归方程为:Y=14236X-1721.7，相关系数r=0.9995。结果表明:阿魏酸进样浓度在2～12 μg/ml范围内，进样浓度与阿魏酸峰面积呈良好线性关系。

2.6 精密度试验 分别精密吸取阿魏酸对照品溶液(6.0 μg/ml)和供试品溶液(批号20091101)各5μl，重复进样6次，记录色谱图，测定阿魏酸面积，其RSD为0.42%，表明仪器精密度良好。

2.7 稳定性试验 精密吸取供试品溶液(批号:20091101)5 μl，分别于 0、4、8、12、16、24 h 进行测定，其峰面积 RSD 为0.42%，表明供试品溶液在24 h内稳定。

2.8 阴性对照试验 按处方比例取处方中缺当归、川芎、益母草的各味药材，照制法制取缺当归、川芎、益母草阴性样品。取阴性样品1.5 g，并按供试品溶液提取方法制成阴性对照溶液，测定，在上述色谱条件下，缺当归、川芎、益母草阴性对照溶液，在阿魏酸色谱峰处无干扰峰出现，表明对被测成分无干扰。

2.9 重复性试验 取同一批号供试品(批号20091101)共5份，每份约1.5 g，精密称定，按样品测定项下方法进行提取，测定，结果测得平均值145.5μg/粒，RSD%=0.40，表明重复性良好。

2.10 加样回收率试验 取已测知含量的供试品(批号20091101，含量:145.5 μg/粒)5 份，每份约 0.75 g，精密称定，按供试品溶液制备方法处理。并按上述色谱条件依法测定，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收试验结果

2.11 样品中阿魏酸的含量测定 分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液3批，按上述色谱条件测定，以外标法计算，结果见表2。

2.12 样品中阿魏酸的含量均匀度测定 取样品3批，按供试品溶液制备方法提取，以上述色谱条件依法(2005年版药典二部附录XE)测定阿魏酸含量均匀度，结果见表2。

表2 样品含量及含量均匀度测定结果

3 讨论

3.1 波长的选择 文献［1］采用324 nm作为检测波长;文献［2］采用312 nm作为检测波长;对阿魏酸对照品溶液进行紫外吸收光谱测定，其吸收峰为316 nm和324 nm，316 nm处的峰面积较大，故选择316 nm作为本品的检验波长。

3.2 流动相的选择 阿魏酸为弱酸性化合物，易分离，在流动相中加入少酸性物质可改善峰形，参考文献［3］甲醇-1.5%冰醋酸溶液，文献［4］乙腈-0.1%磷酸溶液，通过比较两者不同配比下的分离效果，最终确定为甲醇-1%冰醋酸溶液(26∶74)，此条件下，从色谱图形分析看，阿魏酸托尾因子较小，样品分离效果好，阴性对照无干扰。

3.3 提取时间的考察 取同一供试品，超声时间分别为20，30，40 min，对提取效果进行考察，结果超声提取30 min时可提取完全，故实验中选择30 min作为提取时间。

3.4 阿魏酸 阿魏酸是当归水溶液中的有效成分，属丙烯酸衍生物，见光受热极易异构化而降解，在酸性溶液较为稳定，因此在实验过程中对样品和对照品采取加酸和棕色量瓶配制定容，做保护性处理，保证测定结果的准确。

［1］ 黄罗生，郭健新，刘梅，等.HPLC测定阿魏酸含量的探讨.中成药，2004，26(2):134-136.

［2］ 章泽恒，谭朝阳.HPLC测定妇科十味胶囊中阿魏酸的含量.中国中医信息杂志，2006，13(2):40-41.

［3］ 邓向涛，董玉秀.参桂胶囊中阿魏酸含量的测定.河南中医学院学报，2006，13(2):40-41.

［4］ 孙立恩.产妇安合剂中阿魏酸含量测定.海峡药学，2007，22(128):47-48.