酒红球盖菇液体摇瓶培养基优化

聂建军，李彩萍，杨玉画，李兆斌

（1.山西省农业科学院农业资源与经济研究所，山西太原030006；2.山西省农业科学院农业环境与资源研究所，山西太原030006）

酒红球盖菇（Stropharia rugoso-annulate）又名大球盖菇、皱环球盖菇，是国际菇类交易市场上十大菇类之一，也是联合国粮农组织（FAO）向发展中国家推荐栽培的特色品种之一[1]。近年来栽培推广情况表明，酒红球盖菇具有非常广阔的发展前景，栽培技术简单粗放，可直接采用生料或发酵料栽培，具有极强的抗杂菌能力，栽培成功率高，原料来源丰富。但在生产实践中发现，传统酒红球盖菇制种周期为90～100 d，比一般食用菌制种周期长1倍多，极大地制约了酒红球盖菇的大面积栽培推广。而采用液体摇瓶种制备原种的方法，制种周期比传统制种缩短了将近1/2，仅为50 d左右，可以有效解决这一生产实践中的难题。

本研究对酒红球盖菇液体摇瓶培养基最佳碳源、氮源和最佳碳、氮源组合进行了筛选，选出了适宜酒红球盖菇菌丝生长的液体摇瓶最佳培养基，以期为酒红球盖菇液体摇瓶菌种的生产提供理论依据和技术支撑。

1 材料和方法

1.1 供试菌种

供试菌种为酒红球盖菇（S tropharia rugosoannulate），引自福建省三明市真菌研究所。

1.2 培养基

1.2.1 母种培养基 采用马铃薯综合培养基[2]。

1.2.2 碳源基础培养基 蛋白胨0.5%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，pH值自然。

1.2.3 氮源基础培养基 葡萄糖2%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%，pH值自然。

1.2.4 试验培养基 将葡萄糖、蔗糖、可溶性淀粉、乳糖、麦芽糖和山梨糖分别加入碳源基础培养基中（浓度均为2%），进行碳源优化试验；将蛋白胨、酵母膏、硝酸铵、硫酸铵、尿素和麸皮分别加入氮源基础培养基中（浓度均为1%），进行氮源优化试验。

1.2.5 优化培养基 根据1.2.4中碳、氮源的单因素试验结果，选择较好的碳、氮源各2个，进行L9（34）正交试验。以蔗糖（A）和可溶性淀粉（B）为复合碳源，蛋白胨（C）和麸皮（D）为复合氮源，采用4因素3水平正交试验方法，筛选出酒红球盖菇液体摇瓶最佳培养基[3]。

1.3 试验方法

1.3.1 菌种活化与纯化培养 将酒红球盖菇菌种从冰箱中取出后，25℃下恒温放置7 d，使处于低温中的菌种活化；无菌条件下把活化菌种接种于马铃薯综合培养基平板上，28℃下恒温培养3～4 d，之后挑取强壮菌丝体前端，接种于斜面培养基上，28℃下恒温培养至斜面长满，得到一级菌种备用[4]。

1.3.2 碳（氮）源筛选试验 取3块0.5 cm2一级酒红球盖菇菌种，分别接种于6种不同碳（氮）源培养基中，250mL三角瓶装液体培养基40mL，使气生菌丝一面向上悬浮，28℃下静置24 h；然后放入往复式恒温振荡器内，28℃，150 r/min条件下培养5 d[5]。每种碳（氮）源试验重复5次，结果取平均值。

1.3.3 正交试验筛选最佳培养基配方 取3块0.5 cm2一级酒红球盖菇菌种，分别接种于正交试验9个不同处理的培养基中，250mL三角瓶装液体培养基40mL，使气生菌丝一面向上悬浮，28℃下静置24 h；然后放入往复式恒温振荡器内，28℃，150 r/min条件下培养5 d。每次试验重复5次，结果取平均值。试验因素及其各水平如表1所示。

表1 L9（34）正交试验的因素及水平 %

1.4 测定方法

1.4.1 菌球密度的测定[6]使用血球计数板观测每毫升培养液内的菌球个数。

1.4.2 菌球直径的测定[7]随机取菌球30个，排列成直线，并测其总长度，求得菌球的平均直径。

1.4.3 生物量的测定[8]取50 mL培养液，过0.42mm筛，菌丝体经蒸馏水充分洗涤后，80℃真空干燥至恒质量，电子天平准确称质量。计算公式为：

2 结果与分析

2.1 碳源筛选试验结果

从碳源筛选试验结果（表2）可以看出，蔗糖作为碳源，其平均菌丝体生物量最高，达7.26 g/L；平均菌丝球密度最大，为162个/mL；平均菌丝球直径较小，为1.19mm。综合比较，蔗糖作为酒红球盖菇液体摇瓶培养基碳源效果最佳，其次是可溶性淀粉、葡萄糖等。

2.2 氮源筛选试验结果

从氮源筛选试验结果（表3）可以看出，麸皮作为氮源，其平均菌丝体生物量最高，达6.98 g/L；平均菌丝球密度较大，为138个/mL；平均菌丝球直径较小，为1.30mm。综合比较，麸皮作为酒红球盖菇液体摇瓶培养基氮源效果最佳，其次是蛋白胨、酵母膏等。

表2 不同碳源对酒红球盖菇菌丝体生长的影响

表3 不同氮源对酒红球盖菇菌丝体生长的影响

2.3 正交试验优化酒红球盖菇液体摇瓶培养基结果

从L9（34）正交试验结果与极差分析（表4）可以得出，影响酒红球盖菇菌丝体生物量的因素依次为A＞D＞C＞B，即蔗糖＞麸皮＞蛋白胨＞可溶性淀粉；酒红球盖菇液体摇瓶最佳培养基组合为A2B1C2D2，即蔗糖2%，可溶性淀粉1%，麸皮2%，蛋白胨0.5%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%。

表4 L9（34）正交试验结果

3 结论

通过筛选试验发现，酒红球盖菇液体摇瓶培养基最佳碳源是蔗糖，最佳氮源是麸皮。麸皮来源广泛、价格低廉、营养丰富，是大规模生产酒红球盖菇液体菌种的最佳原料。

试验中发现，可溶性淀粉作为酒红球盖菇液体摇瓶培养基复合碳源，一方面可以作为碳营养被吸收和利用，另一方面前期可以作为增稠剂来提高培养液黏度，减小菌球直径，增加菌球数量，到后期可溶性淀粉被消耗而使培养液变稀，这样的菌种接到固体培养基上透气性好，有利于菌种的萌发和吃料。

采用正交试验优化筛选酒红球盖菇液体摇瓶培养基配方，结果表明，酒红球盖菇液体摇瓶最佳培养基为蔗糖2%，可溶性淀粉1%，麸皮2%，蛋白胨0.5%，KH2PO40.1%，MgSO40.05%。

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