胆管癌中血管内皮生长因子与微血管密度检测的临床意义

孙智勇

（附属菏泽市立医院，山东 菏泽 274031）

在肿瘤的发生、发展过程中，血管的生成起着重要的作用。血管内皮生长因子（vascular endothelial growth factor，VEGF）是一种公认的最重要和最强的促血管生成因子，在多种肿瘤中高表达，与肿瘤的发展、浸润、转移密切相关。而肿瘤微血管密度（microvessel density，MVD）作为肿瘤微血管形成的标志，可直接反映肿瘤血管生成的程度。为此，我们采用免疫组织化学法研究胆管癌中VEGF和MVD的表达情况，现将结果报道如下。

1 临床资料

1.1 一般资料 选取胆管癌根治切除术后存档蜡块51例，均经病理检查证实为胆管癌。其中男37例，女14例；年龄35～74岁，平均56.1岁。按组织分化程度分类，高分化10例，中分化25例，低分化16例；按癌组织类型分类，胆管腺癌48例，黏液腺癌1例，黏液细胞癌1例，鳞癌1例；有淋巴结转移21例，无淋巴结转移30例。取10例 胆管结石伴胆管下端狭窄做胆肠Roux-Y吻合术患者的胆管组织作为对照，均经病理学检查证实无癌变。

1.2 试剂 鼠抗人VEGF单克隆抗体，鼠抗人CD34单 克隆抗体，即用型免疫组织化学超敏VltrasensitiveTMS-P试剂盒。以上产品均购自福建迈新生物技术开发有限公司。

1.3 实验方法 所有标本均用10%甲醛固定，石蜡包埋，连续切片3张，厚度4 μm。采用VltrasensitiveTMS-P免疫组化染色法，检测胆管癌组织中VEGF和MVD的表达情况，操作步骤严格按照说明书进行。磷酸盐缓冲液代替一抗进行阴性对照。

1.4 结果判断

1.4.1 VEGF表达以细胞浆中出现棕黄色颗粒为阳性细胞；阳性细胞数＞10%定为阳性表达，≤10% 为阴性表达。

1.4.2 MVD表达 采用Weidner等[1]的校正技术，以任何一个棕色的内皮细胞或细胞丛作为一个血管。先在低倍镜下观察切片全部视野，找到肿瘤血管密度最高区域，再在高倍镜下计数5个 视野的微血管数，取其平均值作为该例肿瘤的MVD。

1.5 统计学处理 所获数据采用χ2检验和t检验。

2 结果

2.1 VEGF和MVD在胆管癌组织和正常胆管组织中表达的比较 见表1。 结果显示VEGF和MVD在胆管癌组织中的表达明显高于在正常胆管组织中表达，差异有显著性。

表1VEGF、MVD在两组组织中表达的比较（例±s)

表1VEGF、MVD在两组组织中表达的比较（例±s)

P＜0.01

组别 例数 VEGF MVD阳性 阴性胆管癌组 51 41 10 51.05±13.8正常胆管组 10 2 8 11.87±1.65

2.2 VEGF、MVD与胆管癌分化程度、浸润、转移的关系 高分化10例，VEGF阳性8例，占76%。MVD值为50.2±12.9。中分化25例，VEGF19例，占76%。MVD值为51.15±13.0。低分化16例，VEGF阳性14例，占87.5%。MVD值为53.28±10.1。不同分化程度间VEGF、MVD比较，P＞0.05，无显著性差异。有淋巴结转移者20例，VEGF阳性19例，占95%。MVD值为58.4±14.15。无淋巴结转移者31例，VEGF阳性22例，占71%。MVD值为32.01±6.8。有无淋巴结晶转移间VEGF、MVD值比较，P＜0.05， 有显著性差异。结果显示胆管癌组织中VEGF、MVD表达与肿瘤的分化程度无明显关系，但与有无淋巴结转移有关系，转移组高于无转移组。

2.3 胆管癌中VEGF和MVD表达的关系 51例胆管癌中VEGF阳性标本（41例）中MVD为58.97%，阴性标本（10例）中MVD为33.06%，二者差异有统计学意义（t=4.136，r=0.69，P＜0.05） ，说明VEGF的表达与MVD密切相关。

3 讨论

肿瘤相关的血管生成是肿瘤生长和转移的必备条件，与肿瘤的发生、发展和转移有着密切的关系。血管内皮生长因子（VEGF）是一种高度特异性的血管内皮细胞分裂素，被公认为最重要和最强的促血管生成因子，能刺激内皮细胞增殖和迁移，促使肿瘤血管生成[2-3]。VEGF是血管内皮细胞强有力的有丝分裂原，通过表达于血管内皮细胞VEGF受体发挥作用，选择性地促进血管内皮细胞生长，促使血管增生；同时还可增加金属蛋白酶和间质胶原酶的表达，提高血管通透性，有利于肿瘤细胞向外浸润、转移；通过抑制宿主抗原反应细胞的成熟，使肿瘤细胞逃避免疫监视，因而对肿瘤的生长、浸润、转移发挥重要的促进作用。VEGF在多种恶性肿瘤中呈现高表达，如肺癌、胃癌、大肠癌、乳腺癌等[4]。本研究发现，VEGF在胆管癌中的阳性表达率（80.4%）明显高于非胆管癌组；VEGF在胆管癌中的表现与肿瘤的分化程度无明显关系，而与有无淋巴结转移密切相关，有淋巴结转移组的VEGF阳性表达率明显高于无淋巴结转移组，提示VEGF在胆管癌的发生、发展、浸润和转移中发挥重要作用。

肿瘤微血管密度（MVD）是一个反映肿瘤血管生成的重要指标，直接反映肿瘤血管生成的情况，恶性肿瘤血管生成的数量可通过测定MVD进行评估[5]。有文献显示MVD的高低与肿瘤的复发、转移的程度密切相关[6]。MVD反映了肿瘤微血管生成的强度与肿瘤侵袭性的必然关系，可以作为预测肿瘤复发转移的一项预后指标。国内外许多学者对乳癌、前列腺癌、大肠癌、肝癌、胃癌、卵巢癌、肾癌、肺癌、子宫内膜癌等各系统进行微血管密度的研究证实，MVD是一个独立而重要的预后因素，高MVD提示肿瘤易复发和转移，预后不良[7]。对患者手术标本进行MVD分析，可以为及早使用血管生成抑制剂提供依据，也可为其他治疗方法的采用与否提供依据。本研究显示MVD在胆管癌组明显高于非胆管癌组，统计学分析显示二者的差异具有显著性意义，MVD在胆管癌的发生、发展过程中是一个重要的观察指标，反映肿瘤的浸润和转移能力，可作为一个独立的预后因素来判断胆管癌的转移、复发情况。

VEGF和MVD在胆管癌中的表达存在正相关关系，即VEGF的表达水平高，MVD也随之增高，说明VEGF是肿瘤血管形成的强诱导因子，MVD能很好地反映肿瘤血管生成情况，也同时证实VEGF是作用特异的血管生成刺激因子，能特异性地促进肿瘤血管的生成，促使肿瘤的发生、发展、浸润和转移。VEGF和MVD的联合检测能为临床预测胆管癌的复发、转移和预后提高依据，也为肿瘤的靶向治疗提供依据。参考文献：

［1］ Weiclner N，Folkman J，Pozza F，et al.Tumor angiogenesis：a new significant and independent prognostic indicator in ear ly-stage breast carcinoma［J］.J Natl Cancer Inst.1992，84（24）：1875-1887.

［2］ Ferrara N，Henzel WJ.Pitnitary follicular cell secrete a novel he pa rin binding growth factor specific for vascular endo-thelial cells［J］.Biochem Biophys Res Commun，1989，161（2）：851-855.

［3］ Olofsson B，Jeltsch M，Eriksson U，et al.Current biology of VEGF-B and VEGF-C［J］.Curr Opin Biotechnol，1999，10（6）：528-535.

［4］ 吴胤瑛，李恩孝.VEGF在恶性肿瘤中的研究进展［J］.现在肿瘤医学，2005，13（5）：附18-21.

［5］ Fox CH，Whalen GF，Sanders MM，et al.Angiogenesis in nor mal tissue adjacent to colon cancer［J］.J Surg Oncol，1998，69（4）：230-233.

［6］ Cianchi F，Palomba A，Messerini J，et al.Tumorangiogens is in lymph node-negative rectal cancer：correlation with clinicopath ologi cal parameters and prognosis.Ann Sing Oncol，2002，9：20-26.

［7］ 赵士彭，赵发，郭伶俐.肿瘤微血管密度研究进展［J］.国外医学外科学分册，2001，28（1）：1-3.