吡喹酮对曼氏裂头蚴感染小鼠治疗效果的进一步观察＊

王中全，王明明，祁 欣，姜 鹏，李 楠，蔺西萌，崔 晶

2：河南省疾病预防控制中心，郑州 450016

吡喹酮对曼氏裂头蚴感染小鼠治疗效果的进一步观察＊

王中全1，王明明1，祁 欣1，姜 鹏1，李 楠1，蔺西萌2，崔 晶1

目的 进一步观察吡喹酮对曼氏裂头蚴感染小鼠的疗效。方法 将72只小鼠分为8组（每组9只），每只小鼠经口感染5条裂头蚴，感染后1周1－3组分别应用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮治疗1个疗程（每日3次，疗程3d）后1周剖杀，4－6组治疗2个疗程后1周剖杀，7、8组为对照组。另选40只小鼠分为4组（每组10只），每只经口感染5条裂头蚴，感染后14周1～3组应用2 000mg/kg吡喹酮治疗后1、3、5周剖杀；4组为对照组。各组小鼠剖杀后收集裂头蚴数并计算各组的平均检出虫数和减虫率，光镜下观察虫体形态变化。结果 小鼠感染裂头蚴后1周，应用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮治疗1个疗程后的减虫率分别为70.6%、77.3%及84% （P＞0.05），治疗2个疗程后的减虫率分别为57.1%、54.6%及54.6%（P＞0.05）。小鼠感染裂头蚴后14周，应用2 000mg/kg吡喹酮治疗后1、3及5周的减虫率分别只有28%、20%及20%（P＞0.05）；虽然治疗后裂头蚴虫体有断裂现象，体壁上出现突起、溃烂及溶解等，但虫体头部无明显破坏。结论 增加剂量与疗程不能提高吡喹酮对裂头蚴感染小鼠的疗效；吡喹酮对裂头蚴病的治疗效果可能与感染后的治疗时间有关。

裂头蚴病；治疗；吡喹酮；小鼠

2：河南省疾病预防控制中心，郑州 450016

曼氏裂头蚴病是由曼氏迭宫绦虫（Spirometramansoni）的幼虫（裂头蚴）侵入人体引起的疾病，在我国主要分布于南方地区（广东、海南、湖南、福建等）。近年来在河南省农村，部分居民认为生食蝌蚪有“清热解毒，凉血祛病”的功效，故在民间有生吞蝌蚪治疗皮肤瘙痒等疾病的习俗。血清流行病学调查结果表明，河南省部分居民血清裂头蚴抗体阳性率为5.7%。河南省已为近年来新发现的裂头蚴病的自然疫源地，现已将其列入新出现的疾病［1］。

目前，裂头蚴病的治疗主要是采用手术摘除虫体或者局部应用40%酒精－2%普鲁卡因杀死虫体。但对内脏及皮下多发性裂头蚴病，目前尚无满意的治疗方法。吡喹酮是一种广谱抗吸虫与绦虫药物，但其治疗裂头蚴病的疗效目前尚不确定。我们曾对小鼠感染裂头蚴后5周应用1200、1800mg/kg吡喹酮治疗1个疗程（4d），仅取得了部分治疗效果，治疗后1周的减虫率分别为41.56%与70.83%［2］。为了进一步观察吡喹酮对裂头蚴感染小鼠的治疗效果，我们对裂头蚴感染小鼠后不同时间应用不同剂量吡喹酮的治疗效果进行了观察。

1 材料方法

1.1 裂头蚴与实验小鼠 裂头蚴采自郑州市郊区的青蛙，虫体长1～11cm（平均5cm）；选取伸缩活动剧烈的裂头蚴，用无菌生理盐水清洗3次后接种小鼠。健康雄性6周龄昆明小鼠，体重20～25g，购自郑州大学医学院实验动物中心。

1.2 吡喹酮 吡喹酮片剂（200mg）为南京制药厂有限公司产品（批号20091109），用蒸馏水根据所需剂量配制成吡喹酮悬液。采用灌胃方法给药，每只小鼠每次灌胃0.2mL。

1.3 小鼠的裂头蚴实验感染与治疗 将72只小鼠随机分为8组（每组9只），每只小鼠经口感染5条裂头蚴，感染方法按文献操作［3］。感染后1周1－3组分别应用总剂量为2 000、2 800、3 600mg/kg的吡喹酮治疗（每日3次，疗程3d），治疗后1周剖杀；4－6组治疗1个疗程后间隔7d，再进行第2疗程治疗，剂量同上，第2疗程结束后1周剖杀；7、8组小鼠仅灌服蒸馏水作为对照组。

另选40只小鼠随机分为4组（每组10只），每只小鼠经口感染5条裂头蚴，感染后14周1－3组小鼠应用总剂量为2 000mg/kg的吡喹酮治疗（每日3次，疗程3d），治疗后1、3、5周分别剖杀；4组小鼠仅灌服蒸馏水作为对照组。

1.4 治疗效果与虫体形态变化的观察 所有感染小鼠在剖杀后，在全身皮下、肌肉及内脏等部位寻找并计数裂头蚴，计算平均检出裂头蚴数、标准差及减虫率，减虫率＝（对照组平均检出虫数－治疗组平均检出虫数）/对照组平均检出虫数×100%。从感染后14周应用吡喹酮治疗后1周剖杀的小鼠，收集裂头蚴分别进行虫体大体形态及组织切片苏木素伊红染色后镜下观察。

1.5 统计学分析 采用SPSS 17.0统计软件进行统计分析，采用多个及两个独立样本的秩和检验、卡方检验对实验数据进行统计学检验。检验水准设定为α＝0.05。

2 结 果

2.1 吡喹酮对裂头蚴感染小鼠后1周的治疗效果小鼠感染裂头蚴后1周，应用2 000、2 800、3 600 mg/kg吡喹酮治疗1个疗程后的减虫率分别为70.6%、77.3%及84%（P＞0.05）（表1）；不同剂量组的检出虫数均明显低于与对照组（P＜0.01）。应用吡喹酮治疗2个疗程后的减虫率分别为57.1%、54.6%及54.6%（P＞0.05）；不同剂量组的检出虫数亦明显低于对照组（P＜0.01）。2 000mg/kg吡喹酮治疗2个疗程与1个疗程的减虫率的差异无统计学意义（P＞0.05）；2 800、3 600mg/kg剂量组治疗2个疗程的减虫率反而低于治疗1个疗程后的减虫率（P＜0.05）。

2.2 吡喹酮对裂头蚴感染小鼠后14周的治疗效果小鼠感染裂头蚴后14周，应用2 000mg/kg吡喹酮治疗后1、3及5周的减虫率分别为28%、20%及20%（P＞0.05）（表2），治疗后1、3及5周的检出虫数与对照组相比均无统计学意义（P均＞0.05）。

2.3 吡喹酮治疗后裂头蚴虫体形态变化的观察裂头蚴感染小鼠后14周，应用2 000mg/kg吡喹酮治疗后1周时发现有虫体断裂现象，虫体活动减弱，但头部均完整；光镜下可见裂头蚴虫体断裂，体壁肿胀、颗粒状或球状突起、片状溃烂及网状溶解等（图1）；在组织切片上，吡喹酮治疗后裂头蚴虫体内可见大小不等的空泡（图2），但虫体头部无明显破坏。

表1 吡喹酮对裂头蚴感染小鼠后1周的治疗效果Table 1 Therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum at 1week post infection

表2 吡喹酮对裂头蚴感染小鼠后14周的治疗效果（n＝5）Table 2 Therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum at 14weeks post infection

图1 吡喹酮治疗后光镜下裂头蚴形态变化（×40）Fig.1 Morphological changes of spargana under light microscope after treatment with praziquantel（×40）

3 讨 论

笔者以前发现裂头蚴感染小鼠后5周，应用1 800mg/kg吡喹酮治疗后1周的减虫率为70.83%［2］。为了研究治疗裂头蚴病的适宜剂量，本文又应用2 000、2 800、3 600mg/kg吡喹酮对裂头蚴感染后1周的小鼠进行了疗效观察，发现应用上述剂量治疗1个疗程后的减虫率分别为70.6%、77.3%及84%，治疗2个疗程后的减虫率分别为57.1%、54.6%及54.6%；结果表明，增大剂量与延长疗程并不能提高吡喹酮对裂头蚴感染小鼠的治疗效果。小鼠感染裂头蚴后14周才开始应用2 000mg/kg吡喹酮进行治疗的小鼠，治疗后1、3及5周的减虫率仅分别为28%、20%及20%，检出虫数与对照组相比均无统计学意义；吡喹酮治疗后可见裂头蚴虫体断裂，体壁肿胀、突起、溃烂及网状溶解等，但虫体头部无明显变化。上述结果表明，吡喹酮对裂头蚴感染小鼠的治疗效果与感染后的治疗时间有关，提示裂头蚴感染后开始治疗的时间越晚，效果越差；对于感染后14周的小鼠无明显治疗效果。Kim等［4］发现应用吡喹酮治疗5例脑裂头蚴病患者无效；王辉等［5］对4例脑裂头蚴病患者先应用吡喹酮治疗，无效后手术才切除虫体，4例患者均发现裂头蚴虫体，其中有2条活虫。

图2 吡喹酮治疗后裂头蚴组织学变化（HE染色，×100）Fig.2 Histological changes of spargana under light microscope after treatment with praziquantel（×100）

小鼠口服吡喹酮的半数致死量为3 712mg/kg［6］，小鼠与人体使用药物的等效计量换算关系为小鼠是人的12.33倍［7］。本研究应用总剂量为2 000、2 800、3 600mg/kg的吡喹酮对裂头蚴感染小鼠进行治疗，换算成人体口服的总剂量分别为162、227、292mg/kg，而国外教科书中推荐治疗裂头蚴病患者的总剂量为120～150mg/kg（疗程2d）［8］，国内推荐治疗裂头蚴病患者的总剂量为120～300mg/kg（疗程2～4d）［9］，本研究治疗1个疗程所用的剂量已等于或明显高于国内外治疗裂头蚴病的剂量。此外，本研究还发现第2疗程的减虫率反而低于第1疗程，可能是治疗后早期裂头蚴后部虫体断裂崩解后被宿主吸收，而残留的虫体头部较小，在解剖时不易被肉眼发现，从而造成了治疗1个疗程后虫荷明显降低的假象，而第2疗程结束后1周剖杀小鼠时残留的虫体已生长成为较长的裂头蚴、更容易被肉眼发现，故检出虫数增加而致减虫率有所下降。Hong等发现5条裂头蚴感染小鼠后回收的裂头蚴数与回收时间明显有关，随感染后时间的延长回收数逐渐升高，裂头蚴接种小鼠后1、2、4、10周的回收率分别是72%、80%、95%及92%，至接种后6个月回收率达100%［10］。笔者曾发现裂头蚴在1640培养液中也有虫体断裂现象，将残留虫体的头部接种小鼠后2周又能长成完整的裂头蚴［2］。此外，1与5条裂头蚴感染小鼠后3周应用2 800mg/kg吡喹酮治疗后18周剖杀时减虫率分别为20%与0，且检出的裂头蚴囊包形成率为36.21%（21/58），与未经治疗的对照组的囊包形成率40%（4/10）的差异无统计学意义。裂头蚴感染小鼠后虫体周围囊包的形成可能是吡喹酮治疗无效的重要因素，有人发现甲苯哒唑对旋毛虫成囊期幼虫无杀伤作用［11］。

［1］Cui J，Lin XM，Zhang HW，et al.Sparganosis，Henan province，central China［J］.Emerg Infect Dis，2010，17（1）：146－147.

［2］李楠，蔺西萌，崔晶，等.不同剂量吡喹酮治疗曼氏裂头蚴感染小鼠的疗效观察［J］.中国血吸虫病防治杂志，2010，22（1）：51－55.

［3］Cui J，Li N，Wang ZQ，et al.Serodiagnosis of experimental sparganum infections of mice and human sparganosis by ELISA using ES antigens ofSpirometramansonispargana［J］.Parasitol Res，2011，108（6）：1551－1556.

［4］Kim DG，Paek SH，Chang KH，et al.Cerebral sparganosis：clinical manifestations，treatment，and outcome［J］.J Neurosurg.1996，85（6）：1066－1071.

［5］王辉，李文胜，蔡梅钦，等.脑裂头蚴病的诊断与外科治疗［J］.中国医师进修杂志，2010，33（23）：33－35

［6］肖树华.抗血吸虫及抗绦虫新药吡喹酮的实验研究［J］.国外医学参考资料（寄生虫病分册），1978，（6）：241－245.

［7］黄继汗，黄晓晖，陈志扬，等.药理试验中动物间和动物与人体间的等效剂量换算［J］.中国临床药理学与治疗学，2004，9（9）：1069－1072.

［8］John DT，Petri Jr WA.Medical Parasitolology［M］.9th ed，Missouri：Saunders，2006：207－238.

［9］陈兴保，吴观陵，孙新，等.现代寄生虫病学［J］.北京：人民军医出版社，2002：715－721.

［10］Hong ST，Kim KJ，Huh S，et al.The changes of histopathology and serum anti－sparganum IgG in experimental sparganosis of mice［J］.Kisaengchunghak Chapchi，1989，27（4）：261－269.

［11］Pozio E，Sacchini D，Sacchi L，et al.Failure of mebendazole in the treatment of humans withTrichinellaspiralisinfection at the stage of encapsulating larvae［J］.Clin Infect Dis，2001，32（4）：638－642.

Further study on efficacy of praziquantel on mice infected withSparganummansoni

WANG Zhong－quan，WANG Ming－ming，QI Xin，JIANG Peng，LI Nan，LIN Xi－meng，CUI Jing

（DepartmentofParasitology，MedicalCollege，ZhengzhouUniversity，Zhengzhou450052，China）

In order to further study the efficacy of praziquantel on mice infected withSparganummansoni，72mice were divided into 8groups（9mice in each group），and each mice was orally infected with 5sparana.At one week after infection，1－3groups were treated with praziquantel（2 000，2 800，and 3 600mg/kg in three doses per day for 3days），and sacrificed at 1 week after 1course；4－6groups were treated with the second course of praziquantel as the same dosage，and sacrificed at 1 week after 2courses；7and 8groups were used as control.Additional 40mice were divided into 4groups（10micein each group），and each mice was orally infected with 5sparana.At 14weeks after infection，1－3groups were treated with praziquantel（2 000mg/kg），and sacrificed at 1，3，and 5weeks after treatment.After the infected mice were sacrificed，the number of worms recovered was observed and worm reduction rate was determined，and the morphological changes of sparana post treatment were observed under microscope.When treating with one course of 2 000，2 800，and 3 600mg/kg of praziquantel at 1 week post infection，the worm reduction rate in three groups of the infected mice was 70.6%，77.3%and 84%（P＞0.05）.After treatment with two course of praziquantel，the worm reduction rate was 57.1%，54.6%and 54.6%（P＞0.05）.When the infected mice were treated with 2 800mg/kg of praziquantel at 14weeks post infection，the worm reduction rate in the infected mice was only 28%，20%and 20%at 1，3and 5weeks after treatment（P＞0.05）.After treatment with praziquantel，the spargana was ruptured，and the protuberance and dissolution of cuticles were observed，but the destruction of the anterior end of spargana were not found.The results showed that the increase of dosage and course of treatment did not improve the therapeutic effect of praziquantel on mice infected with sparganum，and the efficacy of praziquantel for sparganosis might be related to time of therapy after infection.

sparganosis；treatment；praziquantel；mice

R383.3

A

1002－2694（2011）10－0921－04

＊河南省医学科技攻关（201003006）资助项目

崔晶：Email：cuij＠zzu.edu.cn

1.郑州大学医学院寄生虫学教研室，郑州 450052；

2011－06－17；

2011－08－06