毛细管气相色谱法同时检测丙酸氯倍他索原料药中4种有机溶剂残留量

李春燕，屠婕红，傅应华（1.杭州市下城区天水武林街道社区卫生服务中心，杭州市310003；.嘉兴学院医学院，嘉兴市 314001）

丙酸氯倍他索系一种肾上腺皮质激素类药物，为《中国药典》2010年版二部收载的品种[1]，其制剂剂型主要有乳膏、软膏、洗剂等，可用于治疗皮肤炎症和瘙痒症，如神经性皮炎、接触性皮炎、脂溢性皮炎、湿疹等[2]。《中国药典》2010年版二部收载的丙酸氯倍他索质量标准中未收载其残留溶剂检测项目，文献也未见有相关报道。丙酸氯倍他索因生产工艺不同引入的残留溶剂也不同，其中甲醇、乙醇、N，N-二甲基甲酰胺（DMF）和二甲基亚砜等为主要残留溶剂。已有的丙酸氯倍他索药品注册标准制定了乙醇、DMF 2种残留溶剂的限度检查方法[3]，尚不能控制不同生产工艺所制产品中残留溶剂的检测方法。有关残留溶剂的检测方法主要有气相色谱法[4，5]，为了提高本品质量及用药安全，笔者依据《中国药典》2010年版二部附录“残留溶剂测定法”的相关要求[1]，对该原料药中不同生产工艺引入残留溶剂的检测方法进行了研究，建立了毛细管气相色谱法同时测定上述4种残留溶剂的方法。该法可以控制不同生产工艺条件下的残留溶剂，方法简单、灵敏、准确。

1 仪器与试药

1.1 仪器

6890N气相色谱仪、氢火焰离子化检测器（FID）、7683B自动进样器（带10µL微量注射针）、色谱数据工作站（美国Agilent公司）；BP211D电子天平（北京赛多利斯有限公司，精度：±0.01 mg）。

1.2 试药

丙酸氯倍他索原料药5批（某原料药厂提供，批号：20100316、20100319、201003122、20100323、20100325，按干燥品计，含量分别为100.3%、99.8%、99.2%、101.3%、98.77%）；无水乙醇（以下简称为乙醇）为分析纯，甲醇、DMF和二甲基亚砜均为色谱纯，水为纯化水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

HP-INNOWAX石英毛细管柱（30 m×0.32 μm，0.25 μm）；柱温：程序升温，初始温度60℃，保持5 min，并以30℃·min－1速率升温至160℃，保持5 min；载气：高纯氮气，流速：1.0 mL·min－1；FID温度：250 ℃；进样口温度：160 ℃；进样方式：分流进样，分流比：5.0∶1；燃气：氢气，30 mL·min－1；助燃气：空气，450 mL·min－1；尾吹气：氮气，25 mL·min－1；进样量：1 µL。

2.2 溶液的制备

2.2.1 对照品溶液。分别精密称取甲醇15.01 mg、乙醇24.96 mg、DMF 4.37 mg、二甲基亚砜25.11 mg，置于加有适量1，6-二氧六环（溶剂）的10 mL容量瓶中，用1，6-二氧六环稀释至刻度，摇匀，作为对照品贮备液；再精密量取上述贮备液1 mL，置于10 mL容量瓶中，用1，6-二氧六环稀释至刻度，摇匀，即得。

2.2.2 样品溶液。取本品约0.5 g，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加1，6-二氧六环使溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。

2.3 方法学考察

2.3.1 专属性考察。分别精密量取1，6-二氧六环和“2.2”项下对照品溶液和样品溶液各1µL，注入气相色谱仪，记录色谱。结果，1，6-二氧六环中的杂质峰不干扰残留溶剂的分析，色谱见图1。

图1 气相色谱图Fig 1 GC chromatograms

2.3.2 线性关系考察。分别取甲醇、乙醇、DMF、二甲基亚砜各10 mg，精密称定，置于10 mL容量瓶中，加1，6-二氧六环至刻度，摇匀；精密量取上述溶液适量，用1，6-二氧六环逐级稀释制成1.0、0.5、0.25、0.1、0.02 g·L－1的溶液，按上述色谱条件测定，以所得峰面积（Y）与相应对照品浓度（X）作线性回归处理，得甲醇、乙醇、DMF、二甲基亚砜的回归方程：Y＝770.4X－0.680，r＝1.000；Y＝1 219.6X+3.435，r＝1.000；Y＝903.7X+1.000，r＝1.000；Y＝976.7X+3.181，r＝1.000。表明各有机溶剂检测浓度线性范围均为0.02～1.0 g·L－1。

2.3.3 进样精密度。精密量取对照品溶液1µL，注入气相色谱仪，重复进样6次，测定峰面积，计算平均峰面积：甲醇为120.8（RSD＝2.88%），乙醇为300.9（RSD＝1.61%），DMF为41.2（RSD＝1.16%），二甲基亚砜为403.1（RSD＝1.57%），表明精密度良好。

2.3.4 溶液稳定性试验。取对照品溶液，分别于0、2、4、6、8 h取样测定峰面积，计算得4种有机溶剂峰面积的RSD均低于2.0%，表明溶液在8 h内稳定。

2.3.5 最低定量限试验。精密量取“2.3.2”项下的0.02 g·L－1溶液适量，用1，6-二氧六环逐级稀释，依法测定，按S/N＝10计算，结果，最低定量浓度甲醇、乙醇、DMF、二甲基亚砜分别为0.60、0.98、0.38、0.79 μg·mL－1。

2.3.6 加样回收率试验。取经105℃干燥至恒重的样品（批号为080115）约0.5 g，置于10 mL容量瓶中，精密称定，共6份，分别精密加入上述对照品贮备液1 mL，再加1，6-二氧六环使溶解并稀释至刻度，摇匀；再取对照品溶液，依法测定，计算回收率。得甲醇为99.3%（RSD＝0.70%）、乙醇为102.5%（RSD＝1.02%）、DMF为 97.6%（RSD＝1.09%）、二甲基亚砜为100.1%（RSD＝1.23%）（n＝6）。

2.3.7 样品中残留溶剂量测定。取批号为20100316、20100319、201003122、20100323、20100325的5批样品各0.5 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备样品溶液，取“2.2.1”项下对照品溶液作对照，依法测定。结果，批号20100319样品中检出甲醇量为0.06%，批号201003122、20100323样品中检出乙醇量分别为0.11%和0.18%，其余各批样品均未检出上述4种残留有机溶剂。

3 讨论

3.1 溶剂的选择

丙酸氯倍他索不溶于水，在乙酸乙酯与1，6-二氧六环中溶解，笔者试用乙酸乙酯作溶剂，结果因乙酸乙酯保留时间短，对甲醇、乙醇测定影响较大而弃用；改用1，6-二氧六环作溶剂，保留时间适宜，对上述4种溶剂测定均无影响，故选择1，6-二氧六环作溶剂。

3.2 色谱条件的选择

考虑到甲醇、乙醇、DMF、二甲基亚砜均为极性溶剂，且沸点差别较大，经试验在HP-INNOWAX毛细管色谱柱上各组分分离效果良好。由于DMF、二甲基亚砜和1，6-二氧六环沸点较高，若采用等柱温法，出峰时间长，拖尾严重。为了改善分离、缩短分析周期，采用了程序升温法，让低沸点的甲醇、乙醇先出峰，再快速升高柱温使DMF、二甲基亚砜和1，6-二氧六环加速出峰，大大提高了DMF、二甲基亚砜的柱效，且峰形对称。但试验发现气化室温度高时，易产生丙酸峰，其保留时间与DMF的保留时间相近，会影响后者的分离。通过多次试验，考察不同气化温度下的杂质峰影响，当温度降至160℃时未见杂质峰产生。在给定的色谱条件下，甲醇、乙醇、DMF、二甲基亚砜之间均达到基线分离，一次进样在13 min内完成测定，达到了快速分析的目的。

3.3 溶剂限度的拟定

根据《中国药典》2010年版二部[1]规定，甲醇、DMF为第2类溶剂，其限度分别为0.3%、0.088%；乙醇、二甲基亚砜为第3类溶剂，限度均为0.5%。

[1] 国家药典委员会编.中华人民共和国药典（二部）[S].2010年版.北京：中国医药科技出版社，2010：101、附录61-65.

[2] 陈新谦，金有豫，汤 光主编.新编药物学[M].北京：人民卫生出版社，2007：630.

[3] 国家食品药品监督管理局.药品注册标准——丙酸氯倍他索YBH00962008[S].2008.

[4] 叶海青，傅应华.毛细管气相色谱法测定丙酸倍氯米松中3种有机溶剂残留量[J].中国药房，2010，21（13）：1 235.

[5] 魏京京，张启明，朱维华.毛细管气相色谱测定27种常用有机溶剂[J].药物分析杂志，2006，26（8）：1 171.