蔗糖铁注射液铁含量测定方法的研究

李 莉，汪一帆，花传政

南京医科大学第二附属医院，南京 210011

蔗糖铁注射液[1]是一种静脉铁注射剂，用来提高非血红素铁利用度以治疗缺铁性贫血。由于其安全性高，副作用少和可以精确计算的铁补充剂量等优点，目前该产品已经成为缺铁性贫血临床治疗最重要的静脉铁剂品种。

铁是蔗糖铁注射液中重要活性成分，本文对蔗糖铁注射液铁含量控制方法进行研究，对比了原子吸收法、氧化还原滴定法和络合滴定法等铁含量测定方法在蔗糖铁注射液铁含量测定中的优缺点[2-4]，选择络合滴定法作为蔗糖铁注射液铁含量分析方法并进行了全面的方法学验证，结果证实该方法是蔗糖铁注射液铁含量较适的测定方法。

1 材 料

BP211D电子天平；岛津AA-670原子吸收分光光度计；PB-10型pH计。

蔗糖铁注射液，南京恒生制药厂，批号:110101、110102、110103，规格:5 mL∶100 mgFe。

乙二胺四醋酸二钠滴定液、硫代硫酸钠滴定液（按照《中国药典》2010年版二部附录XⅤF进行标定）；高锰酸钾试液、碘化钾试液、淀粉指示液、过氧化氢、冰醋酸、Tiron试液、十二水硫酸铁铵均市售。

2 方法和结果

2.1 原子吸收法

按照USP32-NF27 iron sucrose injection mono graph铁含量测定方法进行测定。

2.2 氧化还原滴定法

用内容量移液管精密量取本品2 mL，置500 mL具塞锥形瓶中，用少量的水分次冲洗移液管，洗液并入锥形瓶，加30 mL水和2 mL硫酸，混匀，加热至溶液微沸；放冷，滴加高锰酸钾试液，至溶液恰显粉红色并持续5 s，加盐酸30 mL与碘化钾试液30 mL，密塞，静置3 min，加水50 mL，用硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol·L-1）滴定，至近终点时，加淀粉指示液2 mL，继续滴定至蓝色消失。每1 mL硫代硫酸钠滴定液（0.1 mol·L-1）相当于 5.585 mg 的 Fe。

2.3 络合滴定法

因本品分子结构中含有三价的铁离子，能与乙二胺四醋酸二钠发生络合反应，随着乙二胺四醋酸二钠的不断加入，被测金属离子不断减少，从而置换出与指示剂结合的金属离子，最终通过溶液颜色发生突变，指示络合滴定终点，从而测定样品中的铁含量，在此对最佳测试条件进行筛选。

2.3.1 蔗糖铁复合物消解条件的考察 络合滴定测试的第一步也应是消解蔗糖铁复合物，使得铁离子游离，而且消解过程中应不加热，尽量避免溶液中蔗糖发生显色变化，因此盐酸用量的选择就显得比较重要。根据表1，盐酸使用量超过8.0 mL时，在不加热的情况下，蔗糖铁已能完全消解，测试溶液呈透明的淡亮黄色，能够满足需要，实验中选择10.0 mL盐酸加入量。

2.3.2 二价铁/三价铁完全转化条件的考察 蔗糖铁注射液中的铁主要是三价铁，但是由于蔗糖铁复合物化学合成过程的高温和强碱性反应条件，其中一部分会转化成二价铁；测试过程，加入的氧化剂是将二价铁氧化成三价铁，使之与络合剂按照既定比例形成稳定的络合物。此过程中加入过氧化氢的量直接影响二价铁是否能够完全转变成三价铁，是影响测试准确度的重要条件之一。根据表1显示的实验结果，过氧化氢用量不应少于0.6 mL，实验中过氧化氢用量设定为1.0 mL。

表1 不同体积盐酸和过氧化氢用量试验结果

2.3.3 指示剂显色灵敏条件考察 由表2可知，pH值在1.9～2.8之间，反应物易形成稳定的络合物，指示剂指示终点显色灵敏，本实验溶液pH优选的范围为2.2～2.5。同时，Tiron指示剂用量在2.0 mL以上（即2.5 mL）时，颜色变化明显，易于判断，结果稳定。

表2 不同pH值或指示剂用量时的试验结果（批号:110101）

2.3.4 优化后的络合滴定反应条件 用内容量移液管精密量取本品3 mL，置500 mL具塞锥形瓶中，用少量的水冲洗移液管，洗液并入锥形瓶，加盐酸10 mL，振摇至溶液透明，呈淡黄色，加过氧化氢溶液1 mL，水100 mL和冰醋酸10 mL，振摇混匀，用氢氧化钠溶液调节pH值至2.2～2.5，加Tiron指示液 [取4,5-二羟基苯-1,3-二磺酸钠一水合物2.0 g，用水稀释至100 mL]2.5 mL，用乙二胺四醋酸二钠滴定液（0.05 mol·L-1）滴定至溶液显纯黄色。每1 mL乙二胺四醋酸二钠滴定液 （0.05 mol·L-1）相当于2.7925 mg的 Fe。

2.3.5 络合滴定法的分析方法学验证

空白试验:按照蔗糖铁注射液的蔗糖含量配制相同浓度的蔗糖空白溶液，进行试验。结果表明:样品中其他成分不干扰样品中铁含量的测定。

离子干扰试验:称取氯化钙适量，加入少量水溶解，按照空白溶液的配制方法配制样品，进行试验。实验结果表明:钙离子不干扰样品中铁含量测定。

精密度试验:重复性（一人在一日内连续测定同一批号样品6份，铁含量平均值为98.6%，相对标准偏差RSD为0.07%）；中间精密度（不同日不同人按测试方法测定同一批号样品各3份，铁含量平均值为98.7%，相对标准偏差RSD为0.09%）。

准确度试验:取已知铁含量的蔗糖铁注射液9份，分别加入十二水硫酸铁铵，制成铁含量分别为标示量80%、100%、120%的样品溶液各3份，按测试方法进行测定，计算铁加样回收率，见表3。

2.3.6 三种方法测定铁含量结果比较 见表4。

表3 铁含量准确度试验结果（批号:110101）

表4 三种方法测定铁含量的结果比较

3 讨 论

由表4可知:氧化还原滴定法测得的蔗糖铁注射液铁含量较原子吸收法测定值约高8%。我们初步分析原子吸收法虽为美国药典给出的蔗糖铁注射液铁含量测定方法，但仍具有其自身缺点，如:该方法是一种微量的仪器分析方法，方法操作比较繁琐，实验过程可能引入的误差较大，同时测试设备投资较大，测试成本较高。

氧化还原滴定测试中，有一些条件不易控制，比如:“加热至溶液微沸”、“滴加高锰酸钾试液，至溶液恰显粉红色并持续5 s”等；测试体系有一定的底色，近终点时，淀粉指示液与碘产生的蓝色褪去不容易把握。这些都可能影响测定结果。而络合滴定法测定蔗糖铁注射液铁含量，其终点颜色突变明显，稍过量的乙二胺四乙酸二钠滴定液就会使溶液的颜色由浅绿色变为纯黄色，易于判断，灵敏度高；同时在一定的酸性条件下，铁离子与乙二胺四乙酸二钠形成稳定的化合物，不易受其它离子的干扰；该方法专属性、精密度、准确度均符合要求，是目前研究范围内测定蔗糖铁注射液铁含量较经济、快速、准确可靠的测定方法，能够有效的控制产品的铁含量，该方法已获得国家食品药品监督管理局批准[5]。

[1]FDA Drug Application Number:21-135.

[2]Kudasheva DS,Lai J,Ulman A，et al.Structure of carbohydrate-bound polynuclear iron oxyhydroxide nanoparticles in parenteralformulations [J].J Inorg Biochem,2004,98(11):1757-69.

[3]Geisser P,Baer M,Schaub E.Structure/histotoxicity relationship of parenteral iron preparations[J]. Arzneimittelforschung,1992,42(12):1439-52.

[4]Iron Sucrose Injection Monograph,USP32-NF27[M].P2690.

[5]蔗糖铁注射液质量标准（YBH02012010）[S].