黄虎胶囊质量标准研究

冯建安 ，谢守德，李 希，易晓霞 ，唐晓莹

(1.四川省中医药科学院中医研究所，四川 成都 610031; 2.成都中医药大学药学院，四川 成都 610075)

黄虎胶囊由虎杖、黄连、山豆根、龙胆草、甘草等组方，具有清利湿热、解毒止痛、散瘀保肝的功效，主治病毒性乙型肝炎中肝胆湿热夹瘀型。笔者对该制剂进行了质量标准研究，现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent1100型高效液相色谱仪，VWD紫外检测器(美国Agilent公司);超声波提取器(中船七院七二六所);BP211D型十万分子一电子天平(德国Sartorius公司);艾科蒲实验室分析型纯化水机(颐洋企业发展有限公司);玻璃点样毛细管(华西医科大学仪器制造厂);层析缸100 mm×200 mm(上海信宜仪器厂);939薄层自动铺板器(重庆贝可得公司)。硅胶G(青岛海洋化工集团);大黄素对照品(含量测定用，批号为110756－200110)、大黄素甲醚对照品(含量测定用，批号为110758－200408)、氧化苦参碱对照品(含量测定用，批号为110780－200506)、苦参碱对照品(含量测定用，批号为 110805－200507)、盐酸小檗碱(含量测定用，批号为110713－200208)、龙胆苦苷对照品(批号为 110770－200510)、虎杖对照药材(批号为120980－200002)、山豆根对照药材(批号为120913－200407)，黄连对照药材(批号为120913－200407)均由中国药品生物制品检定所提供。试剂均为分析纯或色谱纯，超纯水。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

虎杖:取胶囊内容物2 g，加甲醇50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加2.5 moL/L硫酸溶液10 mL，水浴加热30 min，放冷，用三氯甲烷振摇提取2次，每次10 mL，全并三氯甲烷液，蒸干，残渣加三氯甲烷2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取虎杖对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。再取大黄素对照品、大黄素甲醚对照品，加甲醇制成每1 mL各含1 mg的混合溶液，作为对照品溶液。吸取上述5种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(30～60℃)－甲酸乙酯－甲酸(15∶5∶1)的上层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，置氨蒸气中熏后，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的红色斑点，阴性对照品溶液无干扰(图1)。

山豆根:取胶囊内容物2 g，加三氯甲烷30 mL，浓氨试液1 mL，振摇30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取山豆根对照药材0.5 g，加三氯甲烷 10 mL，浓氨试液 0.2 mL，振摇 15 min，滤过，滤液蒸干，残渣加三氯甲烷0.5 mL使溶解，作为对照药材溶液。再取氧化苦参碱对照品、苦参碱对照品，分别加三氯甲烷制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL、对照药材溶液和对照品溶液各5 μL，分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－浓氨试液(4∶1∶0.1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液。供试品溶液色谱中，在与对照药材和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰(图2)。

图1 虎杖薄层色谱图

图2 山豆根薄层色谱图

黄连:取胶囊内容物2 g，加甲醇50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取黄连对照药材50 mg，同法制成对照药材溶液。再取盐酸小檗碱对照品，加甲醇制成每1 mL含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各10 μL、对照药材溶液和对照品溶液各1 μL分别点于同一以羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯－醋酸乙酯－异丙醇－甲醇－ 水(6∶3 ∶1.5∶1.5∶0.3)为展开剂，置氨蒸气预平衡 20 min的展开缸内，展开，取出，晾干，置紫外光灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱和对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液无干扰(图3)。

龙胆草[1]:取胶囊内容物2 g，加甲醇50 mL，超声处理15 min，滤过，滤液浓缩至干，残渣加甲醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。同法制备阴性对照品溶液。另取龙胆苦苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以乙酸乙酯－甲醇－水(20∶2∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯(254 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰(图4)。

图3 黄连薄层色谱图

图4 龙胆草薄层色谱图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件[2－4]

色谱柱:Agilent Eclipse XDB－C18柱(150 mm ×4.6 mm，5 μm);保护柱:Agilent Zorbax xdb－C18柱(4 mm ×4 mm，5 μm);流动相:甲醇－0.1% 磷酸(80 ∶20);流速:1.0 mL/min;柱温:30 ℃;检测波长:254 nm。

2.2.2 溶液制备

精密称取以五氧化二磷为干燥剂减压干燥24 h的大黄素对照品10.92 mg，置50 mL容量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀即得质量浓度为0.2184 g/L的对照品溶液。取胶囊内容物约0.5 g，精密称定，精密加入三氯甲烷50 mL和2.5 moL/L硫酸溶液20 mL，称定质量，置80℃水浴中分别加热回流2 h，冷却至室温。再称定质量，加三氯甲烷补足减失的质量，摇匀。分取三氯甲烷液，精密量取4 mL，蒸干，残渣加甲醇使溶解，转移至10 mL量瓶中，加甲醇稀释至刻度，微孔滤膜(0.45 μm)滤过，作为供试品溶液。取阴性样品0.5 g，按供试品溶液的制备项下方法同法制成阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

系统适用性试验:分别精密吸取2.2.2项下3种溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪测定。结果大黄素保留时间为4.7 min，阴性对照品溶液无干扰(见图5)。

图5 高效液相色谱图

线性关系考察:分别精密量取对照品溶液1，2，3，4，5 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，精密吸取10 μL注入高效液相色谱仪测定。以峰面积 A对质量浓度 C(μg/mL)进行线性回归，得回归方程 A=4076.08 X－125.5481(r=0.9999)。结果表明，大黄素质量浓度在21.84～109.20μg/mL范围内与峰面积呈良好线性关系。

精密度试验:精密量取对照品溶液2 mL，置10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，连续进样10 μL，测定6次，记录色谱图，结果大黄素平均峰面积为2123.644，RSD为0.54%(n=6)，表明仪器精密度良好。

重现性试验:取同一批胶囊(批号为080301)内容物0.5 g，共6份，精密称定，按供试品溶液制备方法制备，进样10 μL，测定大黄素峰面积。结果的 RSD为2.44%(n=6)，表明方法重现性良好。

稳定性试验:精密吸取同一供试品溶液10 μL，分别于0，2，4，8，24 h时进样。结果峰面积的 RSD为 0.74%(n=5)，表明供试品溶液在24 h内基本稳定。

加样回收试验:取已知含量的样品(批号为080301)9份，分别加入大黄素对照品溶液(0.2184 g/L)适量，按成品供试品溶液的制备方法及色谱条件进行测定，结果见表1。

表1 大黄素加样回收试验结果(n=9)

2.3 样品含量测定

取3个批号的样品各2份，依法制备供试品溶液，分别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各10 μL进样，测定峰面积，计算大黄素的含量。结果批号为080801、080802、080803的样品中，大黄素平均含分量别为 5.93，5.87，6.16 mg/粒(n=2)。

3 讨论

虎杖、黄连、山豆根、龙胆草的薄层色谱鉴别试验中曾分别用正己烷－乙酸乙脂－甲酸(30∶10∶0.5)[5]、正丁醇－冰醋酸－水(7∶1∶2)、甲苯－丙酮－甲醇－浓氨试液(5∶5∶3∶0.2)、三氯甲烷－乙醇－水(10∶3∶1)下层溶液[1]为展开剂展开，结果也能对虎杖、黄连、山豆根、龙胆草进行鉴别，但正文中展开剂效果更好，因此选用正文中展开剂对黄虎胶囊进行质量控制。

含量测定中供试品溶液的制备对水解时间进行了考察，最终确定了水解时间2 h。此外还使用不同品牌色谱柱进行了测定方法的耐用性试验，结果含量测定结果相近，表明所建立的含量测定方法具有较好的耐用性。

[1]刘训红，王玉玺，房克慧，等.中药材薄层色谱鉴别[M].天津:天津科学技术出版社，1990:162.

[2]莫可丰，覃洁萍.HPLC法测定清火片中大黄素和大黄酚的含量[J].中国中医药信息杂志，2004，11(1):51.

[3]唐小波，吴健儿，赵绪元.高效液相色谱法测定虎杖中大黄素的含量[J].基层中药杂志，2000，14(4):17.

[4]刘光喜.复方虎杖驱毒胶囊中大黄素的含量测定研究[J].湖南中医杂志，2003，19(3):57.

[5]国家药典委员会.中华人民共和国药典中药薄层彩色图谱集[M].广州:广东科学技术出版社，1993:22.