降喘固本丸的鉴别研究

王 静，赵 兴，陶福芳，陈 萍，力 荔

(1.陕西中医学院，陕西 咸阳 712046; 2.陕西省新药审评中心，陕西 西安 710065; 3.陕西省中医药研究院，陕西 西安 710003)

降喘固本丸是陕西省中医医院的院内制剂，由党参、黄芪、枳壳、五味子、紫苏子、浙贝母等中药配制而成，具有补肺益肾、健脾化痰、降气平喘功效，用于慢性阻塞型肺疾病的治疗。为了有效控制本品的质量，笔者采用薄层色谱法对方中党参、黄芪、枳壳进行定性鉴别研究，并对方中的紫苏子、五味子、浙贝母进行了显微鉴别研究。

1 仪器与试药

KQ－250DE型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);PB1502－S型电子天平(美国梅特勒－托利多公司);ZF－C型三用紫外分析仪(上海康禾光电仪器有限公司);电热板(德国labtech公司);leica牌DM750型电子显微镜(西安中显光电科技有限公司)。党参对照药材(批号为20080710)、黄芪甲苷对照品(批号为0781－9908)、柚皮苷对照品(批号为110722－200309)均由中国药品生物制品检定所提供。硅胶G(青岛海洋化工有限公司);中性氧化铝(国药集团化学股份有限公司);甲醇、石油醚、乙酸乙酯等试剂均为分析纯。降喘固本丸(由陕西省中医医院制剂中心提供，批号为 20100326，20100612，20100614)。

2 质量控制

2.1 性状

本品为褐色水丸，味微苦。

2.2 显微鉴别[1－3]

将本品粉碎成细粉，按[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅡC]的显微鉴别法项下要求切片。结果显微特征依次为南五味子、浙贝母和紫苏子。种皮内层石细胞呈淡黄色或淡黄棕色，表面观呈多角形，壁较厚，胞腔含深棕色物。淀粉粒卵圆形，直径35～48 μm，脐点点状、八字状或马蹄状，位于较小端，层纹细密。内果皮(异型)石细胞成片，黄色或棕黄色;顶面观多角形，界限不分明，胞腔呈心状;表面观类椭圆形，壁具细致的雕花钩纹状增厚。石细胞分枝状，壁厚，层纹明显(见图1)。

2.3 薄层色谱鉴别

2.3.1 黄芪

取本品20 g，研细，加甲醇80 mL，加热回流1 h，滤过，蒸干甲醇，残渣加水40 mL使溶解，用水饱和的正丁醇萃取2次，每次20 mL，合并正丁醇溶液，再用氨试液洗2次，每次20 mL，分取正丁醇溶液，加于中性氧化铝柱(100～120目，5 g，内径10～15 mm)上，用40%甲醇100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺黄芪阴性样品，同法制成阴性对照品溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－水(13∶7∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应的位置上，日光下显相同的棕褐色斑点，紫外灯(365 nm)下显相同的橙黄色荧光斑点，且阴性无干扰。见图2。

图1 降喘固本丸的显微鉴别图

图2 黄芪的薄层色谱图

2.3.2 党参

取本品粉末4 g，加甲醇50 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水15 mL使溶解，通过D101型大孔树脂柱(内径为1.5 cm，柱高为 10 cm，4 g)，加水 20 mL 洗脱，弃去水液，再用 50%乙醇50 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按处方比例，取不含党参的药材，照本品制备工艺和供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。取党参对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－冰醋酸－水(7∶1∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，在80℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点或荧光斑点，且阴性无干扰。见图3。

2.3.3 枳壳[4－5]

取本品粉末4 g，加石油醚(30～60℃)50 mL回流提取1 h，弃去石油醚(脱酯除杂)，药渣挥干，加甲醇50 mL，再加热回流2 h，滤过，提取液蒸干，残渣加70%乙醇(调pH至8)4 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺枳壳阴性样品2 g，同法制成阴性对照品溶液。另取柚皮苷对照品，加甲醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿－甲醇－水(13∶6∶2)的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%三氯化铝乙醇溶液，置紫外灯(365 nm)下检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，且双阴性无干扰。见图4。

2.3.4 白术

取本品粉末4 g，加正己烷30 mL，超声处理30 min，滤过，滤液浓缩至2 mL作为供试品溶液。按处方比例，取不含白术的药材，照本品制备工艺和供试品溶液的制备方法制成阴性对照品溶液。另取白术对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，分别吸取上述3种溶液各10μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(50∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，但阴性对照有干扰，故不列入标准正文中。见图5。

图3 党参的薄层色谱图

图4 枳壳的薄层色谱图

图5 白术的薄层色谱图

3 讨论

方中因有部分药材以生药原粉入药，故可采用显微鉴别方法，选择专属性强、易于观察的药材显微鉴别点作为质量控制标准。

在黄芪薄层色谱鉴别的供试品处理中，未用氨试液萃取时，杂质多，斑点分离不清晰;加用氨试液萃取后，斑点分离清晰，方法灵敏度高。薄层色谱法鉴别本品中党参、黄芪、枳壳的结果表明，供试品与对照品(对照药材)所显斑点一致，阴性均无干扰，该法专属性强，且多次重复效果较好，可作为该制剂的质量控制方法。

本制剂为医院制剂，由于经费有限和时间有限，暂时没有做含量测定项目，还有待进一步研究。

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