高效液相色谱法测定芍黄通便汤中芍药苷含量

韩 平，胡 敏，曹 阳，刘 燕

(1.四川省南充市中心医院中药剂科，四川 南充 637000; 2.四川省南充市食品药品检验所，四川 南充 637000)

芍黄通便汤为我院自制品种，由白芍、大黄、芒硝、决明子等8味中药组方，临床用作肠道准备用药和治疗各种原因引起的便秘，用于治疗晚期肿瘤患者便秘，疗效好且持续时间长[1]。方中白芍为君药，故采用白芍的主要成分芍药苷作为质量控制指标，建立高效液相色谱(HPLC)法测定芍黄通便汤中芍药苷的含量，方法简便，准确，重复性好，可作为该制剂的含量测定方法。现报道如下。

1 仪器与试药

Waters高效液相色谱仪(2695泵、自动进样器、柱温箱，2487二极阵列检测器);电子天平。芍药苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为0736－9912);芍黄通便汤(批号为101121)及阴性样品均为我院自制;乙腈、磷酸为色谱纯，水为超纯水，其余试剂试药均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 色谱条件[2]

色谱柱:Phenomene C18柱 (250 mm ×4.60 mm，5 μm;流动相:乙腈－0.1%磷酸(20 ∶80);流速:1.0 mL/min;检测波长:230 nm;柱温:37 ℃;进样量:10 μL。

2.2 溶液制备

称取芍药苷对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含68.2μg的溶液，即得对照品溶液。精密量取本品2 mL，加乙醇稀释，摇匀，过滤，取滤液，定容至25 mL，即得供试品溶液。取不含白芍的阴性样品，按供试品溶液的制备方法，同法制备阴性对照品溶液。

2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2项下3种溶液各10 μL，进样测定，记录色谱图。供试品溶液色谱中，芍药苷与邻分峰达到基线分离，峰形对称，分离效果良好，且阴性样品对测定无干扰，见图1。

图1 高效液相色谱图

线性关系考察:精密量取芍药苷对照品溶液(质量浓度为68.2μg/mL)2，4，8，10，12，15，30 μL 进样，测定其峰面积，以峰面积值(Y)对进样量(X)进行回归，得标准曲线方程 Y=1.59×106X+5.05×103，r=0.9997(n=7)。结果表明，芍药苷进样量在 0.136～2.046μg范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验:精密吸取对照品溶液10 μL，连续进样6次，测定峰面积。结果的 RSD=0.92%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:取同一供试品溶液，分别在 0，2，4，6，8，12 h 时进样测定峰面积。结果的 RSD=0.9%(n=6)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验:取同一批(批号为101121)样品6份，依法制备供试品溶液，进样测定。结果芍药苷含量为1.613g/L，RSD=1.3%(n=6)，表明方法重复性好。

加样回收试验:精密量取已知含量的样品6份(质量浓度为1.613 g/L，批号为110121)，每份1 mL，分别加入对照品溶液(质量溶度为 1 g/L)，1.5，1.5，1.6，1.6，1.7，1.7 mL，按拟订的方法和色谱条件，制备加样回收溶液并注入高效液相色谱仪。结果见表1。

表1 芍药苷加样回收试验结果(n=6)

2.4 样品含量测定

取样品，按拟订的方法制备供试品溶液。分别吸取对照品溶液及供试品溶液各10 μL，注入高效液相色谱仪，按外标法(峰面积)计算含量。结果批号分别是 101121，101224，101229，110109，110126，110223 的样品中芍药苷含量分别为 1.613，1.593，1.734，1.659，1.681，1.708 g/L。

3 讨论

参照2010年版《中国药典(一部)》白芍含量测定项[2]，以乙腈－0.1%磷酸溶液(14∶86)为流动相，芍药苷的出峰时间为14 min，且峰高度比较低、峰形较钝。改用乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)为流动相，出峰时间缩短至6 min，且峰形更尖。故芍黄通便汤的芍药苷含量测定流动相最终采用乙腈－0.1%磷酸溶液(20∶80)。

[1]杨兴华，唐泽琴，陈金华，等.芍黄通便汤治疗晚期肿瘤患者便秘的效果观察[J].西部医学，2010，22(11):2112－2113.

[2]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:97.