利水消肿胶囊质量标准研究

秦 拢 ，张永锋，姬雪礼，李向军 ，李 宁

(1.石家庄以岭药业股份有限公司，河北 石家庄 050035; 2.华北制药集团新药研究开发有限责任公司，河北 石家庄 050015)

利水消肿胶囊是石家庄以岭药业股份有限公司自主研发的中药六类新药，由当归、柴胡、茯苓、泽泻等11味中药组方，具有疏肝健脾、通络利水功效，用于治疗特发性水肿。笔者进行了定性定量研究，建立了桂枝、柴胡、白芍、益母草、泽泻的薄层色谱鉴别方法及阿魏酸高效液相色谱定量方法，现报道如下。

1 仪器与试药

定量毛细管(美国Drummond);KQ－250型超声波清洗器;Agilent 1100型series高效液相色谱仪。利水消肿胶囊(石家庄以岭药业股份有限公司，批号分别为090901，090902，090903);阿魏酸对照品(批号为110773－200611)，桂皮醛对照品(批号为110710－200714)，芍药苷对照品(批号为110736－200833)，盐酸水苏碱对照品(批号为11012－200709)，柴胡对照药材(批号为120992－200705)，泽泻对照药材(批号为121081－200603)均由中国药品生物制品检定所提供;硅胶G(青岛海洋化工厂);双蒸馏水(自制)，乙腈(Fisher)为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 薄层色谱鉴别

桂枝:取本品10粒的内容物，加石油醚(60～90℃)10 mL，振摇5 min，静置，取上清液作为供试品溶液。按处方比例取缺桂枝的药材，依照制备工艺制得桂枝空白样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1 mL含1 μL的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各5～10μL、对照品溶液2 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以甲苯－乙酸乙酯－冰醋酸(92∶5∶5)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液对鉴别无干扰(图1 A)。

柴胡:取本品10粒的内容物，研细，加甲醇20 mL，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣用三氯甲烷洗涤3次，每次20 mL，弃去三氯甲烷液;再用水饱和的正丁醇振摇提取2次，每次20 mL，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按处方比例取缺柴胡的药材，依照制备工艺制得柴胡空白样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。另取柴胡对照药材1 g，加甲醇10 mL，超声处理20 min，静置，取上清液作为对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各5～10 μL、对照药材溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇－水(30∶8∶1)10℃以下放置的下层溶液为展开剂，10℃以下饱和30 min，展开，取出，晾干，喷以对二甲氨基苯甲醛－10%硫酸乙醇(5∶100)溶液，在105℃加热至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上至少显一个相同颜色的主斑点阴性对照品溶液对鉴别无干扰(图1 B)。

白芍:按处方比例取缺白芍的药材，依照制备工艺制得白芍空白样品，按柴胡供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含1 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取柴胡鉴别项下的供试品溶液及阴性对照品溶液各5～10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－甲醇(4∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液对鉴别无干扰(图1 C)。

益母草:取本品10粒的内容物，加热水30 mL溶解，脱脂棉滤过，放冷，用盐酸调节pH至1～2，通过已处理好的强酸性阳离子树脂柱(内径1.5 cm，柱高15 cm)，先用水洗脱至流出液无色，再用氨试液100 mL洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣先加乙醇2 mL再加5滴盐酸使溶解，作为供试品溶液。按处方比例取缺益母草的药材，依照制备工艺制得益母草空白样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。另取盐酸水苏碱对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各5～10 μL、对照品溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以正丁醇－盐酸－乙酸乙酯(8∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以稀碘化铋钾试液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液对鉴别无干扰(图1 D)。

泽泻:取本品10粒的内容物，研细，加甲醇20 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。按处方比例取缺泽泻的药材，依照制备工艺制得泽泻空白样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。另取泽泻对照药材1 g，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典》(一部)附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液及阴性对照品溶液各5～10 μL、对照药材溶液5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷－乙酸乙酯(5∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛硫酸溶液，热风吹至斑点显色清晰。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上显一个相同颜色的主斑点，阴性对照品溶液对鉴别无干扰(图1 E)。

图1 薄层色谱鉴别图

2.2 含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:Kromasil C18柱(250 mm ×4.6 mm，5 μm);检测波长:318 nm;流动相:乙腈－0.1%磷酸溶液(13∶87);流速:1.0 mL/min;柱温:室温;理论板数以阿魏酸峰计算不低于5000[1－3]。

2.2.2 溶液制备

取阿魏酸对照品适量，精密称定，加甲醇制成每1 mL含6μg的溶液，作为对照品溶液。取本品内容物，研细，取0.8 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 mL，密塞，称定质量，超声处理(功率250 W，频率40 KHz)30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，静置，取上清液用微孔滤膜(0.45 μm)滤过，取续滤液，即得供试品溶液。另按处方比例取缺当归的药材，依照制备工艺制得阴性样品，按供试品溶液制备法操作，即得阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验:取2.2.2项下3种溶液，按拟订的色谱条件进样测定，色谱图见图2。阴性对照品溶液对测定无干扰。

图2 高效液相色谱图

线性关系考察:精密吸取不同质量浓度的对照品溶液，注入高效液相色谱仪，以峰面积积分值为纵坐标(Y)、进样量为横坐标(X)，绘制标准曲线。得回归方程为 Y=5.77560903 X+2.4960183(r=0.9999)。结果表明阿魏酸进样量在 25.15 ～201.2 ng范围内与峰面积积分值具有良好线性关系。

精密度试验:精密吸取对照品溶液，在上述色谱条件下连续进样测定。结果峰面积的 RSD为0.16%(n=5)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:吸取同一供试品溶液，分别于 0，2，6，12，24 h时进样，测定峰面积。结果的 RSD为0.87%，表明24 h内供试品溶液稳定。

重复性试验:取同一批样品，分别取高、中、低3个样品量，每个样品量3份，按供试品溶液的制备方法制备，测定。结果含量(mg/g)平均值为0.3128，RSD为2.18%(n=9)，表明方法重现性良好。

加样回收试验:将阿魏酸按高、中、低3个量级加入，同一量级平行操作2份，按供试品溶液的制备方法处理后，依法测定，计算回收率。结果见表1。

表1 阿魏酸加样回收试验测定结果(n=6)

2.2.4 样品含量测定

按上述色谱条件，依法测定3批样品中阿魏酸的含量。结果批号分别为090901，090902，090903的样品中阿魏酸含量分别为0.2393，0.1901，0.2485 mg/g。

3 讨论

该质量标准鉴别部分，操作简单，结果斑点清晰，分离度好，专属性强。当归为方中的君药，故以阿魏酸作为含量测定指标，结果样品处理方法简便，精密度、重现性好，可以有效地控制产品的质量。

[1]国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部)[M].北京:中国医药科技出版社，2010:124.

[2]董晓烨，尹 华，周爱珍.RP－HPLC法测定骨健口服液中阿魏酸的含量[J].中国药品标准，2007，8(1):59－62.

[3]兰作平，覃树勇，吴朝荔，等.高效液相色谱法测定妇月康胶囊中阿魏酸的含量[J].中国药业，2008，17(15):40－41.