芪苈强心胶囊质量标准研究＊

李向军，许红辉，张永锋，柏艳柳，李晓燕

(河北以岭医药研究院，河北 石家庄 050035)

芪苈强心胶囊由黄芪、人参、桂枝、香加皮、陈皮等药味组方，为本单位自行研发的中药六类新药。为有效控制成品质量，笔者对方中的人参、丹参、香加皮、桂皮醛、橙皮苷进行了鉴别，并测定了制剂中黄芪甲苷的含量。现报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100 Series高效液相色谱仪;2000ES型蒸发光检测器(奥泰);Waters 2695 Separations Module、Waters 2424 ELS Detector、Milli－Q Advantage A10超纯水系统。芪苈强心胶囊(石家庄以岭药业股份有限公司，批号为100107);黄芪甲苷对照品(批号为110781－200613)、人参皂苷 Rb1对照品(批号为 110704－200921)、人参皂苷Rb2对照品(批号为111715－200802)、人参皂苷 Rf对照品(批号为111719－200703)、丹参对照药材(批号为120923－200610)、香加皮对照药材(批号为 121025－200503)、桂皮醛对照品(批号为110710－200714)、橙皮苷对照品(批号为110721－200613)均购自中国药品生物制品检定所。乙腈(Fisher，色谱纯);水为自制超纯水，其余试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 鉴别

人参:取人参皂苷Rb1对照品、人参皂苷Rb2对照品和人参皂苷Rf对照品，加甲醇制成每1 mL含0.2 mg各成分的溶液，作为对照品溶液。吸取对照品溶液和含量测定项下的供试品溶液各5～15 μL，注入液相色谱仪，记录色谱图。供试品溶液色谱中，应出现与对照品色谱峰保留时间相同的色谱峰，见图1。

图1 人参高效液相色谱图

丹参:取本品内容物2 g，加甲醇25 mL，超声处理30 min，滤过，滤液蒸干;残渣加水25 mL使溶解，滤过，滤液用盐酸调pH至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次15 mL，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺丹参阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取丹参对照药材1 g，加水30 mL回流30 min，放冷后滤过，滤液用盐酸调pH至1～2，用乙酸乙酯提取2次，每次15 mL，合并提取液，蒸干，残渣加无水乙醇2 mL使溶解，作为对照药材溶液。吸取上述溶液各3～7 μL，分别点于同一以0.4%的羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以甲苯－二氯甲烷－乙酸乙酯－甲酸(5∶5∶5∶0.8)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以2%三氯化铁溶液，热风吹至斑点显色清晰，日光下检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上至少显1个相同颜色的主斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图2 A)。

香加皮:取含量测定项下“剩余甲醇溶液蒸至约2 mL”的溶液，作为供试品溶液。取缺香加皮阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取香加皮对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各5～10 μL，对照药材溶液2～4 μL，分别点于同一以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯－冰醋酸(20∶3∶0.5)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯下于254 nm波长处检视。供试品溶液色谱中，在与对照药材溶液色谱相应位置上现显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图2 B)。

桂皮醛:取本品内容物2 g，置具塞锥形瓶中，加乙醇20 mL，密塞，浸泡20 min，振摇10 min，滤过，滤液作为供试品溶液。取缺桂枝阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取桂皮醛对照品，加乙醇制成每1 mL含1 μL的对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各 10 ～ 15 μL，对照品溶液 2 μL，分别点于同一以 0.4% 羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以石油醚(60～90℃)－乙酸乙酯(17∶3)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以二硝基苯肼乙醇试液。供试品溶液色谱中，在与对照品色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图2 C)。

橙皮苷:取香加皮鉴别项下供试品溶液蒸干，加水10 mL使溶解，用三氯甲烷萃取2次，每次15 mL，弃去三氯甲烷层;水层继续用乙酸乙酯15 mL萃取1次，将乙酸乙酯层蒸干，加甲醇1 mL使溶解，作为供试品溶液。取缺陈皮阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。另取橙皮苷对照品，加甲醇制成饱和的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法[2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB]试验，吸取供试品溶液和阴性对照品溶液各5～10 μL，对照品溶液2 μL，分别点于同一以0.4%羧甲基纤维素钠为黏合剂的硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶22∶10)，10℃以下放置的下层溶液为展开剂，4℃以下展开，取出，晾干，喷以三氯化铁试液，置紫外光灯下于365 nm波长处检视。供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的荧光斑点，阴性对照品溶液色谱则无此斑点(图2 D)。

图2 薄层色谱鉴别图

2.2 黄芪甲苷含量测定

2.2.1 色谱条件

色谱柱:菲罗门 Gemini C18柱(150 mm × 4.6 mm，5 μm)，用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;流动相:乙腈－水(30∶70);流速:1 mL/min;蒸发光检测器;柱温:30℃。理论板数按黄芪甲苷计算应不低于4000。

2.2.2 溶液制备

精密称取黄芪甲苷对照品适量，置量瓶中，加70%甲醇制成每1 mL含80μg的溶液，即得黄芪甲苷对照品溶液。取样品装量差异项下内容物，研细，取2 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加甲醇50 mL，密塞，称定质量，超声处理30 min(功率250 W，频率40 kHz)，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，摇匀，滤过，精密量取续滤液20 mL，蒸干;剩余甲醇溶液蒸至约2 mL，作为香加皮鉴别供试品溶液;残渣加3%氢氧化钠溶液20 mL使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次，每次20 mL，合并正丁醇液，用正丁醇饱和的水洗涤2次，每次25 mL，合并水洗液，水洗液用水饱和正丁醇20 mL萃取1次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用70%甲醇溶解并转移至5 mL容量瓶中，加70%甲醇稀释至刻度，摇匀，滤过，即得供试品溶液。

2.2.3 方法学考察

专属性试验考察:称取约1/10处方量的方中药材，除去黄芪，按制备工艺制得空白样品，按供试品溶液的处理方法进行处理，得阴性对照品溶液。吸取阴性对照品溶液、对照品溶液和供试品溶液，按照选定的测定条件进行检测。结果阴性无干扰，见图3。

线性关系考察:取质量浓度为79.92μg/mL的对照品溶液，分别精密吸取 10，25 ，40，60，70，80，90 μL，注入液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积积分值(lny)为纵坐标、进样量(lnx)为横坐标绘制标准曲线。结果黄芪甲苷进样量在799.2～7192.8 ng范围内与峰面积积分值呈良好线性关系，回归方程为lny=1.8627 lnx－7.0613，r=0.9999(n=7)。

图3 含量测定高效液相色谱图

精密度试验:分别精密吸取对照品溶液及同一份供试品溶液，按拟订色谱条件连续各进样5次。结果黄芪甲苷对照品的峰面积RSD为0.23%，样品中黄芪甲苷的峰面积 RSD为0.24%，表明仪器精密度良好。

稳定性试验:分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液，在0，3，6，9，12，24 h时测定色谱峰吸收值。结果在24 h内黄芪甲苷对照品和样品稳定，RSD分别为0.98%和0.85%。

重复性试验:取同批样品 9 份，分别取 1.6，2.0，2.4 g，每个取样量各制备3份供试品溶液并依法检测。结果样品中黄芪甲苷的平均含量为 1.7119 mg/g，RSD 为 3.18%。

加样回收试验:取同一批样品9份，分为3组，分别加入高、中、低质量浓度的对照品溶液50 mL，进行超声提取，测定，计算回收率。结果见表1。

表1 黄芪甲苷加样回收试验测定结果(n=9)

3 讨论

黄芪供试品溶液制备简便，含量测定时剩余的甲醇可用于香加皮、橙皮苷的鉴别，不但缩短了样品制备时间，还大量节省了试剂，降低了污染，更利于环境保护。

本方法中人参鉴别采用高效液相色谱－蒸发光散射检测法，在进行黄芪甲苷含量测定的同时进行人参鉴别，质检工作量大大降低，提高了工作效率。