美洛昔康醇质体凝胶的研制

杨羽行，刘小平

武汉理工大学化工学院制药工程系，湖北武汉 430070

美洛昔康（Meloxicam）作为一种非甾体抗炎药（NSAIDS），已广泛应用于治疗急性和慢性炎症及疼痛（风湿、类风湿性关节炎等）中，常用剂型有胶囊剂和片剂。但这些口服剂型有吸收缓慢、半衰期长、对消化道有较强刺激性等不足。因此，美洛昔康口服制剂在临床应用上有较大的限制。风湿、类风湿性关节炎属于需要长期服药的疾病，但长期服药会对肠胃有较大的负担，而外用制剂则可以避免上述的缺点。通过经皮吸收给药（TDDS），美洛昔康可以直接通过皮肤吸收进入患处的毛细血管，直接作用于病灶部位，避免对消化道刺激，同时也避免了肝脏首过效应，提高了生物利用度。由于皮肤的生理结构也可以达到药物储库的作用，在一定程度上可以达到缓释长效的作用，进一步提高药物的生物利用度，减少给药剂量和次数，降低药物不良反应。

因脂质体（liposomes）的生物膜相似性、良好的生物相容性以及毒性小等特点，在TDDS的应用研究上很受重视。目前已有相关美洛昔康脂质体的研究报告。由于受脂质体的制备方法和稳定性限制而在研究上受到一定的限制。醇质体（ethosomes）是在原脂质体基础上研究出来的一种新的特殊脂质体，含有较高浓度（大于30%）的乙醇。研究表明醇质体在渗透性和包封率上优于普通脂质体[1-2]。

本实验是以乙醇注入法制备美洛昔康醇质体，并将其制备成凝胶剂。以包封率为指标对美洛昔康醇质体的制备工艺进行优化。同时对凝胶剂的含量和稳定性等做出评价。

1 仪器与试药

1.1 仪器

Agilent 1100型高效液相色谱仪（美国Agilent公司），粒度仪（Mastersize 2000，Malvern Instruments），760 型紫外分光光度计（上海分析仪器厂），DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌器（巩义市英峪予华仪器厂），TGL-16C高速离心机（上海安亭科学仪器厂），FA2004电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）。

1.2 试药

美洛昔康原料药（武汉远城科技发展公司，批号：20100101，纯度99%），美洛昔康对照品（中国药品生物制品检定所，批号：100679-200401），卵磷脂（国药集团化学试剂有限公司），卡波姆940（武汉龙睿达化工公司，批号：20100207）。

2 方法与结果

2.1 醇质体的制备

2.1.1 含量测定（HPLC法）

2.1.1.1 色谱条件[3]色谱柱：Elite-C18柱（填料：Hypersil ODS-2，粒度：5 μm，规格：4.6 mm×250 mm）；流动相：甲醇-0.2 mol/L醋酸铵（50∶50）；流速：0.8 ml/min；检测波长：363 nm；柱温：25℃；进样量：20 μl。

2.1.1.2 专属性试验 称取适量美洛昔康标准品，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超声溶解，用缓冲溶液稀释，得美洛昔康标准品样品a；称取适量美洛昔康原料药，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超声溶解，用缓冲溶液稀释，按乙醇注入法制备得美洛昔康醇质体样品b；称取适量卵磷脂用无水乙醇溶解作有机相，用Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液作水相，制备空白醇质体得醇质体阴性对照样品c。在上述色谱条件下进样。结果表明制备过程中的其他原料不会对美洛昔康的HPLC测定造成干扰。见图1。

图1 专属性试验HPLC色谱

2.1.1.3 精密度试验 将美洛昔康标准品溶液（上述样品a）平行进样3次，得吸收峰面积的标准偏差值RSD=0.67%（n=3）。表明该HPLC法具有很好的稳定性和重现性。

2.1.1.4 标准曲线绘制 精密称取美洛昔康对照品10.0 mg，用1 ml 0.1 mol/L的NaOH溶液超声溶解，定容至10 ml。分别量取 0.25、0.50、1.00、2.00、4.00 ml，定容至 10 ml。 得到浓度为分别为 25、50、100、200、400 μg/ml的美洛昔康溶液。 计算各浓度在该色谱条件下的吸收峰面积。对吸收峰面积A与美洛昔康标准品浓度C进行线性回归，得回归方程为A=25.4465C+664.63，r=0.9989。 表明美洛昔康在 25～400 μg/ml浓度范围内呈良好的线性关系。

2.1.2 单因素考察[2-4]

根据药物性质（如美洛昔康在pH>8.0的溶液中才有较好的溶解性）、文献报道等，选取实验水浴温度（℃）、美洛昔康溶液浓度（mg/ml）、Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液 pH 值、搅拌速度（r/min）、超声时间（min）、卵磷脂的用量（g）、搅拌时间（min）7个影响因素作为对象，以乙醇注入法为制备方法，以包封率（%）为指标分别考察。结果发现水浴温度、美洛昔康溶液浓度、缓冲溶液pH值、卵磷脂的用量这4个因素对醇质体的包封率有较明显的影响；搅拌速度和搅拌时间没有明显影响。而随着超声时间的增长，包封率呈现明显下降趋势，即超声会破坏醇质体结构，导致包封率下降。

2.1.3 正交试验及结果

根据单因素考察结果，选用试验水浴温度（A）、美洛昔康溶液浓度（B）、缓冲溶液 pH 值（C）、卵磷脂的用量（D）四个因素为主要影响因素，设计正交试验。其他条件设定为搅拌速度400 r/min，搅拌时间15 min。

表1 因素水平表

表2 L9（34）试验设计表

以包封率作为考察指标，实验结果显示，美洛昔康醇质体的最佳制备工艺条件为：A2B2C2D1。即水浴温度为30℃，美洛昔康溶液浓度为0.50 mg/ml，Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液pH值为9.40，卵磷脂用量为0.075 g。

2.1.4 醇质体制备工艺

精密称取美洛昔康原药0.0500 g，用适量pH值为9.40的Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液超声溶解，定容到100 ml，得浓度为0.5 mg/ml、pH值为9.40的美洛昔康溶液，精密量取10.0 ml于25 ml烧杯中，保鲜膜密封。设定水浴温度30℃，转子转速400 r/min。精密称取卵磷脂0.075 g，溶解于6 ml的无水乙醇中。用注射器缓慢注入上述的美洛昔康溶液中，针头插入液面以下。注入完毕后，继续搅拌15 min后，0.22 μm微孔滤头滤过，得美洛昔康醇质体。

2.2 醇质体表征

2.2.1 外观粒径

制备得到的美洛昔康醇质体呈淡黄色、半透明、混悬状液体。利用激光粒度仪测试其粒径分布。结果显示，醇质体粒径呈正态分布，集中分布在8.0～22.0 μm之间，平均粒径为16.95 μm。 见图 2。

图2 美洛昔康醇质体粒径分布

2.2.2 包封率

按美洛昔康醇质体最佳制备工艺，同时制备9组醇质体。分别取适量在转速为1.0×104～1.5×104r/min下高速离心10 min，上清液用0.22 μm有机微孔滤膜过滤备用。利用HPLC法测量，计算醇质体的平均包封率为74.70%，其标准偏差值 RSD=0.87%（n=9）。

2.3 凝胶剂的制备

称取0.5g卡波姆940，甘油10ml，加入磷酸缓冲溶液5 ml，40℃水浴充分搅拌后溶胀过夜。滴加三乙醇胺调节pH至6.0～7.0。取美洛昔康醇质体混悬液8 ml，用磷酸缓冲溶液稀释。搅拌凝胶基质的同时滴加美洛昔康醇质体混悬液，再加入磷酸缓冲溶液至100 g，搅拌充分后即得美洛昔康醇质体凝胶[5-6]。

2.4 凝胶剂性状

制备得美洛昔康醇质体凝胶呈无色或淡黄色透明、黏稠、胶状。

2.4.1 含量测定

按上述制备方法，制备一批美洛昔康醇质体凝胶，分3次测定，每次精密称取10.0 g，加入甲醇适量，振摇后超声，用流动相定容。取一定量于0.22 μm有机微孔滤膜过滤，依照美洛昔康的HPLC法测定其中的含量。结果得美洛昔康含量的平均值为2.17 mg/10 g，RSD=0.73%。

2.4.2 加样回收率试验

依照含量测定的值，精密称取10.0 g美洛昔康醇质体凝胶理论含量的美洛昔康原药的80%、100%、120%量，用适量0.1 mol/L的NaOH溶液超声溶解，加入到按前述方法制备的空白醇质体凝胶中。按“2.4.1”项下测定方法测定凝胶中美洛昔康的含量。每种浓度平行测试3次。结果得美洛昔康的平均回收率为 97.65%，RSD=1.04%（n=9）。

2.5 稳定性试验

因凝胶剂中含有较多的水分，故而湿度对其影响不大。以下只考察温度和光照对美洛昔康醇质体凝胶的影响。

2.5.1 温度

制备三组美洛昔康醇质体凝胶，分别在低温（4℃冷藏）、室温以及60℃烘箱条件下存放，分别于0、5、10 d精确取样，按“2.4.1”项下测定方法测定凝胶中美洛昔康的含量。各样品中美洛昔康的测得量表明低温和室温存放的样品美洛昔康测得量变化不大，样品性状也未发生明显变化。60℃存放的样品美洛昔康测定量有减少的趋势，且样品颜色逐渐变深。提示凝胶应避高温存放。

2.5.2 光照

制备两组美洛昔康醇质体凝胶，分别在避光（不透光纸包裹）、高光照（4500 lx）条件下存放。 分别于 0、5、10 d 精确取样，按“2.4.1”项下测定方法测定凝胶中美洛昔康的含量。避光存放的样品性状未发生变化，美洛昔康测得量基本无变化。高光照下样品颜色明显变深，美洛昔康测得量明显降低。即凝胶应避光保存。

3 讨论

美洛昔康性质比较稳定，在酸性或中性溶剂中溶解性很差。本实验选用Na2CO3-NaHCO3缓冲溶液作为溶剂，可以很好地溶解美洛昔康，也可以使实验环境pH稳定在一定范围内。本实验应用乙醇注入法制备美洛昔康醇质体，所用设备简单，易于操作，重现性良好，粒径小而分布较均匀，包封率较高。由此制得的美洛昔康醇质体凝胶具有稳定性良好。

醇质体是一种含有较高浓度乙醇的新型脂质体。在经皮给药系统的应用上有很好的前景。其具有的磷脂膜结构和生物细胞具有很大的相似性和流动性，可以很好地融合或者穿透皮肤细胞。其中含有的高浓度乙醇在一定程度也上也起到促渗的作用，可以达到更好的治疗效果。其在透皮性能上的优势，有待进行后续的研究。

醇质体凝胶稳定性良好，通过皮肤的渗透和蓄积作用，可以达到一定的缓释作用，从而减少给药次数，对于长期用药带来的给药麻烦和副作用有很好地改善。

[1]李欣蔚,林庆华,卜水.经皮给药新型脂质体——醇质体[J].中国药师,2009,12(12):1726-1728.

[2]朱凡,刘小平.乌头碱醇质体的制备及抗炎镇痛作用研究[J].武汉理工大学学报,2011,33(8):30-33.

[3]陈雯.HPLC法测定美洛昔康分散片的含量[J].中国药师,2009,12(6):755-766.

[4]VaibhavDubey,Dinesh Mishra,ManojNahar,etal.Enhanced transdermal delivery of an anti-HIV agent via ethanolic liposomes[J].Nanomedicine:Nanotechnology,Biology,and Medicine,2010,6:590-596.

[5]冯淑华,李可意,张彦文,等.美洛昔康脂质体凝胶剂的研制与质量评价[J].中国现代应用药学杂志,2008,25(2):122-125.

[6]张宁,徐艳明,祁永华,等.外用凝胶剂研究进展[J].黑龙江医药,2010,23(1):92-93.