活血化瘀中药对乙酸致胃溃疡大鼠胃黏膜血流量的影响※

白建乐 刘建平 张书金

(河北省石家庄市中医院内分泌科，河北 石家庄 050051)

活血化瘀中药对乙酸致胃溃疡大鼠胃黏膜血流量的影响※

白建乐 刘建平1张书金

(河北省石家庄市中医院内分泌科，河北 石家庄 050051)

目的观察活血化瘀中药对乙酸致胃溃疡大鼠胃黏膜血流量(GMBF)的影响，并探讨其机制。方法将32只Wistar大鼠随机分为4组，即空白对照组、模型组、雷尼替丁组及活血化瘀中药组，每组各8只。模型组、雷尼替丁组及活血化瘀中药组建立乙酸致胃溃疡大鼠模型，空白对照组常规饲养。造模后第3 d，雷尼替丁组及活血化瘀中药组分别予盐酸雷尼替丁胶囊悬浮液、活血化瘀中药方0.05 mL/kg灌胃，空白对照组及模型组予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃，连续14 d。各组大鼠末次给药后，禁食24 h，测定GMBF、溃疡损伤指数、血浆内皮素(ET)及血清和胃黏膜组织一氧化氮(NO)含量。结果与空白对照组比较，模型组和雷尼替丁组GMBF明显降低(P＜0.05)，血浆ET明显升高(P＜0.05)，而活血化瘀中药组无明显变化(P＞0.05)。活血化瘀中药组GMBF、ET与模型组比较差异均有统计学意义(P＜0.05)，且改善优于雷尼替丁组(P＜0.05)。雷尼替丁组和活血化瘀中药组溃疡损伤指数均明显低于模型组(P＜0.05)。雷尼替丁组与活血化瘀中药组溃疡损伤指数比较差异无统计学意义(P＞0.05)。活血化瘀中药组血清及胃黏膜组织NO含量与空白对照组、模型组及雷尼替丁组比较均明显升高(P＜0.05)。结论活血化瘀中药通过减少大鼠血浆ET含量，增加血清及胃黏膜组织NO含量，改善GMBF，从而达到促进溃疡愈合的目的。

胃溃疡;胃黏膜;血流速度;疾病模型，动物;活血;中药疗法;一氧化氮

胃溃疡属中医学胃脘痛范畴。病因病机为气滞血瘀，胃络损伤。治宜活血化瘀。我们在临床上以此为法，采用活血化瘀中药治疗胃溃疡取得了满意疗效。本研究通过实验研究，观察活血化瘀中药对乙酸致胃溃疡大鼠胃黏膜血流量(gastric mucosal blood flow，GMBF)的影响，为临床应用提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 实验动物 健康Wistar大鼠32只，雌雄各半，体质量180～250 g，购自河北医科大学实验动物中心，动物合格证号:71043。以河北医科大学实验动物中心提供的固定平衡饲料饲养，自由饮水。

1.1.2 实验试剂及仪器 实验性乙酸(天津泛美医材有限公司)，10%甲醛溶液(由河北医科大学实验动物中心提供)，一氧化氮(NO)试剂盒(南京建成生物工程研究所，生产批号:060418)，内皮素(ET)放免药盒(解放军总医院科技开发中心放免所，生产批号:060410)，FJ－2021γ放射免疫计数器(国营二六二厂)，SLT温控酶标仪(上海微百生物科技有限公司)，血流量微机检测仪(中国合肥机械电子工业部第四七三所)，铂金电极(深圳市同奥科技有限公司)。

1.1.3 实验药物 活血化瘀中药:虎杖12 g，当归9 g，川芎9 g，白芍药 20 g，延胡索 12 g，丹参 20 g，三七(冲服)3 g，甘草5 g。以上药物均由石家庄乐仁堂药店提供，常规水煎2次，浓缩至100%，使每mL含生药1 g。盐酸雷尼替丁胶囊(江西汇仁药业有限公司，国药准字H36021340)。

1.2 实验方法

1.2.1 动物分组 将32只Wistar大鼠随机分为4组，即空白对照组、模型组、雷尼替丁组及活血化瘀中药组，每组各8只。

1.2.2 模型制备 参照文献［1］进行模型制备。模型组、雷尼替丁组及活血化瘀中药组术前禁食24 h，自由饮水。然后乙醚吸入麻醉，待麻醉生效后，将大鼠固定于手术台，腹部剃毛，常规消毒，于剑突下腹中线打开腹腔(切口长度约2 cm)，暴露胃。在胃前壁近幽门处(避开血管)，用微量注射器将乙酸0.01 mL浆膜面注入胃黏膜下层，注射后，胃壁表面立即形成一个圆形或椭圆形隆起，然后隆起变平，形成乳白色不透明区，直径约5 mm。用缝线将大网膜固定于注射区，以防穿孔。逐层缝合切口。手术严格无菌操作。空白对照组不予手术，常规饲养。

1.2.3 给药方法 造模后第3 d，雷尼替丁组予盐酸雷尼替丁胶囊悬浮液(用0.9%氯化钠注射液溶解，每mL氯化钠注射液含7.75 mg盐酸雷尼替丁胶囊)0.05 mL/kg灌胃。活血化瘀中药组予活血化瘀中药0.05 mL/kg灌胃。空白对照组及模型组分别予等容积0.9%氯化钠注射液灌胃。各组均连续灌胃14 d。

1.3 观察指标及方法

1.3.1 GMBF 各组Wistar大鼠在末次灌胃给药后，禁食24 h，自由饮水。乙醚吸入麻醉各组大鼠，经腹正中打开腹腔，暴露胃，将记录电极置于胃黏膜层，参考电极置于切口皮下，连接导线于血流量微机检测仪。予10%氢气鼻孔吸入15 min后，记录仪记录H2清除曲线［2］，根据Fick原理和 Rety方程计算，GMBF=69.3/T1/2［mL/(min·100 g)］［3］。

1.3.2 溃疡损伤指数及ET、NO含量 GMBF测定结束后，取各组大鼠股动脉血4 mL，2 mL采用硝酸还原酶法测定血清NO，另外2 mL采用放射免疫法测定血浆ET。然后，处死各组大鼠，取出胃组织，沿胃大弯剪开，用0.9%氯化钠注射液冲洗干净，将胃自然展开，滤纸汲干。用游标卡尺测量溃疡的长度和宽度，长为溃疡的最大直径，宽为与直径垂直的最宽距离，溃疡损伤指数用溃疡面积=长×宽表示。剪取含溃疡边缘约3 mm组织在内的胃溃疡组织块，称质量，每1 g胃组织加入10 mL 0.9%氯化钠注射液，研磨，混合均匀，检测胃黏膜组织NO含量。

1.4 统计学方法 采用SPSS 13.0统计学软件，计量资料用均数±标准差()表示，采用t检验。

2 结果

2.1 各组GMBF比较 见表1。

表1 各组GMBF比较mL/(min·100 g)，±s

表1 各组GMBF比较mL/(min·100 g)，±s

与空白对照组比较，*P ＜0.05;与模型组比较，△P ＜0.05;与雷尼替丁组比较，#P ＜0.05

由表1可见，模型组和雷尼替丁组GMBF与空白组对照组比较明显降低(P＜0.05)，而活血化瘀中药组无明显变化(P＞0.05)。活血化瘀中药组GMBF与模型组比较明显升高(P＜0.05)，且高于雷尼替丁组(P＜0.05)。2.2 各组溃疡损伤指数及血浆ET含量比较 见表2。

表2 各组溃疡损伤指数及血浆ET含量比较±s

表2 各组溃疡损伤指数及血浆ET含量比较±s

与空白对照组比较，*P ＜0.05;与模型组比较，△P ＜0.05;与雷尼替丁组比较，﹟P ＜0.05

组 别 n 溃疡指数(mm2) 血浆ET(pg/mL)空白对照组8－104.50 ±24.58模型组 8 4.39 ±3.51 141.19 ±21.09*雷尼替丁组 8 1.88±1.80△ 138.77±25.30*活血化瘀中药组 8 2.38±1.78△ 96.58±12.98△﹟

由表2可见，雷尼替丁组和活血化瘀中药组溃疡损伤指数均明显低于模型组(P＜0.05)。雷尼替丁组与活血化瘀中药组溃疡损伤指数比较差异无统计学意义(P＞0.05)。模型组和雷尼替丁组血浆ET与空白对照组比较明显升高(P＜0.05)，而活血化瘀中药组无明显变化(P＞0.05)。活血化瘀中药组血浆ET与模型组比较明显降低(P＞0.05)，且低于雷尼替丁组(P＜0.05)。

2.3 各组血清及胃黏膜NO含量比较 见表3。

表3 各组血清及胃黏膜组织NO含量比较μmol/L，±s

表3 各组血清及胃黏膜组织NO含量比较μmol/L，±s

与空白对照组比较，*P ＜0.05;与模型组比较，△P ＜0.05;与雷尼替丁组比较，#P ＜0.05

组 别 n 血清 胃黏膜组织空白对照组8 4.20 ±0.99 2.07 ±0.69模型组 8 4.43 ±0.83 1.84 ±0.40雷尼替丁组 8 4.61 ±1.18 1.91 ±0.50活血化瘀中药组 8 6.57 ±1.56＊△# 3.15 ±0.54＊△#

由表3可见，活血化瘀中药组血清及胃黏膜组织NO含量与空白对照组、模型组及雷尼替丁组比较均明显升高(P＜0.05)。

3 讨论

胃溃疡为临床常见疾病，其发病机制尚不明确，但普遍认为系因胃酸分泌过多使胃黏膜受损，攻击因子和保护因子失衡，从而使胃黏膜失去防御能力所致［4］。研究表明，胃黏膜的防御能力与GMBF密切相关［5］，而GMBF的维持很大程度上取决于内皮细胞释放的舒缩血管因子之间的平衡。NO及ET是内皮细胞依赖的血管舒张因子和收缩因子的主要成分，二者存在负反馈调节，他们之间的动态平衡对调节血管张力和结构重组具有重要意义［6－7］。NO为胃肠道非胆碱能非肾上腺素能神经所释放的主要抑制性递质和信使分子，能调节胃肠黏膜血流量，维持黏膜完整性和微血管屏障的正常功能，参与调节胃的酸碱分泌，促进溃疡愈合［6］。ET是一种强烈的血管张力调节因子，其通过降低胃黏膜血流量，使胃黏膜保护机制削弱而导致胃黏膜损伤［8］，还能明显增加胃血管阻力和血管灌注压，有强力致胃溃疡形成作用［9］。

本研究采用乙酸致胃溃疡大鼠模型，此方法操作简单，重复性好，所形成的溃疡大小稳定，外形与组织结果与人胃溃疡接近，可用于各种药物治疗胃溃疡的研究及修复机制的探讨［1］。雷尼替丁具有竞争性阻滞组胺与H2受体结合，抑制胃酸分泌的作用，为临床治疗胃溃疡常用的有效药物。本实验通过设立雷尼替丁组，与活血化瘀中药组比较哪种治疗方法效果更佳。

中医学认为，胃溃疡多为风、寒、湿邪内客于胃，或情志不畅，肝气郁结，导致气滞血瘀，胃络瘀阻所致。活血化瘀中药针对胃溃疡病因病机组方，方中丹参活血化瘀，养血安神;三七止血止痛，散瘀消肿;川芎活血行气;延胡索理气活血止痛;当归补血活血止痛;白芍药养血敛阴，柔肝止痛;虎杖清热解毒，活血通经;甘草缓急止痛，调和诸药。现代药理研究表明，丹参酚酸类成分为丹参抗消化性溃疡的有效成分，可通过改善黏膜上皮细胞增生和黏液分泌，抑制迷走神经兴奋而降低胃运动，增强胃黏膜的防御功能，减少黏膜皱褶形成而减轻胃黏膜损伤［9］。川芎嗪具有抗血栓形成、扩张小动脉等作用［10］。白芍药有调理胃肠蠕动功能，抑制乙酰胆碱所致的胃痉挛现象，扩张胃血管，改善局部微循环的作用，还可不同程度地降低胃泌素水平，有利于炎症的消除和溃疡面的愈合［10］。

本研究结果表明，模型组GMBF与空白对照组比较明显下降(P＜0.05)，表明模型组大鼠存在胃微循环障碍，进而形成溃疡。雷尼替丁组大鼠GMBF、血浆ET含量及血清和胃黏膜组织NO含量与模型组比较差异均无统计学意义(P＞0.05)。而活血化瘀中药组GMBF与模型组大鼠比较明显升高(P＜0.05)，溃疡损伤指数降低(P＜0.05)，这可能是通过减少血浆ET含量(P＜0.05)和增加血清及胃黏膜组织NO含量(P＜0.05)实现的，也可能是活血化瘀中药直接作用的结果。说明活血化瘀中药可以改善胃溃疡大鼠的胃微循环，从而改善受损的胃黏膜。

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Study of traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis on gastric mucosal blood flow of rat with acetic acid－ induced gastric ulcer

BAI Jianle，LIU Jianping，ZHANG Shujin.Department of Endo-crinology，Shijiazhuang Hospital of Traditional Chinese Medicine，Hebei Province，Shijiazhuang050011

ObjectiveTo observe the effect and mechanism of traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis on gastric mucosal blood flow of rat with acetic acid－ induced gastric ulcer.Methods

32 wistar rats were randomly divided into four groups，namely control group，model group，ranitidine and traditional Chinese medicine group，8 rats were in each group.Model group，ranitidine and traditional Chinese medicine group set up acetic acid－ induced gastric ulcer in rats，the control group

conventional breeding.After 3 d modeling ranitidine and traditional Chinese medicine group received ranitidine hydrochloride capsule suspension and traditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis 0.05 mL/kg orally，the control group and model group were given equal volume of 0.9%sodium chloride injection，continuous 14 d.Rats in each group after the last administration，fasted 24 h，gastric mucosal blood flow(GMBF)，ulcers damage index，plasma ET and NO levels in serum and gastric mucosa were measured.ResultsGMBF in ranitidine and model group was decreased，plasma ET was increased in comparison with that in control group(P＜0.05).But there was no significant changes in traditional Chinese medicine group on GMBF and plasma ET(P＜0.05).There was significant difference between traditional Chinese medicine group and model group on GMBF and plasma ET(P＜0.05).The improvement of GMBF and plasma ET in traditional Chinese medicine group was superior to that in ranitidine group(P＜0.05).Ulcers damage index in ranitidine and traditional Chinese medicine group was lower than that in model group(P＜0.05).There was no significant difference between ranitidine and traditional Chinese medicine group on ulcers damage index(P＞0.05).NO levels in serum and gastric mucosa in traditional Chinese medicine group was obviously increased in comparison with that in control group，model group and ranitidine group(P＜0.05).ConclusionTraditional Chinese medicine for the activating blood and dispearing stasis can improve ulcer healing by reducing ET content in rat blood plasma，increasing NO in serum and gastric mucosa and improving gastric mucosal blood flow.

Gastric ulcer;Gastric mucosa;Blood flow;Disease model;Animal;Activating blood;Therapy of traditional Chinese medicine;Nitric oxide

R－332;R322.44;R573.11;R283.661

A

1002－2619(2011)07－1058－03

※项目来源:河北省中医药管理局2006年度科研课题计划(编号:2006002)

1 河北省中医院消化科，河北 石家庄 050011

白建乐(1976—)，男，主治中医师，硕士。从事内分泌疾病诊疗工作。

2011－04－12)