穴位埋线对糖尿病大鼠脂代谢紊乱及胰岛素敏感性的影响*

罗 雄，凌湘力

（贵阳医学院附属医院中医科，贵阳 550004）

糖尿病血管病变（DA）是糖尿病（DM）致死致残的主要原因，脂代谢紊乱是其重要危险因素，而胰岛素抵抗（IR）则是致血脂异常的主要发病机制[1]。因此，探讨IR与脂代谢紊乱之间的关系，并针对两者及早进行治疗对减少DA具有十分重要的意义。笔者观察穴位埋线对DM大鼠脂代谢紊乱和胰岛素敏感性等的影响并探讨其可能机制，为临床防治DA提供依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 动物 雄性Wistar大鼠48只，2～3月龄，体质量150～200 g，贵阳医学院动物中心提供，合格证号：SCXK（黔）2002-0001。

1.1.2 试剂及仪器 四氧嘧啶（Sigma公司美国）、血浆内皮素（ET）试剂盒、胰岛素试剂盒（天津九鼎医学生物工程有限公司）、一氧化氮（NO）试剂盒（南京建成生物工程研究所），载脂蛋白A（ApoAI）、载脂蛋白 B（ApoB）、载脂蛋白 a[Lp（a）]、空腹血糖（FBG）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）、高密度脂蛋白（HDL）、氧化低密度脂蛋白（ox-LDL）（上海荣盛生物试剂厂）、全自动生化分析仪（雅培2000，日本）。

1.2 方法

1.2.1 造模及分组 随机抽出10只大鼠作为正常组，其余空腹12 h后，按120 mg/（kg·d）的剂量腹腔注射2.5%四氧嘧啶柠檬酸缓冲液，连续2 d，正常组注射同等量柠檬酸缓冲液。48 h后尾静脉取血测血糖，以血糖值连续3 d≥11.1 mmol/L[2]者为造模成功。共成模24只，采用随机数字表法随机分为模型组和埋线组，每组12只，均用高脂饲料喂养，给予正常饮水。

1.2.2 治疗方法 造模成功第2天开始治疗。参照华兴邦大鼠穴位图谱[3]，选取“胰俞”、“脾俞”、“足三里”。按照文献[4]取“4-0”号羊肠线剪成约0.3 cm的线段若干，穿入7号注射针的针尖中备用。大鼠经3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，右手持针于选定的穴位处以15°角斜向刺入，到达预定深度后缓慢将肠线推入穴位内，退出毫针，穴区用碘酒烧灼。4周埋线1次，左右交替。

1.2.3 标本采集 治疗16周后，模型组大鼠死亡5只，治疗组大鼠死亡3只。各组大鼠空腹12 h后称质量，经3%戊巴比妥钠腹腔麻醉后，右心室采血8～10 mL，取2 mL血液注入含7.5%乙二胺四乙酸二钠（EDTA·2Na）30μL和抑肽酶40μL的试管内混匀，4℃3600 r/min离心10 min分离血浆，-20℃保存待测ET；余血静置30 min后，常温下以3000 r/min离心 10 min，分别吸取血清待测 ApoAI、ApoB、Lp（a）、TG、TC、ox-LDL、HDL、NO、空腹胰岛素（FINS）、FBG。

1.2.4 指标检测 FINS、ET用放免法测定，NO用硝酸还原酶法测定，胰岛素敏感指数(ISI)采用李光伟等方法测算[5]，因其为非正态分布，分析时取其自然对数，即ISI=Ln［1/（FBG×FINS）］；ApoAI、ApoB、Lp（a）、TG、TC、HDL、ox-LDL、FBG 用全自动生化分析仪测定。

2 结果

2.1 血清 FBG、FINS、NO、血浆 ET含量及 NO/ET、ISI的比较 见表1。从表1可知，模型组较对照组血清FBG 含量显著升高（P＜0.01），说明 DM 模型成功；血清FINS、血浆ET含量显著增高（P<0.01或P<0.001），ISI、血清 NO 含量及 NO/ET 比值显著降低（P＜0.01或 P＜0.001）。经治疗后，血清 FBG、FINS 和血浆 ET均显著下降（P<0.05，P<0.01或P<0.001），NO含量及ISI、NO/ET比值则明显升高（P<0.05，P<0.01或P<0.001）。直线相关分析显示，ET与ISI呈显著负相关（r=-0.967，P<0.001 或 r=-0.986，P<0.001），NO 与ISI呈正相关（r=0.959，P<0.001）。

表1 各组血清FBG、FINS、NO、血浆ET含量及NO/ET、ISI的比较（±s）Tab.1 Comparison of serum FBG,FINS,NO,plasma ET and NO/ET,ISI between different groups（±s）

注：与模型组相比 *P<0.05，**P<0.01；△P<0.001。

组别 n FBG(mmol/L) FINS(μg/L) ISI正常组 10 5.19±0.64** 10.80±1.68** -4.00±0.15**模型组 7 18.54±0.97 16.66±1.24 -5.72±0.08埋线组 9 10.02±0.54** 14.62±1.08* -4.98±0.07**组别 n NO(μmol/L) ET(ng/L) NO/ET正常组 10 56.37±2.78△ 46.33± 9.36△ 1.26±0.26△模型组 7 28.82±3.76 119.17± 8.03 0.24±0.02埋线组 9 39.02±4.46△ 83.88±13.87△ 0.48±0.11△

表 2 各组血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量比较（±s）Tab.2 Comparison of serum TG,TC,HDL,ox-LDL,ApoAI,ApoB,Lp(a)among different groups（±s）

表 2 各组血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量比较（±s）Tab.2 Comparison of serum TG,TC,HDL,ox-LDL,ApoAI,ApoB,Lp(a)among different groups（±s）

注：与模型组相比*P<0.05，**P<0.01。

ApoAI ApoB Lp（a）(mmol/L) (mmol/L) (g/L) (g/L) (mg/L)正常组 10 1.50±0.13** 4.77±0.42** 1.59±0.05** 0.97±0.12** 187.31± 47.39**模型组 7 17.12±8.79** 19.25±5.74** 0.32±0.07** 7.21±1.87** 1319.69±352.78**埋线组 9 6.91±1.96** 8.13±0.83** 0.92±0.02** 3.16±0.35** 612.43±189.27**组别 n TG TC HDL(mmol/L)1.84±0.21**0.49±0.05**0.81±0.02**ox-LDL(μg/L)45.31±9.45**85.79±13.25**71.39±13.49**

2.2 血清 TG、TC、HDL、ox-LDL、ApoAI、ApoB、Lp(a)含量的比较 见表2。从表2可知，模型组较正常组血清 TG、TC、ox-LDL、ApoB 和 Lp（a）含量均显著升高（P<0.01），HDL、ApoAI则明显降低（P＜0.01），说明DM大鼠出现脂代谢紊乱。埋线治疗后，血清TG、TC、ox-LDL、ApoB、Lp（a）均明显下降（P<0.05，P<0.01），HDL、ApoAI含量明显上升（P＜0.05，P<0.01）。

3 讨论

研究认为，IR可能是引起脂代谢紊乱的中心环节。IR时由于激素敏感脂酶（HSL）活性增强、脂蛋白酯酶（LPL）活性降低，使TG及极低密度脂蛋白（VLDL）的合成增加而代谢缓慢，致使水平升高[6]。VLDL不断分解为LDL，且IR使LDL经受体通路代谢受阻，使血中LDL升高。高浓度的LDL灭活内皮衍生松弛因子或NO，降低其清除氧的能力，从而导致了ox-LDL水平升高[7]。IR时，高胰岛素通过激活 β-羟基－β-甲基戊二酰辅酶 A（HMG－CoA）还原酶的活性、增加肝甘油三酯酶（HTGL）的活性及使ApoAI浓度显著降低等途径，降低血浆HDL浓度及功能；IR使卵磷脂胆固醇酯酰转移酶（LCAT）活性减弱也是HDL水平降低的机制。同时，脂代谢紊乱可通过抑制胰岛素分泌、使胰岛素受体减少和活性降低、干扰胰岛素与受体结合等，使胰岛素生物效应降低，促成和加重IR[8]。

脂代谢紊乱和IR在DA的发生发展中具有重要的作用。脂代谢紊乱产生的大量游离脂肪酸（FFA）可明显抑制NO合成，从而间接导致内皮功能障碍，同时聚集在血管内皮细胞附近，使各种细胞因子的合成和表达增加，导致血管内皮损伤[9]。ox-LDL被巨噬细胞吞噬后形成泡沫细胞，滞留于血管壁上，使血管内皮细胞坏死脱落，内皮保护屏障遭到破坏；ox-LDL还与特异性抗体结合，激活补体系统产生免疫应答，提高单核巨噬细胞促凝血活性，从而促进血管病变的形成[10]。ApoAI和ApoB分别是HDL和LDL的主要载脂蛋白，ApoB被认为是最具有致动脉硬化的因子，ApoAI则是防止动脉粥样硬化的保护因子，两者影响着血浆HDL、LDL含量，调整两者至正常水平对于防治DA具有重要意义。HDL能清除脂质在血管壁内的沉积，可促进TC逆转运及防止LDL聚集于动脉壁，还通过其自身所含的对氧磷脂酶抑制LDL氧化，从而影响AS的产生和进展。高Lp（a）血症是导致动脉粥样硬化性的一个独立危险因素。IR能使内皮依赖性的舒血管反应降低或消失，并伴随缩血管反应增强以及血管平滑肌细胞增殖，导致血管内皮功能失调出现血管病变。

DA属中医“消渴病血瘀证”范畴，脾肾气阴两虚和瘀血痹阻是其主要病机。穴位埋线疗法是多种方法和效应的集中和整合，有平衡阴阳、调理脏腑、运行气血、疏通经络等作用。“肾俞”可补肾生精，“脾俞”可健脾益气，两穴埋线可调节血管内皮功能，改善微循环[4]，增强 INS 的敏感性[2]；“足三里”对循环系统有整体调节作用，能改善患者的血液流变学，3穴合用可培补脾肾、益气养阴活血。研究结果表明，治疗后的DM大鼠血浆ET、血清FBG、TG、TC、ox-LDL 、ApoB、Lp（a）均明显下降（P＜0.05，P<0.01或 P<0.001），NO、HDL、ApoAI含量及 NO/ET 比值、ISI明显上升（P<0.05，P<0.01或 P<0.001）。提示穴位埋线对DM大鼠脂质代谢紊乱和IR具有良性调整作用，机制可能是羊肠线埋入穴位内，通过神经-内分泌-体液-免疫等多系统、多途径和多靶点以提高机体各种代谢物质的活性，促进机体对葡萄糖和脂肪的利用；通过改善微循环，促进INS与受体结合，增强INS的敏感性，减轻机体的胰岛素抵抗，使LPL、LCAT的活性增高，抑制HSL、HMG-CoA还原酶及HTGL的活性，从而调节脂质代谢，以缓解脂代谢紊乱；调整NO与ET的水平，改善血管内皮功能障碍，最终达到治疗DA的目的。

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[2] 罗 雄，凌湘力.穴位埋线、中药复方对糖尿病大鼠血管内皮功能及胰岛素敏感性影响的研究[J].中华中医药杂志，2008，23（1）：489-491.

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[4] 罗 雄，凌湘力.穴位埋线对糖尿病大鼠血浆内皮素、血清一氧化氮的影响[J].甘肃中医，2007，20（3）：46－47.

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