不同产地金樱子根、阳枝总鞣质的含量测定

单于超 郭巧玲 庄银凤 田素英

1．广东省肇庆星湖制药有限公司，广东 肇庆 526000;2．广东省新兴中药学校，广东 新兴 527400;3．广东药学院中山校区，广东 中山 528458

金樱根为蔷薇科植物金樱子Rosa laevigata Michx的干燥根［1］，为民间常用药物，具有固精涩肠功效，主要用于治疗滑精、遗尿、痢疾泄泻、崩漏带下、子宫脱垂、痔疾、烫伤等症。近年来金樱根受到较广泛的应用，如妇科千金片、金鸡胶囊、广东凉茶、三金片、三金颗粒等［2］。目前金樱根用药部位较混乱，有根、地上茎、地下茎 (阳枝)总鞣质含量有所差异，各地所产良莠不一，以致于使金樱根质量不稳定。本实验对采自湖南、江西、广西、广东南雄、潮州、新兴和中山七个不同地域的金樱根、地上茎、阳枝 (产地称与金樱根药材颜色相近地上老茎为阳枝，以下同)的总鞣质含量进行测定，以便制定金樱根质量标准，也可更充分地开发利用金樱子这一药用植物。

1 主要材料与仪器

金樱根、茎药材 (购于广东省中山市同心药业有限公司，批号:20101013，经广东药学院中山校区田素英副教授鉴定为金樱子 (Rosa laevigata Michx.)的干燥根、茎);没食子酸标准品 (中国药品生物制品检定所，批号:110831－200302);干酪素 (上海润捷化学试剂有限公司，批号:20081013);钨酸钠 (天津市百世化工有限公司，20090818);钼酸钠 (天津市化学试剂四厂，20041015);硫酸锂 (天津市瑞金特化学品有限公司);丙酮 (天津市富宇精细化工有限公司);无水碳酸钠 (江苏强盛化工有限公司，20081227);盐酸 (广州化学试剂厂);磷酸 (江苏强盛化工有限公司)等。所用试剂均为分析纯。KQ－500型超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司);UV－1102型紫外－可见分光光度计 (上海天美科学仪器有限公司);HWS26电热恒温水浴锅 (上海一恒科技仪器有限公司)等。

2 试验方法与结果

2.1 制备所用溶液

2.1.1 磷钼钨酸试剂的制备 取钨酸钠100g，钼酸钠25g置圆底烧瓶中，加水700mL使溶解，加盐酸100mL，磷酸50mL，加热回流 l0h，放冷，再加硫酸锂 150g，蒸馏水50mL和溴0.2mL，煮沸除去残留的溴 (约15min，溶液由棕色渐变为黄色)，冷却，加水稀释至1000mL，滤过，即得，密封保存待用。

2.1.2 对照品溶液的制备 精密称取没食子酸标准品0．0260g，置于50mL棕色容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，精密量取5.0mL置于100mL棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得对照品溶液 (每1mL溶液中含没食子酸0．0260mg)。

2.1.3 待测样品溶液的制备 称取7个不同产地金樱根、地上茎、阳枝粉末各10g，分别置于已贴有对应标签的300mL具塞锥形瓶中，加30倍50%的丙酮于超声波清洗器超声提取30min后，滤过，用移液管分别吸取2mL滤液置已贴有对应标签的100mL棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，即得供试品溶液。

2.2 最佳测定波长的选择

分别取没食子酸对照品、金樱根、地上茎、阳枝总酚、不被干酪素吸附的多酚各2mL，分别置于20mL棕色量瓶中，各加入磷钼钨酸试液1mL，再分别加蒸馏水10mL，用29%碳酸钠溶液稀释至刻度。摇匀，放置30min。以相应的试剂为空白，在400～900nm范围内进行扫描。结果显示，没食子酸对照品在768nm处有最大吸收，其它比色液均在约768nm具有最大吸收表明没食子酸、金樱根鞣质显色后的产物有相同的吸收峰，故以768nm作为测定波长。

2.3 标准曲线的制备

精密量取对照品溶液0.5mL、1.0mL、2.0mL、3.0mL、4.0mL、5.0mL、6.0mL分别置于已贴有相应标签的20mL棕色容量瓶中，各加入磷钼钨酸试剂 (显色剂)1mL，然后分别加入蒸馏水 11.5mL、11mL、10mL、9mL、8mL、7mL、6mL。用29%碳酸钠溶液稀释 (缓冲剂，碱化溶液)至刻度，摇匀，静置30min，以相应试剂为空白，在768nm的波长处测定吸光度，以吸光度 (A)为纵坐标，浓度(C)为横坐标，绘制没食子酸吸光度－浓度标准曲线，得线性回归方程为 Y=0.1332X+0.1088，相关系数 r=0.9991，表明没食子酸在0.00065～0.0078mg·mL－1线性关系良好。

2.4 样品鞣质含量测定［3］

总酚含量测定:精密量取金樱根、地上茎、阳枝各供试品溶液1.0mL，置相对应的20mL棕色容量瓶中，按“2.3”测定各供试溶液总酚吸光度。通过标准曲线方程求出浓度，再根据稀释倍数换算即可求得金樱根总酚的含量。

不被干酪素吸附多酚含量测定:精密量取金樱根、地上茎、阳枝各供试品溶液25mL加至已经盛有干酪素0.6g的100mL具塞的锥形瓶中，塞密，至30℃水浴中恒温1h，时时振摇，取出、放冷、摇匀、过滤。精密量取滤液3.0mL置相对应的20mL棕色容量瓶中，按“2.3”测定吸光度，通过标准曲线方程求出浓度，再根据稀释倍数换算即可求得个各个产地金樱根、阳枝不被干酪素吸附多酚的含量 (结果见表1)。以下式计算鞣质含量:

鞣质含量=总酚含量－不被吸收的多酚含量

表1 不同产地金樱根、地上茎、阳枝鞣质含量的测定

2.5 方法学考察

2.5.1 精密度实验

精密吸取同一没食子酸对照品溶液2mL置20mL棕色容量瓶中，按“2.3”连续测定其吸光度A，重复5次，结果RSD为0.24%，表明该测定方法精密度良好。

2.5.2 稳定性实验

精密吸取同一没食子酸对照品溶液10mL置100mL棕色容量瓶中，按“2.3”在1h内每隔10min测定其吸光度A，结果RSD为0.36%。实验表明，标准品在1h内是稳定的，同时发现其后30min比前30min更加稳定，因此有必要进行30min的显色反应，保证结果更加准确。

2.5.3 重复性试验

分别称取同一产地 (新兴)金樱根样品5份，每份10g，按“2.1.3”法制备供试品溶液，按“2.3”吸光度测定。结果总酚RSD0.79%，不被吸附多酚2.45%，表明该方法重复性良好。

2.5.4 加样回收率实验

精密称取已知含量的金樱根 (新兴)粉末10g(6份)，按“2.1.3”法制备供试品溶液。精密称取0.0066g没食子酸标准品，置100mL棕色容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，得标准品溶液。分别移取以上样品溶液及标准品溶液各0.5mL置相对应的20mL棕色容量瓶中 (6份)，按“2.3”测定吸光度，计算回收率，结果如表2所示。

表2 回收率试验考查结果 (n=6)

3 讨论

温度过高鞣质不稳定，本次水浴温度控制在30℃。根据前期的正交实验，确定金樱根鞣质最佳提取工艺为50%的丙酮溶液，30倍溶剂用量，超声波法提取金樱根粉末(过三号筛)30min，所以本次实验采用此提取条件。

鞣质含量测定的方法主要有皮粉法、比色法、高锰酸钾法、络合滴定法、干酪素法、分光光度法等。磷钼钨酸－干酪素比色法与原来的皮粉法比较具有样品取量少、灵敏、快速、操作简便、成本低廉、方便实用、精密度高、对总鞣质专属性强等特点。但本方法中，鞣质含有的多酚羟基与磷钼钨酸试液反应生成的蓝色产物遇光不稳定，因此显色反应应该避光操作，使用棕色容器。其中，鞣质的含量与颜色的深度成正比，所含鞣质越高，颜色越深，因此，应调整好样品溶液的加入量，使最终测量时吸光度尽量落在0.2～0.7之间，保证较高的灵敏度，使结果更为准确、可靠。

当前市场有金樱根、茎混用现象。钟小清等在《金樱根药材的名实考证》中指出产地将金樱根阳枝 (产地称与金樱根药材颜色相近老茎为阳枝)作为一个副产品加以开发利用。由此看来，金樱阳枝与根应该有相近的功效，所谓的金樱茎代替金樱根混入市场也源于此。本实验选用七个不同产地的金樱根、地上茎、阳枝进行鞣质含量测定，结果发现，若以鞣质作为主要成分的临床用药，金樱子阳枝与根的鞣质含量平均相近，阳枝可替代金樱根应用于临床，而金樱子茎鞣质含量明显低于金樱根，不应混入金樱根中入药。

从测量结果还可以发现，由于地域不同，同一用药部位鞣质含量也有较大的差异，在该次实验中，各个产地金樱根鞣质含量从大到小排列为广西＞中山＞新兴＞湖南＞潮州＞江西＞南雄，且最大相差幅度为6.69%，平均含量为7.47%，考虑实验因素，金樱根鞣质最低含量不应低于8%。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典 (一部)［S］．北京:化学工业出版社，2010:附录23．

［2］刘佩沂，田素英，梅全喜．金樱根研究进展［J］．海峡药学，2010，22(1):98－100．

［3］王克英，左宏笛，杨理明．紫外分光光度法测定石榴皮中总鞣质含量［J］．贵阳中医学院学报，2007，29(6):66－67．

［4］钟小清，吕高荣，邹节明．金樱根药材的名实考证［J］．中草药，2009，40(7):1140－1143．