复方绞股蓝胶囊质量标准研究

熊野娟

(上海医药高等专科学校药学系，上海 201318)

复方绞股蓝胶囊含有绞股蓝总苷和灯盏花素，具有提高机体免疫能力、活血化瘀的功效[1]，主要用于治疗口腔黏膜白斑，而口腔黏膜白斑是国际公认最常见的口腔黏膜癌前病变。原质量标准中用紫外分光光度法进行含量测定，为提高制剂质量的可控性，笔者采用薄层色谱法对绞股蓝进行定性鉴别，采用高效液相色谱法对灯盏花素中主要成分野黄芩苷进行含量测定，现将结果报道如下。

1 仪器与试药

Agilent 1100型高效液相色谱仪，DAD检测器;AB 204－N型电子天平、AG－135型电子天平(梅特勒上海有限公司)。野黄芩苷对照品(中国药品生物制品检定所，批号为110842－200605);绞股蓝皂苷(西安小草植物科技有限责任公司，批号为XC100301);复方绞股蓝胶囊(上海第九人民医院);硅胶G(青岛海洋化工厂);乙腈、甲醇和磷酸为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 绞股蓝定性鉴别(薄层色谱法)

称取复方绞股蓝胶囊内容物1 g，加三氯甲烷40 mL，加热回流5 h，弃去滤液，药渣挥干溶剂，加水0.5 mL，搅匀湿润后，加水饱和的正丁醇10 mL，超声处理30 min，吸取上清液，加3倍量的氨试液，摇匀，放置分层，取上层液蒸干，残渣加甲醇10 mL使溶解，作为供试品溶液。取不含灯盏花素的阴性样品，同法制备阴性对照品溶液。精密称取绞股蓝皂苷对照品2 mg，置1 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，作为对照品溶液。照2010年版《中国药典(一部)》附录ⅥB薄层色谱法试验，吸取上述溶液各10 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇－水(15∶40∶20∶10)10℃以下放置分层的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。结果供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱相应位置上显相同颜色的斑点，阴性对照品溶液无干扰(图1)。

图1 薄层色谱图

2.2 野黄芩苷含量测定(高效液相色谱法)

2.2.1 色谱条件与系统适用性试验

表1 野黄芩苷加样回收试验结果(n=6)

图1 高效液相色谱图

色谱柱∶Kromasil 100－5 C18柱(150 mm×4.5 mm，5 μm);流动相∶乙腈 －0.1%磷酸(15 ∶85);检测波长∶335 nm;柱温∶35℃;流速∶1.0 mL/min;进样量∶10 μL。在此条件下，野黄芩苷与其他组分峰可达基线分离，且与相邻色谱峰分离度大于1.5，理论板数按野黄芩苷计算均在3 000以上。

2.2.2 溶液制备

精密称取野黄芩苷对照品9.005 0 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，制成每1 mL含野黄芩苷0.180 1 mg的对照品贮备液。精密量取贮备液10 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，得野黄芩苷对照品溶液。精密称取复方绞股蓝胶囊内容物40 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇适量，超声处理15 min，放冷，加甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液作为供试品溶液。取缺野黄芩苷的其余处方量药材，按所确定的制备工艺制备缺野黄芩苷的阴性样品，按供试品溶液制备方法制备缺野黄芩苷的阴性对照品溶液。

2.2.3 方法学考察

阴性干扰试验∶分别精密吸取对照品溶液、阴性对照品溶液与供试品溶液各10 μL，注入液相色谱仪，测定。结果表明，色谱行为良好，各色谱峰均达基线分离;供试品溶液色谱中，在与对照品溶液色谱峰相应的位置上检出色谱峰，而缺野黄芩苷的阴性对照品溶液色谱中无相应色谱峰，表明阴性对照品无干扰(图1)。

线性关系考察∶分别精密量取对照品贮备液 1，5，10，15，20 mL，置25 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，按2.2.1项下的条件测定，以峰面积为纵坐标、对照品质量浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程 Y=28 870.944 15X －16.489 20，r=0.999 94(n=6)。结果表明，野黄芩苷质量浓度在0.007～0.180 0 g/L范围内与峰面积线性关系良好。

精密度试验∶取同一质量浓度(0.180 1 g/L)的野黄芩苷对照品溶液10 μL，连续进样6次，按上述色谱条件测定，野黄芩苷峰面积的 RSD=0.09%(n=6)，表明仪器精密度良好。

稳定性试验∶取同一供试品溶液，在 0，2，4，6，8，10，12 h 时分别进样，结果峰面积积分值平均为2 059.577 56，RSD=1.4%(n=7)，表明供试品溶液在12 h内稳定。

重复性试验∶取同一批号的样品5份，依法制备供试品溶液并按上述色谱条件测定。结果平均峰面积为1 905.592 36，RSD=1.5%(n=5)，表明方法重复性良好。

加样回收试验∶精密称取对照品10.062 5 mg，置25 mL容量瓶中，加甲醇使溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸取20 mL，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，制成每1 mL含0.161 0 mg的溶液。称取已知含量的6份样品，精密称定，置50 mL容量瓶中，分别加入上述对照品溶液5，10，15 mL，按样品测定法测定含量，结果见表1。

2.2.4 样品含量测定

取复方绞股蓝胶囊样品适量，照2.2项下供试品溶液制备方法制备溶液，按上述色谱条件进行含量测定。结果批号为20080628，20080717，20080901的3批样品中，野黄芩苷的含量分别为7.13，7.23，7.18 mg/g，平均 7.18 mg/g，RSD 为 1.35%(n=2)。

3 讨论

对绞股蓝进行薄层色谱鉴别时，比较了三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇(20∶45∶35)、三氯甲烷 －乙酸乙酯 －甲醇 －水(3∶8∶4∶2)[2]、三氯甲烷－乙酸乙酯－甲醇 －水(15∶40∶20∶10)3种展开剂，结果只有最后1种展开剂的下层液能使绞股蓝皂苷色谱斑点与相邻色谱斑点分离，且斑点清晰。

在对野黄芩苷的含量进行测定时，考察了流动相和柱温的条件，试用乙腈 － 水(35 ∶65)[3]、乙腈 －0.1% 磷酸(25 ∶75)、乙腈 －0.1%磷酸(15∶85)3种流动相，发现只有乙腈－0.1%磷酸(15∶85)为流动相且在柱温为35℃时，野黄芩苷峰与相邻色谱峰达到有效分离，且色谱行为良好。方法学考察结果表明，高效液相色谱法重复性好，精密度和回收率都较满意，因此可作为复方绞股蓝胶囊的质量控制方法。

[1]李群峰.绞股蓝的化学成分和药理作用研究进展[J].光明中医，2009，24(12):2 396 －2 397.

[2]王瑞雪，王树华，王建辉，等.长梗绞股蓝皂苷B的分离[J].华北煤炭医学院学报，2008，10(3):340－341.

[3]张转平，王新权，胥道宝，等.HPLC法测定绞股蓝中的绞股蓝皂苷A的含量[J].西北药学杂志，2008，23(2):87 －88.