胶束电动毛细管色谱法同时测定感冒软胶囊中4种活性成分

霍 鹏， 黄丽涵， 朱平川， 徐远金*

（1.广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西南宁530004；2.广西大学化学化工学院，广西南宁 530004）

胶束电动毛细管色谱法同时测定感冒软胶囊中4种活性成分

霍 鹏1，2， 黄丽涵1， 朱平川1， 徐远金1，2*

（1.广西大学广西亚热带生物资源保护利用重点实验室，广西南宁530004；2.广西大学化学化工学院，广西南宁 530004）

目的 建立中药复方制剂感冒软胶囊（羌活、麻黄、桂枝、葛根、黄芩、川芎、防风等）中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素及黄芩苷4种活性成分同时测定的胶束电动毛细管色谱法。方法 以甲醇提取样品，电泳缓冲液为10 mmol/L磷酸氢二钠-20 mmol/L硼酸（pH 8.0），内含20 mmol/L十二烷基硫酸钠（SDS）及体积分数分别为27%（v/v）异丙醇和18%（v/v）乙腈作有机改性剂，采用75 μm（i.d）×60（ef 50）cm的未涂层弹性石英毛细管柱，0.5 psi（进样时间6 s）压力进样，分离电压30 kV，紫外检测波长214 nm，温度25℃。结果 4种活性成分在23 min内获得基线分离，盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷的线性范围分别为 1.5 ～200 μg/mL（r=0.999 4）、2.4 ～150 μg/mL（r=0.999 8）、1.8 ～120 μg/mL（r=0.999 1），4.5 ～300 μg/mL（r=0.999 1），检出限分别为 0.50、0.80、0.60、1.5 μg/mL（S/N=3）。样品加标回收率在91.0% ～109%之间，相对标准偏差均小于3.2%。结论 本法简便、快速，具良好的精密度和回收率，已成功用于实际样品的分析。

胶束电动毛细管色谱；感冒软胶囊；盐酸麻黄碱；盐酸伪麻黄碱；葛根素；黄芩苷

感冒软胶囊为常用中成药，由羌活、麻黄、桂枝、葛根、黄芩、川芎、防风等十四味中药材经提取等工艺制成，具有散风解热之功效，用于外感风寒引起的头痛身热、鼻塞流涕、恶寒无汗、骨节酸痛、咽喉肿痛等症，质量标准收载于《卫生部药品标准·中药成方制剂》第六册［1］。其中麻黄中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱，葛根中葛根素及黄芩中黄芩苷为感冒软胶囊中的活性成分。文献报道了HPLC测定感冒软胶囊中葛根素［2-3］、黄芩苷［4-5］和用薄层色谱法测定该药中盐酸麻黄碱［6］，采用毛细管电泳法测定盐酸麻黄碱 和 盐 酸 伪 麻 黄碱［7］、葛根 素［8-9］或 黄 芩苷［10-12］亦有报道，韩杰等［13］也采用 HPLC 法测定了感冒软胶囊中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素、黄芩苷4种活性成分，但因生物碱类和黄酮类的色谱行为差别较大而未能实现在同一流动相下进行4种成分的同时分离检测。为此，本实验建立了胶束电动毛细管色谱法同时测定感冒软胶囊中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素、黄芩苷4种活性成分的分析方法。方法准确，操作方便，可用于该制剂的质量控制。

1 仪器与试药

P/ACETMMDQ毛细管电泳仪带二极管阵列检测器（美国Beckman公司）；未涂层弹性石英毛细管（75 μm×60 cm，有效长度50 cm）（河北永年锐沣色谱器件有限公司）；Orion 720A型酸度计/离子计（美国Thermo公司）；Synthesis A10TM超纯水系统（美国Millipore公司）；ME 215S电子天平（德国Sartorius公司）。

盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷对照品购自中国药品生物制品检定所；感冒软胶囊（洛阳君山制药有限公司，批号：091202、100201）；甲醇、异丙醇和乙腈为色谱纯，其他试剂均为分析纯。

2 方法与结果

2.1 电泳条件 以20 mmol/L SDS-10 mmol/L磷酸氢二钠-20 mmol/L硼酸（pH=8.0），内含体积分数分别为27%（v/v）异丙醇和18%（v/v）乙腈为电泳缓冲液，未涂层弹性石英毛细管（75 μm×60 cm）为分离通道，压力进样（0.5 psi×6 s），分离电压30 kV，分离温度25℃，检测波长214 nm。所有溶液在使用前均用0.45 μm滤膜过滤，并超声脱气。毛细管每天使用前，分别用0.1 mol/LNaOH、超纯水和缓冲液各冲洗10 min。

2.2 对照品溶液的配制 取盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷对照品各约10 mg，精密称定，分别置于10 mL量瓶中，用甲醇溶解并定容，配成1.00 mg/mL的对照品贮备液，密封于4℃下冰箱中保存，实验时用80%甲醇稀释至所需浓度。

2.3 样品溶液的配制 取数粒胶囊样品的内容物，混匀，取约1.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入20 mL甲醇超声提取60 min后，取出，放冷，以4 000 r/min，－4℃离心15 min，吸出上清液至25 mL量瓶中，残渣用甲醇洗涤后重新提取一次，合并上层清液，用甲醇定容，摇匀，经0.45 μm微孔滤膜过滤，备用。

2.4 线性关系与检出限 取各对照品贮备液，分别配制成不同质量浓度的系列混合溶液，于优化后的条件下分别进样测定，重复3次，以峰面积平均值（Y）对对照品混合液中4种活性成分的质量浓度（X，μg/mL）进行回归分析，得到回归方程、相关系数和线性范围，以信噪比等于3为标准，测得4种活性成分的检出限。结果见表1。

表1 4种成分的线性关系及检出限Tab.1 Regression equation and detection limit of four compounds

2.5 精密度试验 取同一感冒软胶囊样品溶液，按2.3项下方法制备，重复进样测定5次，记录盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷的峰面积，得RSD 分别为 1.7%、2.3%、0.43%、0.17%。

2.6 稳定性试验 取同一批次样品，按2.3项下方法制备样品溶液，分别于 0、2、4、6、8 h 时进样测定，结果RSD均小于1.4%，表明样品溶液在8 h内稳定，结果见表2。

表2 稳定性试验Tab.2 Stability test

2.7 重复性试验 取同批样品5份，按2.3项下方法制备，进样测定，测得盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷的平均质量分数分别为1.14 mg/g、0.559 mg/g、0.467 mg/g、0.651 mg/g，RSD 分别为 1.9%、1.5%、1.3%、2.0%，表明分析方法的重复性良好。

2.8 加标回收率试验 取已测定盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱、葛根素和黄芩苷的同批样品共9份，3份为一组，按低、中、高3个质量浓度分别加入对照品溶液，按2.3项下方法制备，进样测定，计算4种活性成分的平均回收率和RSD，结果见表3。

2.9 样品测定 分别精密吸取不同批号样品各5份，按2.3项下方法制备样品溶液，分别进样测定，代入回归方程计算得到样品中4种活性成分质量分数，结果见表4。对照品及样品的电泳谱图见图1。

表3 样品加标回收率（n=3）Tab.3 Recoveries of four compounds in samples（n=3）

表4 样品测定结果（n=5）Tab.4 Results of sample analysis（n=5）

图1 对照品（A）及样品（B）的电泳谱图Fig.1 The electropherograms of standard（A）and sample（B）

3 讨论

3.1 电泳分离条件的优化

3.1.1 缓冲溶液中磷酸盐质量浓度对分离的影响实验考察了Na2HPO4质量浓度在5～25 mmol/L范围内对分离的影响，质量浓度较小时，谱峰变宽，迁移时间短，当Na2HPO4质量浓度低于5 mmol/L时，盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱分离度很小，未达基线分离。当质量浓度较大时，减弱了溶质间的相互作用，降低了样品扩散，使谱峰变窄，分离度增大，迁移时间增加，当 Na2HPO4质量浓度高于25 mmol/L时，各峰的迁移时间较长，基线噪音增加。当Na2HPO4质量浓度为10 mmol/L时，各物质间分离度最好，迁移时间也相对较短。

3.1.2 SDS质量浓度对分离的影响 在缓冲溶液中加入SDS，可使谱峰变窄，改善分离度，在胶束电动毛细管色谱模式下比在毛细管区带电泳模式下分离效果更好。实验结果表明，SDS质量浓度太低时，各成分间无法分离。随着SDS质量浓度增加，分析物和胶束体结合的机会增多，从而延长了迁移时间，同时也增加了分离度。综合考虑分离度和迁移时间，选择SDS的质量浓度为20 mmol/L。

3.1.3 缓冲溶液中硼酸质量浓度对分离的影响 实验考察了硼酸质量浓度在5～25 mmol/L范围内对各峰分离度的影响，硼酸质量浓度过低或过高时都会降低盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱两峰之间的分离度，且4种成分的峰形也会随之变差。经反复考察，选择硼酸质量浓度为20 mmol/L。

3.1.4 缓冲溶液pH值对分离的影响 实验考察了pH从6到10范围内变化对各峰的影响，当pH小于6时，盐酸麻黄碱与盐酸伪麻黄碱不能实现完全分离，pH大于10后，各成分峰形变差，且迁移时间随pH值的升高而延长。实验证明当pH=8.0时最佳，4种活性成分都已达到基线分离。

3.1.5 有机改性剂的种类和质量分数对分离的影响 有机改性剂可通过改变缓冲体系中水相的特性，影响SDS胶束的结构，增加分析物的溶解度而提高分离度。待测成分为疏水性质，加入有机改性剂，可防止其沉淀析出，使测定顺利进行。我们考察了不同质量分数的乙腈和异丙醇（均为0%、5%、10%、15%、20%、25%、30%）对4种活性成分迁移时间和分离度的影响。发现，当缓冲液中只含一种有机改性剂时，盐酸麻黄碱和盐酸伪麻黄碱完全重叠。随着乙腈和异丙醇质量分数的增加，迁移时间逐渐延长，分离度逐渐增大，当缓冲溶液中乙腈质量分数为18%、异丙醇质量分数为27%时，4种活性成分可获得较好的分离度，灵敏度高。

3.2 分离电压对分离的影响 考察了15～30 kV范围内分离电压对结果的影响。随着分离电压的升高，电渗流速度加快，样品的迁移时间明显缩短，峰形尖锐。当分离电压达到30 kV时，4种活性成分能得到快速而有效的分离，未存在重现性差的问题。因此，选择分离电压为30 kV。

3.3 进样时间对分离的影响 固定0.5 psi的压力进样，在6～12 s范围内改变进样时间。发现进样时间越长，灵敏度越高。但随着进样量的增大，分离度下降，峰形变差。综合考虑，选择进样时间为6 s。

［1］中华人民共和国卫生部.卫生部药品标准·中药成方制剂：第6册［S］.1992：193.

［2］王月敏，夏素霞，王淑清.HPLC法测定感冒软胶囊中葛根素的含量［J］.中国中医药杂志，2005，3（11）：1011-1012.

［3］沙东旭，段 瑞，陈 越.高效液相色谱法测定感冒软胶囊中葛根素的含量［J］.中医药学刊，2005，23（6）：1117-1118.

［4］陈绍贵.HPLC法测定感冒软胶囊中黄芩苷的含量［J］.黑龙江医药，2006，19（6）：434-435.

［5］黄铭铸.HPLC法测定感冒软胶囊中黄芩苷的含量［J］.中国药品标准，2007，8（4）：34-36.

［6］吕 琳，朱宇明，韩 冬，等.感冒软胶囊中盐酸麻黄碱的含量测定［J］.长春中医学院学报，2005，21（3）：38.

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［8］孙立华，胡永明，邹德禄，等.高效毛细管电泳法测定葛根及其制剂脑得生片中葛根素的含量［J］.中国药学杂志，2000，35（10）：694-696.

［9］张 琦，赵 因.高效毛细管电泳法测定脑得生胶囊中葛根素含量［J］.中国中药杂志，2002，27（2）：110-113.

［10］Liu Yingmei，Sheu S J.Determination of the six major flavonoids inScutellariae Radixby micellar electrokinetic capillary electrophoresis［J］.Anal Chim Acta，1994，288（3）：221-226.

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［12］高山林，刘 蓁，朱丹妮.MEKC法和HPLC法测定黄芩多倍体中黄芩苷含量的研究［J］.中草药，2003，34（6）：511-513.

［13］韩 杰，李东辉，王 鑫.HPLC同时测定感冒软胶囊中盐酸麻黄碱、盐酸伪麻黄碱及葛根素、黄芩苷含量［J］.中成药，2010，32（6）：963-967.

Simultaneous determination of four effective components in Ganmao Soft Capsule by micellar electrokinetic capillary chromatography

HUO Peng1，2， HUANG Li-han1， ZHU Ping-chuan1， XU Yuan-jin1，2*
（1.Guangxi Key Laboratory of Subtropical Bioresource Conservation and Utilization，Guangxi University，Nanning 530004，China；2.College of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi University，Nanning 530004，China）

AIMTo establish a new method for simultaneously determing the contents of ephedrine hydrochloride，pseudoephedrine hydrochloride，puerarin and baicalin in Ganmao Soft Capsule（Notopterygii Rhizoma et Radix，Ephedrae Herba，Cinnamomi Ramulus，Puerariae Lobatae Radix，Scutellariae Radix，Chuanxiong Rhizoma，Saposhnikoviae Radix，etc.）by micellar electrokinetic capillary chromatography（MECC）.METHODSThe samples in preparation were extracted by methanol，20 mmol/L SDS-10 mmol/L Na2HPO4-20 mmol/L H3BO3mixture（containing 27%2-Propanol and 18%acetonitrile，pH=8.0）was selected for the running buffer.The four effective components were separated by an uncoated fused silica capillary（75 μm ×60 cm）with the detection wavelength of 214 nm，voltage of 30 kV and temperature of 25℃.RESULTSThe baseline separation of four components was achieved within 23 min.The linear ranges were 1.5-200 μg/mL，2.4-150 μg/mL，1.8-120 μg/mL，4.5-300 μg/mL for ephedrine hydrochloride，pseudoephedrine hydrochloride，puerarin and baicalin with detection limits of 0.50，0.80，0.60，1.5 μg/mL，respectively.The average recoveries of the four components were between 91.0% －109%with all relative standard deviations less than 3.2%.CONCLUSIONThe method is simple，rapid with excellent precision and high recovery and can be used for the quality control of Ganmao Soft Capsules.

micellar electrokinetic capillary chromatography（MECC）；Ganmao Soft Capsule；ephedrine hydrochloride；pseudoephedrine hydrochloride；puerarin；baicalin

R927.2

A

1001-1528（2011）07-1190-04

2010-12-14

广西自然科学基金资助项目（桂科自0832034）

霍 鹏（1984—），女，硕士生，从事色谱、质谱及其联用方法的研究。E-mail：haip0716@163.com

* 通信作者：徐远金，博士，教授。Tel：（0771）3237743，E-mail：yjxu@gxu.edu.cn