七叶皂苷钠对肠缺血/再灌注肠过氧化损伤的影响*

王艳蕾，景友玲，蔡庆艳，崔国金，张一兵，王艳伟

(1.河北联合大学基础医学院生理教研室，2.唐山钢铁公司医院药剂科，唐山 063000)

肠缺血/再灌注(ischemia/reperfusion，I/R)损伤是外科常见的组织器官损伤之一，在严重感染、创伤、休克、心肺功能不全等疾患的病理过程中起重要作用。七叶皂苷钠(sodium aescinate，SA)在临床上主要用于脑水肿、创伤或手术所致的肿胀。近年研究发现七叶皂苷钠还具有抗氧化、清除自由基、抗肿瘤等作用[1]，但其对肠I/R损伤的影响的报道尚少，本研究旨在探讨肠I/R肠过氧化损伤及七叶皂苷钠对其防护作用。

1 材料与方法

1.1 材料

24只雄性SD大鼠，体质量250～300g，本院动物中心提供。普通动物常规喂养，术前禁食12 h，自由饮水。七叶皂苷钠(山东绿叶制药有限公司，批号H20003239);超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、二胺氧化酶(DAO)、髓过氧化物酶(MPO)测试盒:南京建成生物工程研究所。

1.2 方法

1.2.1 肠I/R模型制备 腹腔注射乌拉坦(1 g/kg)麻醉，分离左颈总动脉。全身肝素化后颈总动脉插管连接压力传感器通过BL-420生物机能实验系统(成都泰盟科技有限公司)监测平均动脉压(mean arterial pressure，MAP);然后行腹部手术，分离出肠系膜上动脉(superior mesenteric artery，SMA)，在其根部用无创伤血管夹夹闭阻断该动脉血运1 h后松夹，恢复血流后观察1 h，造成肠I/R损伤模型。

1.2.2 动物分组和标本采集 将动物随机分为3组(n=8):(1)假手术组:只分离肠系膜上动脉，不行夹闭;(2)I/R组:方法见模型制备;(3)SA+I/R组:复制模型同前，于缺血前、再灌前、再灌后30min尾静脉推注七叶皂苷钠0.09 mg/100g;各组连续监测缺血前、再灌前、再灌后的动脉血压，于松夹后1 h自腹主动脉取血，同时取距回盲部2 cm以上的小肠组织10cm，一部分-70℃保存，待测相应指标;一部分冰盐水漂净，滤纸吸干，待测肠组织湿/干比值及含水率;一部分经福尔马林固定，染色，光学显微镜观察小肠组织的损伤程度。

1.2.3 肠组织湿/干比值及含水率的测定 取肠组织，吸干表面水分后称重，为湿重(W)。置 80℃恒温烤箱，干燥48 h至恒重后再称重，为干重(D)。计算肠组织湿重与干重比值(wet/dry weight ratio，W/D)和肠含水率=(湿重-干重)/湿重×100%，表示肠组织水肿形成情况，间接反映肠黏膜毛细血管的通透性。

1.2.4 检测方法 超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、二胺氧化酶(DAO)、髓过氧化物酶(MPO)的测定按照试剂盒要求进行。

1.3 统计学方法

2 结果

2.1 I/R时MAP的变化及七叶皂苷钠的影响

I/R组血压夹闭后较缺血前略有下降，再灌后明显下降，再灌前与缺血前无显著差异，但与再灌后0.5 h相比差异显著(P＜0.01)，再灌后1 h血压下降更为明显;再灌后0.5 h和1 h与Control组同时间点相比亦有显著差异(P＜0.01);给予七叶皂苷钠后，再灌后0.5 h和1 h血压较I/R组明显升高(P＜0.01)，但未达正常水平(表1)。

2.2 I/R时肠组织W/D和肠含水率的变化及七叶皂苷钠的影响

I/R组肠组织W/D及肠含水率均显著高于Control组(P＜0.01)，七叶皂苷钠能显著降低肠组织W/D及肠含水率(P均＜0.01)，且与Control组相比无显著差异(表2)。

Tab.1 Changes of MAP(kPa，，n=8)

Tab.1 Changes of MAP(kPa，，n=8)

MAP:Mean arterial pressure;BI:Before ischemia;BR:Before reperfusion;AR:After reperfusion**P＜0.01 vs I/R group;##P＜0.01 vs before reperfusion;△△ P＜0.01 vs after reperfusion 0.5 h

Group BI BR AR-0.5 h AR-1 h Control 16.39±1.06 16.83±0.72 16.79±1.05** 16.84±0.81**I/R 16.91±1.03 16.37±1.07 8.51±1.33## 5.81±1.26△△SA+I/R 16.67±0.83 16.57±0.93 13.25±1.67**## 11.69±1.75**△△

Tab.2 Changesof intestine W/D and intestine water content(，n=8)

Tab.2 Changesof intestine W/D and intestine water content(，n=8)

W/D:Wet/dry weight ratio**P＜0.01 vs I/R group

Group Intestine W/D Intestine water content(%)Control 2.54±0.21** 58.77±4.26**I/R 3.63±0.28 72.38±1.98 SA+I/R 2.67±0.31** 62.25±4.20**

2.3 I/R时血浆 SOD、MPO、DAO活性和MDA含量的变化及七叶皂苷钠的影响

I/R组血浆SOD活性降低，MPO、DAO活性及MDA含量升高，与Control组比较有显著差异(P＜0.01);七叶皂苷钠组与I/R组比较SOD活性升高，MPO、DAO活性及MDA含量降低(P＜0.01)，除DAO活性接近正常外，其他指标均未达到正常水平(P＜0.01或0.05，表3)。

Tab.3 Changes of the activity of SOD，MPO，DAO and the content of MDA in plasma(，n=8)

Tab.3 Changes of the activity of SOD，MPO，DAO and the content of MDA in plasma(，n=8)

SOD:Superoxide dismutase;MDA:Malondialdehyde;DAO:Diamine oxidase;MPO:Myeloperoxidase**P＜0.01 vs I/R group;#P＜0.05，##P＜0.01 vs control group

Group SOD(U/ml) MPO(U/ml) DAO(U/L) MDA(nmol/ml)Control 275.72±9.15** 0.122±0.015** 11.79±1.78** 1.14±0.58**I/R 177.37±10.84 0.327±0.040 19.78±4.82 4.61±1.18 SA+I/R 226.27±22.07**## 0.211±0.041**## 14.48±1.47** 1.98±0.42**#

2.4 I/R时肠组织SOD、MPO、DAO活性和MDA含量的变化及七叶皂苷钠的影响

与Control组比较，I/R组肠组织SOD、DAO活性降低，MPO活性及MDA含量升高(P＜0.01);七叶皂苷钠组肠组织SOD、DAO活性升高，MPO活性及MDA含量降低，与I/R组比较有显著差异(P＜0.01，表4)。

Tab.4 Changes of the activity of SOD，MPO，DAO and the content of MDA in intestine(，n=8)

Tab.4 Changes of the activity of SOD，MPO，DAO and the content of MDA in intestine(，n=8)

SOD:Superoxide dismutase;MDA:Malondialdehyde;DAO:Diamine oxidase;MPO:Myeloperoxidase**P＜0.01 vs I/R group;#P＜0.05，##P＜0.01 vs control group

Group SOD(U/mg pro) MPO(U/g) DAO(U/g pro) MDA(nmol/mg pro)Control 59.79±5.09** 0.378±0.033** 15.39±3.91** 2.83±0.47**I/R 38.01±3.24 3.159±0.364 7.03±0.95 7.29±0.87 SA+I/R 45.21±6.46**## 1.697±0.138**## 12.17±1.56**# 5.04±0.67**##

2.5 肠组织形态学变化

Control组肠黏膜绒毛完整，黏膜及黏膜下层无炎细胞浸润，无出血及溃疡形成;I/R组肠壁变薄，肠黏膜绒毛短细，部分绒毛上皮脱落，黏膜下层及肌层水肿，固有层有炎细胞浸润，伴出血、溃疡形成;七叶皂苷钠组肠绒毛损伤减轻。

3 讨论

肠I/R损伤发生机制复杂，其中以氧自由基的损伤为最重要的发病环节[2]，小肠是I/R损伤时最易受累的器官之一。I/R时富含黄嘌呤氧化酶的肠上皮细胞将产生大量氧自由基，而肠组织富含不饱和脂肪酸，最易发生脂质过氧化，从而破坏肠黏膜细胞的结构，导致肠黏膜屏障功能损害及通透性增加[3]。MPO是中性粒细胞内一种重要氧化酶，常用来表示组织内中性粒细胞的浸润程度。而激活的中性粒细胞释放大量氧自由基、蛋白酶等毒性物质，进一步加重组织损伤。本实验发现，I/R组大鼠血浆和肠黏膜MPO活性和脂质过氧化物终产物MDA含量增加，而抗氧化酶SOD活性显著降低，同时小肠病理损害严重，肠组织W/D和含水率均相应升高。结果提示，中性粒细胞在肠组织中聚集、活化，氧自由基脂质过氧化是肠I/R肠损伤的重要病理学机制。

二胺氧化酶(diamine oxidase，DAO)是存在于小肠黏膜上皮细胞内高活性的结构酶，是反映小肠黏膜结构功能的较为理想的指标[4]。肠I/R损伤后肠黏膜细胞坏死，释放DAO进入血液。因此血中DAO活性增高与肠细胞受损后细胞膜通透性增加及细胞坏死脱落相关[5]。本实验发现肠I/R损伤后血中DAO活性升高，肠组织DAO活性降低，并与肠组织MPO活性和MDA含量升高以及肠黏膜毛细血管通透性增高相一致。

七叶皂苷钠是从欧洲七叶树的干燥成熟果实(中药娑罗子)中提取，具有明显的消肿、抗炎、抗渗出、增加静脉张力及改善微循环的药理作用。本实验结果显示，动物在缺血前、再灌前、再灌后30min给予七叶皂苷钠后，血浆和肠黏膜MPO活性和MDA含量降低，SOD活性升高，同时反映肠损伤的血浆DAO活性明显降低，而肠组织DAO活性相应升高，肠损伤明显减轻。提示七叶皂苷钠对肠I/R肠过氧化损伤有一定的拮抗作用。分析其作用机制可能是通过减轻肠组织缺血缺氧，提高肠组织的抗氧化能力，抑制脂质过氧化，减轻中性粒细胞在肠组织的聚集与活化而发挥作用。

[1]李 焱，王永刚，刘学源.β-七叶皂苷钠的研究进展[J].神经病学与神经康复学杂志，2009，6(2):147-150.

[2]Tekin I O，Sipahi E Y，Comert M，et al.Low-density lipoproteins oxidized after intestinal ischemia/reperfusion in rats[J].J Surg Res，2009，157(1):e47-54.

[3]张 华，陈聪德，李仲荣，等.兔肠缺血/再灌注损伤的超微结构改变及红花的保护作用[J].中国应用生理学杂志，2009，25(4):472-475.

[4]WollinA，NavertH，Bounous G.Effect of intestinal ischemia on diamine oxidase activity in rat intestinal tissue and blood[J].Gastroenterol，1981，80(2):349-355.

[5]周 莎，许春娣，陈舜年，等.幼鼠结肠炎模型肠黏膜损伤与DAO的关系[J].中华儿科杂志，2006，44(2):93-95.