Peutz-Jeghers综合征中 Brg1蛋白的表达及临床意义

刘金霞，周 平，胡志民，赵 晓，时凤敏，林艳华，毛高平

(1河北北方学院，河北张家口 075000;2中国人民解放军空军总医院;3郑州大学第二附属医院)

Brg1基因是 SWI/SNF基因家族的重要组成成分，是近几年新发现的一种抑癌基因。本研究通过免疫组化方法检测 Brg1蛋白在小肠癌组织、Peutz-Jeghers综合征(PJS)息肉组织、正常小肠黏膜组织中的表达情况，探讨 Brg1基因在 PJS发生、发展以及癌变中的作用。

1 材料与方法

1.1 材料 选择空军总医院病理科 2004年 4月 ～2010年 9月归档的蜡块标本，其中 PJS息肉组织 72例，远离瘤体的小肠黏膜以及正常小肠黏膜组织 12例，小肠癌组织 30例。病理切片均经 2位以上病理医师确诊。

1.2 方法 选取石蜡组织块，脱蜡至水化后采用抗原修复处理的链霉素抗生物素蛋白 S-P法染色，DAB显色。Brg1蛋白免疫组化检测技术实验步骤按说明书进行。S-P试剂盒购自北京中杉金桥生物技术有限公司，Brg1抗体购自北京博奥森生物技术有限公司，用已知阳性片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。结果判断标准:Brg1染色阳性细胞为细胞核呈棕黄色至深褐色，部分细胞质同时为淡黄色和(或)黄色。其中阳性细胞 ＜25%为(-);25%～50%为阳性(+)，51%～75%为中等阳性(++)，＞75%为强阳性(+++)。

1.3 统计学方法 应用 SPSS17.0软件进行统计分析，组间差别采用四格表χ2检验。P≤0.05为差异有统计学意义。

2 结果

Brg1蛋白在 PJS息肉组织及正常小肠黏膜组织中均表达于细胞核，呈棕黄色至深褐色，多数部分细胞质同时为黄色。Brg1蛋白在小肠癌组织中为中等阳性或强阳性表达，在 PJS息肉组织中为中等阳性或弱阳性表达，在正常小肠黏膜组织中为弱阳性表达或不表达。Brg1蛋白的阳性表达在癌组织与PJS息肉组织之间差异有统计学意义(χ2=4.870，P＜0.05)，两者列联系数 C=0.206;PJS息肉组织与正常小肠黏膜组织比较差异也具有统计学意义(χ2=4.497，P＜0.05)。见表1。

表1 Brg1蛋白在 PJS息肉组织、小肠癌组织及正常小肠黏膜组织中的表达(例)

3 讨论

PJS是一种常染色体显性遗传性疾病，以多发性胃肠道错构瘤性息肉和皮肤黏膜的黑色素沉着为特征，因此又称黑斑息肉综合征和色素沉着综合征，可发生在消化道的任何部位，是胃肠道和胃肠道外肿瘤并出现多种恶性肿瘤的高危因素[1]。目前对PJS的发病机制还不是很明确，一般认为 PJS是一种常染色体单基因显性遗传性疾病，在 PJS家系患者中 STK11的突变率为 70%，散发病例中的突变率为 30%～67%。这就意味着在家族性和散发性 PJS中除 STK11突变外还有其他致病基因的存在。有报道 STK11/LKB1与 Brgl蛋白相关，Brgl蛋白是SWI1-SNF2复合蛋白的成员，具有 ATP依赖的解旋酶活性，在 SWI1-SNF2核染色质改造功能中发挥重要作用，同时是许多基因复制所必需的蛋白[2]。而LKB1的 N末端区域(1-146碱基)是与 Brgl解旋酶结合区域，虽然 Brgl未被 LKB1磷酸活化，但在体外实验中发现它的 ATP酶活性通过与 LKB1结合而增加，同时其阻滞细胞周期的作用也需要 LKB1的参与[3]。另外，在 p53依赖的凋亡 HT1080细胞中LKB1有过表达迹象，并且在纤维肉瘤细胞 HT1080裂解物中也发现 STK11/lKB1基因与 p53相耦联，暗示两者相关联或者存在相关联的蛋白。由此推测Brg1有可能是 PJS息肉发生发展的原因之一。

Murphy等研究发现，Brg1可以 E2F非依赖方式抑制 c-fos的转录[4，5]，表明它是一种重要的抑癌基因。另有研究发现，SWI/SNF家族与许多基因激活有关，也与转录抑制有关，它主要通过转录活化和抑制功能来控制肿瘤的生长[6]。不同的研究发现，Brg1基因在前列腺癌、宫颈癌及胃癌组织中高表达，而在肺癌组织及多种肿瘤细胞系中表达下调或缺失[7～10]。

本研究结果表明，Brg1蛋白在小肠癌组织和PJS息肉组织中高表达，二者阳性表达率明显高于正常小肠黏膜组织，且 Brg1蛋白在小肠癌组织中的阳性率高于PJS息肉组织。Brg1蛋白在小肠癌中的表达以强阳性或中等阳性为主，在 PJS息肉组织中的表达以中等阳性或弱阳性为主，而在正常小肠黏膜组织中以弱阳性表达或不表达为主。由此可推测Brg1很可能是PJS息肉发生发展和息肉癌变的一个关键性因素之一。Brg1基因作为一种抑癌基因，在PJS息肉组织和小肠癌组织中却表现为癌基因的活性，究其原因，可能是 Brg1基因在 PJS息肉组织和小肠癌组织中发生了功能丢失或转录激活作用，从而失去了原本的抑癌作用，进而在 PJS息肉发生发展及息肉癌变过程中起着一定的作用。

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