HPLC法测定盐酸马尼地平片中主药的含量

兰为民，徐炳欣，安卫平，王又新（.河南许昌市中心医院，许昌市 46000；.河南许昌市药品检验所，许昌市 46000）

盐酸马尼地平（Manidipine hydrochloride）为二氢吡啶类钙通道拮抗药，主要通过抑制血管平滑肌上L型钙通道，抑制钙离子内流，从而使血管平滑肌舒张，达到降压目的[1，2]。临床上盐酸马尼地平片主要用于治疗高血压合并2型糖尿病或者糖耐量降低的患者，是一种效果较好的心血管治疗药物[3，4]。药物含量是评价药品质量的重要指标之一，而目前尚未见用HPLC测定其含量的文献报道。为保证盐酸马尼地平片的质量，实现临床用药安全可靠，笔者尝试建立高效液相色谱法（HPLC）测定该制剂中主药含量。结果表明，所建立的方法简便、快速、准确、重复性好，可为建立其质量标准提供依据。

1 仪器与试药

LC-15C型HPLC仪、SPD-M10Avp二极管阵列检测器、LC-solution工作站（日本岛津公司）；AR 1140型电子天平（瑞士梅特勒-托利多仪器有限公司）；KQ3200E型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；BP211D十万分之一天平（德国Sartorius公司）。

盐酸马尼地平对照品（批号:090356.1，纯度:＞99.9%）、盐酸马尼地平片（批号:20100928、20101013、20101027，规格:10 mg∶100 mg）均由许昌恒生药业有限公司提供；甲醇、乙腈为色谱纯，二氯甲烷、乙醇、磷酸氢二钾均为分析纯，水为超纯水。

2 方法与结果

2.1 色谱条件

色谱柱:Hypersil BDS C18（200 mm×4.6 mm，5 μm），流动相:乙腈-0.04 mol·L－1K2HPO4（35 ∶65，V/V）；流速:1.0 mL·min－1；检测波长:228 nm；柱温:室温；进样量:20 μL。

2.2 对照品溶液的制备

精密称取盐酸马尼地平对照品适量，置于100 mL容量瓶中，加水溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为1.0 mg·mL－1对照品贮备液。

2.3 样品溶液的制备

分别取3批盐酸马尼地平片各20片，精密称重，然后将其置于干燥洁净的研钵中研磨均匀；分别称取相当于1片盐酸马尼地平的量（约0.12 g）置于100 mL容量瓶中，加入5 mL超纯水初溶解后，边摇边加入20 mL无水乙醇，充分溶解后以超纯水稀释至刻度并摇匀，用0.45 μm油水两用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.4 空白对照溶液的制备

按盐酸马尼地平片剂处方比例混合各辅料，称取相当于1片盐酸马尼地平片所用辅料（约0.12 g）置于100 mL容量瓶中，加入5 mL超纯水初溶解后，边摇边加入20 mL无水乙醇，充分溶解后以超纯水稀释至刻度并摇匀，用0.45µm油水两用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液即得。

2.5 专属性试验

取空白对照溶液、盐酸马尼地平对照品溶液和样品溶液进样分析，色谱见图1。

图1 高效液相色谱图A.空白对照溶液；B.对照品溶液；C.样品溶液；1.盐酸马尼地平Fig 1 HPLC chromatogramsA.blank control solution；B.control solution；C.sample solution；1.manidipine hydrochloride

2.6 线性关系考察

精密量取“2.2”项下对照品溶液0.5、1.0、1.5、2.0、2.5、3.0 mL，分别置于10 mL容量瓶中，用水稀释至刻度，摇匀，得到对照品浓度分别为0.05、0.10、0.15、0.20、0.25、0.30 mg·mL－1的溶液；进样，记录峰面积值。以对照品浓度（X）为横坐标，对照品峰面积（Y）为纵坐标，进行线性回归，得回归方程:Y＝310714X+1354.2（r＝0.9994），表明盐酸马尼地平检测浓度线性范围为0.05～0.30 mg·mL－1。

2.7 精密度试验

取“2.2”项下对照品溶液，按“2.1”项下色谱条件连续进样6次，其峰面积的RSD为0.84%（n＝6）。

2.8 稳定性试验

取“2.3”项下样品溶液（批号:20100928）在室温避光下放置，分别于0、2、4、8、12、24 h时测定含量。结果，样品含量的RSD为0.21%（n＝6），表明样品溶液在24 h内稳定性好。

2.9 加样回收率试验

取已知含量的、批号为20100928的盐酸马尼地平片20片，研磨均匀。精密称取相当于平均片重的盐酸马尼地平粉末（约0.12 g）6份，分别精密加入盐酸马尼地平对照品适量，置于100 mL容量瓶中。加入5 mL超纯水初溶解后边摇边加入20 mL无水乙醇，充分溶解后以超纯水稀释至刻度并摇匀，用0.45µm油水两用滤膜过滤，弃去初滤液，取续滤液，按“2.1”项下试验条件进样分析，计算回收率，结果见表1。

表1 加样回收率试验结果（n＝6）Tab 1 Results of recovery tests（n＝6）

2.10 样品含量测定

将3批样品溶液分别按“2.1”项下试验条件进样，计算含量，结果见表2。

表2 样品含量测定结果（%%，n＝3）Tab 2 Results of content determination for sample（s%%，n＝3）

3 讨论

应用二极管阵列检测器在线对盐酸马尼地平在190～400 nm波长范围内扫描，发现其在228、240 nm波长处均有较强吸收。以240 nm为检测波长，色谱峰峰形较差，基线波动明显；而采用228 nm作为检测波长，灵敏度更高，且基线平稳，峰形良好。

为了优化流动相，笔者在预试验中分别考察了以甲醇-水系统、甲醇-磷酸盐系统、乙腈-水系统、乙腈-磷酸盐系统为流动相时的色谱行为，结果发现含有甲醇的流动相体系在检测波长处有较大的本底吸收而使基线不稳；而采用乙腈加磷酸盐的流动相体系，则能获得良好的峰形，最终确定流动相为乙腈-0.04 mol·L－1K2HPO4（35∶65）。

有文献[5]报道，盐酸马尼地平对光照不稳定，所以在制备对照品及样品溶液时，需避光操作；在室温避光条件下，样品溶液在24 h内保持稳定。

[1]Mugellini A，Dobovisek J，Planinc D，et al.Efficacy and safety of delapril plus manidipine compared with enalapril plus hydrochlorothiazide in mild to moderate essential hypertension:results of a randomized trial[J].Clin Ther，2004，26（9）:1419.

[2]Roberto F.Rationale for use of the fixed combination of delapril and manidipine in the treatment of hypertension in patients with diabetes mellitus[J].Clinical Therapeutics，2007，29（2）:S54.

[3]Otero ML，Claros NM，Study Investigators Group.Manidipine versus enalapril monotherapy in patients with hypertension and type 2 diabetes mellitus:A multicenter，randomized，double-blind，24-week study[J].Clin Ther，2005，27（2）:166.

[4]Kang W，Lee DJ，Liu KH，et al.Analysis of benidipine enantiomers in human plasma by liquid chromatographymass spectrometry using a macrocyclic antibiotic（Vancomycin）chiral stationary phase column[J].Chromatogr B Analyt Technol Biomed Life Sci，2005，814（1）:75.

[5]谢 昕，王本杰，魏春敏，等.盐酸马尼地平的LC-MS法测定及药动学[J].中国医药工业杂志，2007，38（9）:653.