干扰素-α治疗慢性乙型肝炎的疗效观察*

胡旭东 程海林 田德安 曹荣 夏冰 柏涛 甘洪颖 黄少平

干扰素-α（IFN-α）具有广泛的抗病毒、抗肿瘤和免疫调节作用[1]。近年来，体外和临床研究表明IFN-α具有抗肝纤维化作用[2～6]。转化生长因子β1（TGF-β1）、肿瘤坏死因子 α（TNF-α）、金属蛋白酶组织抑制因子 1（TIMP-1）、基质金属蛋白酶 1（MMP-1）和 I型胶原等与肝纤维化的发生及进展关系密切。我们观察了IFN-α治疗慢性乙型肝炎患者对它们的影响。

资料与方法

一、研究对象 本院2009年3月至2010年6月住院的慢性乙型肝炎患者50例，男性38例，女性12例，年龄23岁～42岁，平均年龄31.6岁。诊断依据2005年《慢性乙型肝炎防治指南》的标准。患者血清HBsAg、HBeAg 阳 性 ，HBV DNA ≥1 ×105IU/ml；HBV DNA基因分型为B型；ALT大于正常值上限2倍，但小于正常值上限10倍；肝组织学检查符合慢性乙型肝炎的表现。所有患者甲、丙、戊型肝炎病毒标记物均为阴性，均无饮酒史。甲状腺功能及血常规正常。胃镜检查无食管胃底静脉曲张。所有患者在第1次肝穿刺前6个月内未应用过免疫调节剂或抗病毒药物，排除精神病、孕妇、哺乳期妇女及有严重心、肾疾病患者。

二、治疗方法 给予IFN-α（安达芬，安徽安科生物工程股份有限公司）6MU皮下注射，隔日1次，治疗6个月。

三、肝活检 取肝穿组织，采用免疫组化法检测TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas、MMP-1 和 I型胶原蛋白（一抗及羊抗兔二抗均购自武汉博士德生物工程有限公司）。应用HMIAS-2000高清晰彩色医学图文分析系统（武汉千屏影像技术有限责任公司）进行分析，计算每例样本平均阳性面积作为比较参数。

四，常规检测 采用ELISA法（上海凌云生物制品有限公司）检测HBV标记物；采用聚合酶链反应法检测HBV DNA（上海生工生物工程技术服务有限公司）；采用ELISA法检测透明质酸（HA）、层粘连蛋白（LN）、Ⅲ型前胶原（PCⅢ）及Ⅳ型胶原（Ⅳ-c，上海凌云生物制品有限公司）。

五，统计学处理 应用SPSS17.0统计软件包，计量资料以表示，采用配对t检验，等级计数资料采用秩和检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

结果

一、血清学和病毒学应答情况 在治疗结束时，27例（54%）患者发生HbeAg/HbeAb血清转换，37例（74%）患者HBV DNA转阴。

二、治疗前后血清肝纤维化指标的变化 见表1。

表1 治疗前后血清肝纤维化指标的变化（，ng/m l）

表1 治疗前后血清肝纤维化指标的变化（，ng/m l）

①P＜0.01

例数 HA IV-C LN PCⅢ治疗前 50 256±63 213±57 135±58 46±27治疗后 50 82±42* 91±38* 95±35* 28±11*

三、肝组织学变化情况 见表2。

表2 治疗前后肝纤维化分期和炎症活动度分级情况

四、肝组织 TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas、MMP1和I型胶原表达的变化 在治疗6个月结束时，肝组织 TGF-β1、TNF-α、TIMP1、Fas和 I型胶原的表达明显下降，MMP1表达增强（图 1～6）。

图1 肝组织TGF-β1的表达（SP，100×）

图2 肝组织TNF-α 的表达（SP，100×）

图3 肝组织Fas的表达（SP，100×）

图4 肝组织I型胶原的表达（SP，100×）

图5 肝组织TIMP1的表达（SP，100×）

图6 肝组织MMP1的表达（SP，100×）；

讨论

IFN-α作为最主要的抗病毒药物之一，不仅具有抗病毒、抗肿瘤及调节免疫等作用外，还具有抗肝纤维化作用[7]。肝细胞的损伤是肝纤维化发生的始动因素，乙型肝炎病毒感染可使机体免疫系统活化，产生并释放各种细胞因子，诱导肝内细胞合成大量TNF-α。TNF-α刺激HSC合成ECM，导致肝纤维化[8]，而在肝纤维化的进展期，主要通过Fas系统介导肝细胞凋亡作用引起肝细胞持续损伤，促进肝纤维化进一步进展[9]。

本研究结果显示INF-α抗病毒治疗六个月后，74%患者病毒转阴，54%患者发生血清学转换，TNF-α表达水平明显下降，肝组织炎性程度也明显下降。治疗前Fas表达丰富，以肝细胞为主，INF-α抗病毒治疗6个月后Fas表达明显下降，以间质为主，提示干扰素可能通过控制病毒载量以减少病毒对肝细胞的免疫损害，减轻肝脏炎症反应及坏死，并抑制间质细胞（主要是HSC）的活化与增殖，并可能促使间质细胞的凋亡，从而起到抗肝纤维化的作用。

HSC的激活、增殖以及细胞外基质的沉积是肝纤维化的重要环节，而TGF-β1在肝纤维化的启动、进展乃至肝硬化的形成中发挥了核心作用。HSC活化、增殖，向肌成纤维细胞转化，通过旁分泌与自分泌作用合成分泌多种ECM成分，同时合成、释放大量TIMPs。TIMPs在组织中的主要作用是通过与MMPs按1∶1比例的结合而抑制MMPs的活性，从而阻止ECM的降解，形成或促进肝纤维化[10]。目前已发现的TIMPs有4种，在判定肝纤维化及肝组织学改变方面，TIMP-1的意义较大。MMP1和TIMP1在ECM的降解中起重要作用[11，12]。目前发现在病损肝脏中TIMP-1明显增高，出现的时间较早、表达较强。因此，越来越多的研究人员把它看作是肝纤维化的诊断指标[13]。本研究发现经抗病毒治疗6个月后，TGF-β1、I型胶原和TIMP1表达明显减少，而MMP1表达则升高，提示干扰素α可能通过阻断TGF-β1活化HSC途径，减少HSC合成细胞外基质、I型胶原及TIMPs，使MMPs的活性增强，加强ECM的降解，从而改善肝纤维化。

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