尿蛋白电泳及血β2微球蛋白联合检测在小儿肾小球损伤中的应用

曹淑艳, 柴伟, 牛广华, 宫莉

肾病综合征(简称肾病)为一种不同于肾小球肾炎的原发性肾小球疾病,多发于学龄前儿童,也可见于青年。临床上以大量蛋白尿、严重水肿、低蛋白血症和高脂血症为特征。病程长,一般无血尿、高血压及肾功能不全[1]。一直以来,对于尿蛋白定性检测阳性的肾病患儿,要想明确诊断肾脏损伤的部位,通常采取的检查方法是肾活检,但肾活检是有创性诊断技术,患者与家属可能心存顾虑,而且大部分中小医院无条件开展此项技术。而尿液成分的分析,尤其是其尿蛋白电泳蛋白成分分析,已成为早期肾脏疾病诊断的方法[2]。笔者应用十二烷基硫酸钠-琼脂糖凝胶(SDS-AGE)技术结合血β2-MG测定对肾小球损伤患儿进行蛋白尿的分析,现报道如下。

1 资料与方法

1.1 临床资料 将2009-01/12辽宁中医药大学第一附属医院儿科收治50例初治肾病住院患儿作为观察组,其中男31例,女29例;年龄2～14岁,平均(5.20±4.50)岁。另随机抽取沈阳市儿童医院20例健康体检儿童作为对照组,其中男12例,女8例;年龄3～14岁,平均(5.25±3.82)岁。观察组和对照组儿童年龄和性别构成比较差异无统计学意义(P>0.05),具有可比性。

1.2 诊断标准 参照《内科学》[1]中肾病诊断标准。1.3 纳入标准 (1)符合肾病的诊断标准;(2)年龄2～14岁;(3)监护人知情同意。

1.4 排除标准 合并心、脑、肝和造血系统等严重原发性疾病者。

1.5 检测方法

1.5.1 仪器 尿蛋白电泳采用HYDRASYS全自动电泳仪(法国sebia);血β2-MG用全自动生化分析仪检测(日立7600-020)。

1.5.2 试剂 HYDRASYS全自动电泳仪配套试剂盒(Hydragel proteinurie Kit);β2-MG免疫透射比浊法测定试剂盒(浙江威特曼生物科技有限公司)。

1.6 方法 采集新鲜晨尿10m L,如尿蛋白浓度>2 g/L,用生理盐水稀释至2 g/L。SDS-AGE法测定尿蛋白电泳按说明书进行,取200μL SDS-嗅酚蓝稀释液加入80μL尿液,混匀。取5μL加入凝胶孔中,扩散30m in于电泳仪上电泳,取出凝胶片烘干、染色、脱色、固定、扫描、报告结果。免疫透射比浊法测定血β2-MG。

1.7 结果判定 尿蛋白电泳 经SDS-AGE电泳后条带图出现4种:(l)生理性蛋白尿,其图形为少量淡染的单一的白蛋白带,其他的区带均未出现;(2)小分子蛋白尿(肾小管性),其图形为除白蛋白区带外,在凝胶片阳极与白蛋白区带之间出现其他的蛋白区带,分子量<70 kDα;(3)大分子蛋白尿(肾小球性),其图形为除白蛋白区带,在加样点与白蛋白之间出现其他蛋白区带,分子量≥70 kDα;(4)混合性蛋白尿,其蛋白特征为肾小管及肾小球的蛋白同时并存。

1.8 统计学方法 采用SPSS 12.0统计学软件进行数据分析,计量资料以 x±s表示,组间比较采用配对t检验,P<0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 对照组尿蛋白电泳检测结果 用干化学试纸带方法检测20例健康儿童尿蛋白定性,18例为阴性,SDS-AGE法测定尿蛋白电泳无任何区带显示,2例蛋白定性试验阳性,尿蛋白电泳图形为可见少量白蛋白淡染区带,对照组尿蛋白电泳测定未出现球性蛋白和管性蛋白。

2.2 观察组尿蛋白电泳检测结果 用干化学试纸带方法检测对50例小儿肾小球损伤组患儿做尿蛋白定性,分别为+～+++,SDS-AGE法测定尿蛋白电泳,36例出现球性蛋白占72%,14例未出现球性蛋白占28%。

2.3 两组血β2-MG检测结果 观察组血β2-M(3.24±1.51)mg/L,对照组(2.10±0.65)mg/L,两组比较差异有统计学意义(P<0.05)。

2.4 观察组尿蛋白电泳与血β2-MG检测结果 见表1。

表1 观察组尿蛋白电泳与血β2-MG检测结果

表1结果说明,两种检验方法中尿蛋白电泳出现球性蛋白区带和血β2-M增高可以反映肾小球损伤。

3 讨论

SDS-AGE尿蛋白电泳可区分尿中不同蛋白的组分[1,3]。蛋白质在普通聚丙烯酰胺凝胶中的电泳速度取决于蛋白质分子的大小、分子形状和所带电荷的多少。SDS(十二烷基磺酸钠)是一种去污剂,可使蛋白质变性并解离成亚基。当蛋白质样品中加入SDS后,SDS与蛋白质分子结合,使蛋白质分子带上大量的强负电荷,并且使蛋白质分子的形状都变成短棒状,从而消除了蛋白质分子之间原有的带电荷量和分子形状的差异。这样电泳的速度只取决于蛋白质分子量的大小,依据分子量不同可分为低分子、中分子、和高分子3组蛋白质。通常蛋白尿分为肾小球型、肾小管型、混合型、生理型、溢出型蛋白尿。尿液成分改变通常是肾脏疾病,尤其是肾小球病变最早的临床表现[3,4]。高分子型蛋白尿的出现常被认为是肾小球存在病变[5]。本文20例对照组中18例尿蛋白电泳无任何区带,说明用干化学试纸带方法检测尿蛋白阴性采用SDS-AGE法测定尿蛋白电泳方法不被检出,而2例少量白蛋白淡染区带,为生理性蛋白尿。50例肾小球损伤患儿尿蛋白电泳,36例出现球性蛋白,14例未出现球性蛋白,有可能是因为肾小球损伤比较轻,肾脏排出少量的白蛋白或排出微量肾小球性蛋白而未被检出。

β2-M 是由99个氨基酸构成的多肽,不含糖基。分子量小,通过肾小球滤过后在近曲小管几乎全部被重吸收,仅微量从尿中排出。血β2-M增高可反映肾小球滤过功能受损[6]正常人体内β2-M含量是恒定的。有文献报道检测血中β2-M水平是评价肾小球损伤的敏感指标[7]。50例肾小球损伤患儿血β2-M检测水平都显著高于对照组(P<0.05),可见当肾小球损伤时,血β2-M 滤出率减少,故血β2-M水平增高。但血β2-M受许多全身性疾病如类风湿关节炎、红斑狼疮、白血病等影响β2-M 的产生增加,此时并不反映肾小球的损害[8]。

陈庆海等[9]研究肾病理活检诊断与SDS-AGE尿蛋白电泳结果比较,总体符合率为94.4%。可见尿蛋白电泳和血β2-M两种指标联合检测能提高肾小球损害检出率,对患儿身体损伤较小,且取材方便,报告快速准确,可作为肾小球损伤诊断的特异性的实验室指标。

[1] 徐明瑞,李日东,李振东,等.内科学[M].北京:人民教育出版社,1985:382-383.

[2] 钟月华,黄之虎,谭建荣,等.非浓缩尿蛋白电泳及其在肾脏疾病诊断中的应用[J].广西医科大学学报,2004,21(1):75-76.

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[9] 张小玲,杨丽媛.尿蛋白电泳在小儿肾病诊断中的应用价值[J].实用医学杂志,2010,26(2):279-281.