盐酸小檗碱磷脂复合物在兔体内的药动学及相对生物利用度研究

韩文莉，陆巍，何东平，龙友琦，尚京川

（重庆医科大学药学院，重庆市 400016）

盐酸小檗碱磷脂复合物在兔体内的药动学及相对生物利用度研究

韩文莉＊，陆巍，何东平，龙友琦，尚京川#

（重庆医科大学药学院，重庆市 400016）

目的：考察盐酸小檗碱磷脂复合物在兔体内的药动学及相对生物利用度。方法：将6只兔随机均分为A、B组，分别灌服盐酸小檗碱原料药和盐酸小檗碱磷脂复合物（50mg·kg－1，以盐酸小檗碱计），于给药前及给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h股静脉取血，给药1周后，2组交叉给药，相同时间点取血，采用高效液相色谱法测定其中盐酸小檗碱浓度，并计算药动学参数及相对生物利用度。结果：血浆中盐酸小檗碱检测浓度的线性范围为20.0～640.0μg·L－1（r＝0.9996）；A组和B组的tmax分别为（0.24±0.12）、（0.23±0.27）h，t1/2β分别为（5.01±0.17）、（3.80±0.16）h，cmax分别为（59.88±6.10）、（194.26±8.60）μg·L－1，AUC0～24h分别为（446.98±10.50）、（1110.12±28.40）μg·h·L－1；盐酸小檗碱磷脂复合物相对于其原料药的相对生物利用度为（273.3±3.40）%。结论：盐酸小檗碱磷脂复合物与其原料药比较，增加了血浆中药物浓度，显著提高了盐酸小檗碱的相对生物利用度。

盐酸小檗碱；磷脂复合物；兔；药动学；相对生物利用度；高效液相色谱法

小檗碱（Berberine）属季铵类异喹啉生物碱，其盐酸盐在临床上一直作为清热解毒、抗菌止泻药应用。近年来，随着研究的不断深入，其临床作用已扩展到心血管疾病、胃肠神经官能症、糖尿病等治疗方面[1，2]。由于小檗碱具有口服吸收差、生物利用度低、大剂量服用会产生严重的胃肠道反应等[3]缺点，很大程度上限制了其临床应用。为了提高盐酸小檗碱的口服生物利用度，笔者研制了一种新的给药系统——盐酸小檗碱磷脂复合物[4]。为评价该磷脂复合物在兔体内的药动学和生物利用度，本文采用自身对照单剂量双周期交叉给药方案，以高效液相色谱（HPLC）法测定其血浆中的药物含量。

1 仪器与材料

1.1 仪器

1100 系列HPLC仪和G1314A紫外检测器（美国Agilent公司）；TGL-16G高速离心机（上海安亭科学仪器厂）；SK-1涡旋混合仪（江苏国华仪器厂）；BF2000氮气吹干仪（北京八方世纪科技有限公司）。

1.2 试药

盐酸小檗碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110713-200208，纯度：98%）；参比制剂：盐酸小檗碱原料药（重庆医科大学药学院自制，批号：090425，含量：99.2%）；受试制剂：盐酸小檗碱磷脂复合物（重庆医科大学药学院自制，批号：0900516，含量：48.7%）；乙腈为色谱纯，磷酸氢二钾、十二烷基磺酸钠等均为分析纯，水为超纯水。

1.3 动物

新西兰大白兔6只，♀♂各半，体重（2.75±0.25）kg，由重庆医科大学动物实验中心提供，动物生产许可证号：SCXK（渝）2007-0001。

2 方法与结果

2.1 给药方案与血样采集

采用自身对照单剂量双周期交叉给药方案，将6只大白兔随机均分为A、B组，禁食12h后，A组灌服盐酸小檗碱原料药，B组灌服盐酸小檗碱磷脂复合物，给药剂量均为50mg·kg－1[5]（以盐酸小檗碱计），服药后4h内禁食，于给药前及给药后0.5、1、1.5、2、3、4、6、8、10、12、24h股静脉采血1.5mL，给药1周后2组交叉给药，相同时间点取血。将所有采集的血样均置于肝素化离心管中，3000r·min－1离心10min，分离上层血浆，－20℃冷冻保存待测。

2.2 色谱条件[5]

色谱柱：Hypersil ODS（150mm×4.6mm，5μm）；流动相：乙腈-0.05mol·L－1磷酸氢二钾（含0.01mol·L－1十二烷基磺酸钠）＝50∶50（V/V）；检测波长：345nm；流速：1mL·min－1；柱温：25℃；进样量：50μL。

2.3 血浆样品处理

精密量取待测血浆样品500μL，置于离心管中，加入800μL乙腈，涡旋振荡2min，14000r·min－1离心15min，取上清液800μL于另一离心管中，50℃水浴中氮气吹干，残留物加流动相400μL溶解，涡旋振荡1min，14000r·min－1离心10min，取上清液50μL进样。

2.4 方法学验证

2.4.1 专属性考察。分别取空白血浆、空白血浆+盐酸小檗碱、血浆样品（给药后1.5h），按“2.3”项下方法处理，进样分析，记录色谱。结果表明，盐酸小檗碱的保留时间约为5min，与血浆中内源性杂质峰分离良好，空白血浆中的内源性物质对盐酸小檗碱测定无干扰。色谱详见图1。

图1 高效液相色谱图A.空白血浆；B.空白血浆+盐酸小檗碱；C.血浆样品；1.盐酸小檗碱Fig1 HPLC chromatogramsA.blank plasma；B.blank plasma spiked with berberine hydrochloride；C.plasma sample；1.berberine hydrochloride

2.4.2 标准曲线的制备。精密称定烘干至恒重的盐酸小檗碱原料药适量，加甲醇制备成16mg·L－1的贮备液。精密量取一定量的贮备液，置于5mL具塞离心管中，加入兔空白血浆制备成含盐酸小檗碱20.0、40.0、80.0、160.0、320.0、640.0μg·L－1的系列血浆标准工作液，各取500μL按“2.3”项下方法处理，进样测定，以峰面积（A）对盐酸小檗碱浓度（c）进行线性回归，得回归方程：A＝1.880c－5.334（r＝0.9996，n＝5）。结果表明，血浆中的盐酸小檗碱在20.0～640.0μg·L－1浓度范围内线性关系良好，方法的最低检测限为10μg·L－1（S/N≥3）。

2.4.3 方法回收率与精密度试验。分别取500μL低、中、高（20.0、320.0、640.0μg·L－1）3种浓度的血浆样品，按“2.3”项下方法处理，进样测定，同一浓度同日内测定5次，连续测定5d，计算方法回收率和日内、日间RSD。结果，低、中、高3种浓度的平均方法回收率为92.0%～101.6%，RSD≤3.9%；日内、日间RSD均≤4.5%。

2.4.4 提取回收率试验。分别取500μL低、中、高（20.0、320.0、640.0μg·L－1）3种浓度的血浆样品，按“2.3”项下方法处理，进样测定，将经提取后血浆中盐酸小檗碱的峰面积（Ai）与流动相稀释成的对应浓度的盐酸小檗碱的峰面积（Ai′）相比较，计算提取回收率。结果，低、中、高3种浓度的平均提取回收率为80.4%～85.6%，RSD≤3.5%。

2.5 药动学参数

利用3p97药动学软件处理测得的药-时数据，选择最佳药动学模型，计算相应的药动学参数，其中tmax和cmax为实测值，AUC0～24h由梯形法求得。采用t检验对药动学参数进行统计分析，以盐酸小檗碱原料药为参比计算盐酸小檗碱磷脂复合物的相对生物利用度Fr（Fr＝AUC受试制剂/AUC参比制剂×100%）。2种制剂灌服后的药-时曲线详见图2，药动学参数详见表1。

图2 2种制剂灌服后的药-时曲线（±s，n＝6）Fig2 Mean plasma concentration-time curve of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

表12 种制剂的药动学参数（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

表12 种制剂的药动学参数（±s，n＝6）Tab1 Pharmacokinetic parameters of 2kinds of preparation（s±s，n＝6）

药动学参数Ka/h－1 t1/2ka/h t1/2β/h tmax/h cmax/μg·L－1 AUC0～24h/μg·h·L－1 Fr（0～24h）/%盐酸小檗碱原料药21.42±0.170.03±0.075.01±0.170.24±0.1259.88±6.10446.98±10.50盐酸小檗碱磷脂复合物20.87±0.050.03±0.113.80±0.160.23±0.27194.26±8.601110.12±28.40273.3±3.40

由表1可知，与盐酸小檗碱原料药比较，盐酸小檗碱磷脂复合物的tmax略有缩短，cmax升高 3.24倍，Fr（0～24h）为（273.3±3.40）%。2种制剂的药动学参数cmax、AUC0～24h比较存在显著性差异（P＜0.05），说明盐酸小檗碱制成磷脂复合物后，吸收速度和程度均明显提高。

3 讨论

磷脂复合物是药物和磷脂分子通过电荷迁移作用而形成的较为稳定的化合物或络合物。作为一种新型的药物制剂，其可改变母体药物的理化性质，能显著提高药物的脂溶性，增强药物吸收，提高药物相对生物利用度，减少药品不良反应，而且其制备方法简单，成本低廉，近年来在药物制剂方面应用逐渐增多，特别是在中药磷脂复合物的研究方面取得了较大的成就。这对于探索我国天然药物、加速传统中药制剂的现代化研究进展、提高中药工业技术水平及临床应用质量，均具有重要的理论和实际意义[6]。

在选择实验动物时最初考虑选择更为接近人体生理构造和功能的实验动物Beagle犬，但是经查阅文献发现，曾经有研究者[3]用Beagle犬进行盐酸小檗碱的药动学研究，结果发现尽管加大给药剂量直至发生严重胃肠道反应，血浆中盐酸小檗碱浓度仍很低。这可能是由于盐酸小檗碱在Beagle犬体内吸收较差，同时体内分布很广，因此导致在血液中的分布很少，血药浓度太低，不利于其含量测定。因此本实验初步选择新西兰大白兔作为实验动物，结果表明，在新西兰大白兔血浆中盐酸小檗碱在20.0～640.0μg·L－1浓度范围内线性关系良好。

本实验结果表明，与盐酸小檗碱原料药比较，盐酸小檗碱磷脂复合物的cmax和AUC0～24h显著提高，表明盐酸小檗碱磷脂复合物显著提高了盐酸小檗碱的相对生物利用度。但其复合物的分析鉴别方法以及吸收机制等，还有待进一步研究和探索。

[1] 李 娜，陈琴华.黄连-小檗碱的药理作用研究概况[J].中国临床医药研究杂志，2006，11（159）：28.

[2] 崔学军.黄连及其有效成分的药理研究进展[J].中国药师，2006，9（5）：469.

[3] 盛美萍，孙 淇，王 宏.盐酸小檗碱在Beagle狗静脉注射和口服药动学研究[J].中国药理学通报，1993，9（1）：64.

[4] 左巨波，尚京川.盐酸小檗碱磷脂复合物的制备和理化性质研究[J].中国新药杂志，2009，18（14）：1372.

[5] 温 悦，贺英菊，罗巍伟.反相高效液相色谱法测定兔血浆中盐酸小檗碱的浓度[J].中国药房，2005，16（12）：900.

[6] 左巨波，尚京川.中药磷脂复合物的研究进展[J].中国药房，2007，18（27）：2149.

Pharmacokinetics and Relative Bioavailability Study of Berberine Hydrochloride Phytosome in Rabbits

HAN Wen-li，LU Wei，HE Dong-ping，LONG You-qi，SHANG Jing-chuan
（College of Pharmaceutical Sciences，Chongqing Medical University，Chongqing 400016，China）

OBJECTIVE：To study pharmacokinetics and relative bioavailability of berberine hydrochloride phytosome in rabbits.METHODS：6rabbits were randomly divided into group A and group B.Two groups were given berberine hydrochloride or berberine hydrochloride phytosomes（50mg·kg－1of berberine hydrochloride）respectively.Blood samples of femoral vein were collected before administration and 0.5，1，1.5，2，3，4，6，8，10，12，24after administration.After one week of treatment，therapy of two groups intercrossed.The concentrations of berberine hydrochloride in plasma were determined by HPLC.The pharmacokinetic parameters and relative bioavailability were calculated.RESULTS：The linear range of berberine hydrochloride was 20.0～640.0μg·L－1（r＝0.9996）.The pharmacokinetic parameters of group A vs.group B were as follows：tmax：（0.24±0.12）h vs.（0.23±0.27）h，t1/2β：（5.01±0.17）h vs.（3.80±0.16）h，cmax：（59.88±6.10）μg·L－1vs.（194.26±8.60）μg·L－1，AUC0～24h：（446.98±10.50）μg·h·L－1vs.（1110.12±28.40）μg·h·L－1.The relative bioavailability of berberine hydrochloride phytosome was（273.3±3.40）%，compared with raw material.CONCLUSIONS：Compared with raw material，berberine hydrochloride phytosomes significantly increases the plasma concentration of berberine hydrochloride and improves the relative bioavailability of it.

Berberine hydrochloride；Phytosome；Rabbits；Pharmacokinetics；Relative bioavailability；HPLC

R969.1

A

1001-0408（2011）17-1564-03

＊硕士研究生。研究方向：体内药物分析。电话：023-68485048。E-mail：0904hanwenli@163.com

#通讯作者：副教授。研究方向：体内药物分析。电话：023-68485048。E-mail：sjc20@126.com

2010-07-14

2010-09-19）