海南暗罗枝和叶中总三萜酸的含量测定

翟明君 ， 刘冰晶 ，2， 陈光英 ，2*， 简 蓝 ， 毕和平 ，2， 鲍长余 ，2， 孔杜林 ，2

（1.海海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

海南暗罗枝和叶中总三萜酸的含量测定

翟明君1， 刘冰晶1，2， 陈光英1，2*， 简 蓝1， 毕和平1，2， 鲍长余1，2， 孔杜林1，2

（1.海海南师范大学 化学与化工学院，海南 海口 571158；2.海南师范大学“省部共建-热带药用植物化学”教育部重点实验室，海南 海口 571158）

建立了测定海南暗罗枝和叶中总三萜酸含量的方法.以乌苏酸为对照品，以质量分数5%香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液系统为显色剂，采用紫外分光光度法在546 nm波长处测定样品的吸光度.乌苏酸对照品在0.20～1.60 g·m L-1范围内呈良好线性关系，回归方程为Y=0.1548C+0.0286，r=0.9993.海南暗罗枝和叶中的总三萜酸含量分别为0.72%和1.56%.本法操作简便，结果可靠，重复性好，可用作海南暗罗中总三萜酸的含量测定.

海南暗罗；三萜酸；紫外分光光度法

海南暗罗（Polyalthia laui）隶属番荔枝科（An⁃nonaceae）暗罗属（Polyalthia genus）植物，系海南岛的特有种[1].国内外学者从暗罗属的20多种植物中得到了多种萜类[2-3]、生物碱[4]等多种类型化合物.三萜酸类化合物具有广泛的药理作用，如抗肿瘤、保肝、解毒、抗衰老等作用[5-7].目前未见海南暗罗中总三萜酸的含量测定报道.药材中总三萜酸的测定通常采用紫外分光光度法和高效液相色谱法[8-9].本实验以乌苏酸为对照品，采用质量分数5%香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液为显色系统，采用紫外分光光度法测定海南暗罗枝中总三萜酸的含量，为海南暗罗的进一步开发利用提供科学依据.

1 仪器、试剂与材料

UV2600紫外可见分光光度计（上海国美科技仪器有限公司）；EYEL4OSB-2100旋转蒸发仪（日本，东京理化）.

95%乙醇，无水乙醇，香草醛，高氯酸，冰醋酸等均为国产分析纯，乌苏酸标准品购自上海顺勃生物工程有限公司（纯度大于98.0%）.

海南暗罗采自海南省昌江县，经霸王岭自然保护区陈庆工程师鉴定为番荔枝科暗罗属植物Poly⁃althia laui，标本现存于海南师范大学省部共建-热带药用植物化学教育部重点实验室.

2 方法与结果

2.1 对照品溶液制备

准确称取105℃干燥至恒重的乌苏酸对照品20.0 mg，置于50 mL容量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀，得浓度为0.400 g/L溶液，精确移取溶液2.5 mL，定容至100 mL，得浓度为0.01 g/L的对照品溶液.

2.2 供试品溶液制备

将粉碎过的海南暗罗的枝和叶于50℃烘箱干燥24 h，各准确称取2.00 g，分别用无水乙醇浸泡2 h，索式提取8 h，提取液用TLC测定,至与浓H2SO4不显紫色为止，提取液减压回收乙醇，放冷至室温，用无水乙醇定容至100 mL.枝和叶的提取液分别准确吸取5.0 mL和2.5 mL于100 mL容量瓶中，用无水乙醇定容至刻度，摇匀，制得供试品溶液.

2.3 测定波长选择

取对照品溶液5.0 mL，加质量分数为5%香草醛-冰醋酸0.2 mL和高氯酸0.8 mL显色后，进行全波长扫描，随行空白对照.结果表明，对照品溶液在546 nm处有最大吸收峰（见图1），故选择546 nm作为样品测定的波长.

图1 对照品紫外可见吸收图Fig.1 UV absorption spectrum of reference substations

2.4 标准曲线绘制

准确吸取对照品溶液 0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.6 mL分别置于10 mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却，加入5%香草醛-冰醋酸溶液0.2 mL，和高氯酸溶液0.8 mL，将容量瓶放人70℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容到刻度，摇匀.在546 nm波长处测定吸光度值A，随行进行空白对照.以乌苏酸含量为横坐标，吸光度A为纵坐标，作图得到标准曲线（见图2），标准方程为Y=0.1548C+0.0286，式中：C为浓度（μg·m L-1），Y为吸收度值A.相关系数:r=0.9993.

图2 标准曲线图Fig.2Standard curve

2.5 稳定性实验

取对照品和样品溶液各5.0 mL，按照2.4项下方法进行，每隔15 min测定一次，结果见表1，RSD值较小，分别为3、7.4、1.07、1.51，表明本法在1.5 h内基本稳定.

2.6 精密度实验

取同一批样品液，进行5次平行实验，测定含量，结果见表2,叶和枝的分别为RSD=1.07%（n=5）和RSD=1.51%（n=5），精密度良好.

2.7 加样回收实验

准确量取5份已知含量的海南暗罗叶和枝提取液各5.0 mL，准确加入一定量的的熊果酸对照品，余下部分按2.4项下方法操作，实验结果见表3.实验表明，叶提取物平均回收率99.56%，RSD=1.85%（n=5），枝提取物平均回收率100.76%，RSD=1.95%（n=5）.

2.8 样品含量测定

准确量取各3份海南暗罗叶和枝的样品溶液5.0 mL于50.0 mL容量瓶中，沸水浴挥去无水乙醇，冷却后加入5%香草醛-冰醋酸溶液1.0 mL，高氯酸4.0 mL，容量瓶放人70℃水浴中加热15 min，冷却至室温，用冰醋酸定容，摇匀，余下部分按2.4项方法操作.实验和计算结果见表4，海南暗罗叶中总三萜酸含量为1.564%，RSD=0.12%（n=3），枝中总三萜含量为0.717%，RSD=0.21%（n=3）.

表1 稳定性实验Tab.1 Stability test

表2 精密度实验Tab.2 Precision test

表3 加样回收实验Tab.3Recovery test

表4 样品测量结果Tab.4Determination results of samples

3 讨论

本文以无水乙醇作为溶剂，以香草醛-冰醋酸和高氯酸溶液系统为显色剂，采用紫外分光光度法测定总三萜酸，该法简便可靠，结果稳定，重复性好.本法与比色法[10]比较，减化了实验步骤，缩短了实验时间.本文测得海南暗罗枝和叶中总三萜酸含量分别为0.717%和1.564%，其中叶中总三萜酸含量较多，为进一步开发利用海南暗罗提供了科学依据.

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Determination of the Content of Triterpenoidic Acid in Stems and Leaves of Polyalthia laui

ZHAI Mingjun1，LIU Bingjing1，2，CHEN Guangying1，2*，JIAN Lan1，BI Heping1，2，BAO Changyu1，2，KONG Dulin1，2
（1.College of Chemistry and Chemical Engineering，Hainan Normal University，Haikou571158，China；
2.Key Laboratory of Tropical Medicinal Plant Chemistry of Ministry of Education，Hainan Normal University，Haikou571158，China）

A method for the determination of the total triterpenoidic acid in the stems and leaves ofP.lauiwas estab⁃lished.The total triterpenoidic acid in the stems and leaves of M.Paniculata Lauiwere determined by Ultraviolet Spec⁃trophotometric method at 546 nm wavelength.The result showed a good linear relationship at the range of 0.20～1.60 μg·m L-1,and the curve was Y=0.1548 C+0.0286，r=0.9993.The content of stems was 0.72%and of leaves was 1.56%.This spectrophotometric method is simple,reproducible and suitable for the determination of total triterpenoidic acid.

Polyalthia Laui；Triterpenoidic acid；Ultraviolet spectrophotometric method

R 284.1

A

1674-4942（2010）04-0407-03

2010-05-21

海南省高校硕士研究生创新科研课题（Hxwsy2009-10）；国家大学生创新实验项目（101165815）

*通讯作者

毕和平